Способ получения днк векторов на основе бактериофага лямбда

Номер патента: 1820914

Опубликовано: 07.06.1993

Авторы: Барбара, Джон, Нарендра, Рой, Саверио

МПК: C12N 15/84

Метки: двудольных, растений, сульфонилмочевине, устойчивых

...5 мин перед тем, как удалить раствор, Затем чашки закрепляют лентой Тее Таре (ЗЬалтгосМ Ясепбйс ЯресаИу) с двух сторон чашки и инкубируют в течение 2 суток при смешанном освещении для растений, а именно флуоресцентном и "бго аги ЯЬо" (Оепега Еес(гс) при температуре около 25 С.Чтобы освободить растительные культуры от АцгоЬастегогп и отобрать.для выращивания трансформированных клеток томата, зксплантаты семядолей переносят в(РЬагваса) промыванием 5 раз колоночным буферным раствором (100 мМ КН Р 04, р Н 7,5, 0,5 мМ МдС 2, 10% глицерина, 1 мМ пирувата).5, Для засева зкстракционного супернатанта прибавляют холодный насыщенный раствор (Н 4)2 Я 04 с получением 50% фракции. Инкубируют на льду в течение 30 мин,6, Центрифугируют экстракт в...

Номер патента: 150590

Опубликовано: 01.01.1962

Авторы: Брунс, Готовцева, Колыгина, Левитов, Либинсон, Савицкая, Шелленберг

МПК: C12P 37/06

Метки: 6-аминопенициллановой, выделения, кислоты

...6-аминопенициллановая кислота.П р и м е р. 5000 мл раствора с концентрацией 6-аминопенициллановой кислотой 4000 ед/мл, полученного в результате ферментативного гидролиза бензил-пенициллина и освобожденного от клеток микроорганизма а 1 са 11 депез, подкисляют 40%-ной серной кислотой до рН, равного 2,1, Раствор пропускают через колонку, заполненную 50 г (в пересчете на сухую смолу) катионита КУ, содержащего 3% дивинилбензола. Катионит берут в натриевой форме. Размер частиц катионита - 0,5 - 1,0 мм. Время пропускания раствора 5 час, Количество 6-аминопенициллановой кислоты, поглощенное 1 г сухой смолы, - 350000 ед, Ка150590тионит промывают дистиллированной водой. Элюцию 6-аминопенициллановой кислоты со смолы ведут 0,5 н. раствором едкого...

Номер патента: 1040791

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Физической структурыплазмидную ДНК выделяют ускореннымметодом (К 1 е 1 п Р,1 ейа 1, 1980,Р 1 азтпЫ, 8, 88-93) .Рестрикционный анализ проводят спомощью эндонуклеаз Р-1, Вя 1 11,11, Отобранные. клоны проверяютна присутствие системы рестрикциимодификации Есо 87. Для этого сравнивают эффективность посева (э.п.)фага; 0 на клетках, содержащихрекомбинантные плазмиды, а такжештаммах С 5183 (гь. -где ) и ) С 5183( г т+ ) с плазмидой рЬ 13. Наличие в клетках модификации устанавливают при снижении э.п. методом(Т. Ага, А.Ао 1 с 1, 3.Васй. 5, 18,1962) . Полученные данные представлены в табл. 2,Как видно из табл. 2, штамм3 С 5183/С 113 на четыре порядка ограничивает размножение фага Ъ0по сравнению со штаммом 1 С 5183( ГО ), не несущем плазмидуу...

Номер патента: 1122003

Опубликовано: 15.12.1985

Авторы: Баев, Солонин, Таняшин, Трояновский

МПК: C12N 15/00

Метки: в-1449-продуцент, вкм, днк, днк-лигазыфага, кодирующая, конструирования, лигазы, плазмидная, рекомбинантная, синтез, фага, штамм

...Е.со 1 С 600 с множественностью 1 в среде ЬВ (1 О г бактотриптона, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г 11 аС 1 нал воды),зсодержащей 10 М МАЗО, Ливис клеток завершают добавлением в среду хлоро7 11 форма (1;100). После удаления обломков клеток центрифугированием (6000, 30 мин, 4 С) клеточные ДНК и РНК лизата гидролизуют одновременно панкреатическими ДНКазой и РНКазой (по 10 мкг/мл) при 20 С, 1 ч, Первичную очистку и концентрирование фага проводят с помощью полиэтиленгликоля 6000 (Зошашого К, Р ег а 1., Чт.го 1 огу, 40, 734-744, 1970). Окончательную очистку Фага проводят равновесным центрифугированием в 4 М СяС 1, 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,01 М МяС 1 (И 1 яоп С. С. ег а 1., Мо 1 ес.Сеп.Сепег 156,203-214, 1977). Очищенный препарат фага АМ...

Номер патента: 1147030

Опубликовано: 07.05.1992

Авторы: Крутяков, Махно, Шевелев

МПК: C12N 9/00

Метки: бактериофага, днк-полимеразы, еsснеriснiа, клетках

...за 30 мин при перемешивании а магнитной мешалке 100 мл 123 растора стрептомицинсульфата, который готовят непосредственно перед употеблением. Через 45 мин отделяют осаок центрифугированием. В супернатане остается около 952 ДНК-полимеразы актериофага Т 4.Благодаря такому осаждению ДНК трептомицинсульфатом отпала необхо 511470Вследствие вышеуказанных причинотпадает необходимость в проведенииавтолиза (упрощается процесс), а так"же значительно увеличивается выходцелевого продукта с более высокой5удельной активностью.Кроме того, предложение изменитьпоследовательность хроматографической очистки; сйачала очищать от нукФлеиновых кислот, затем от белкаобеспечивает повышение выхода целевого продукта. Это объясняется.тем,что удается...