Фрагмент днк amyamyllich 6, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, способ его конструирования, рекомбинатная плазмидная днк pptlich 6, кодирующая гибридную термостабильную -амилазу, способ ее конструиро

Номер патента: 1825376

Опубликовано: 30.06.1993

Авторы: Акико, Мориюки, Сейга, Сусуму, Тамио

МПК: C12N 15/18, C12N 15/70

Метки: гормон, днк, днк,кодирующей, днк-фрагмент, кодирующий, конст-ния, лосося, плазмид, плазмидной, промежуточной, рекомбинантной, роста, содержащей

...экстрагируют смесью фенола с хлороформом и осаждают этанолом с получением 0,5 пмоля кДНК-вектора-затравки ДНК, связанной с (дЦ) цепями. Затем 0,08 пмоля ДНК и 0,16 пмоля упомянутой связующей ДНК добавляют к 40 мл раствора, содержащего 10 мМ трис-НС (рН 7,5), 0,1 М йаС и 1 мМ ЭДТА, и инкубируют при 65 С, 42 С и 0 С в течение соответственно 10, 25 и 30 мин. Реакционный раствор доводят до 400 мл (полный объем) раствора. содержащего 20 мМ трис-НС 1 (рН 7,5) 4 мМ МцС 12, 10 мМ (НН 4)2504, 0,1 М КС 1 и 0,1 мМ Р.НАД, К реакционному раствору добавляют 10 единиц ДНК-лигазы Езсег 1 сЬ 1 а со 11 и инкубируют в течение 1 сут при 11 С. Реакционный раствор доводят до раствора, содержащего 40 мкМ дНТФ и 0,15 мкМ /3-НАД. Затем добавляют пять единиц...

Номер патента: 1203108

Опубликовано: 07.01.1986

Авторы: Гиндилис, Зайцев, Шапиро, Юров, Яковлев

МПК: C12N 15/00

Метки: 11-й, геномной, днк, маркирования, плазмидная, рекомбинантная, фрагмент, фрагмента, хромосомы, человека

...от анодной каме Оры диализной мембраной. Нижний крайцилиндра с фильтром опускают в катодную камеру;обе электродные камеры заполняют буАером,содержащим 89 мМ"тгйе НС 1,89 мМ Н ВО и 5 мМ ЕЭТЛ1 рН 8,3. Электрофильтрацию растворапроизводят при 5 мМ/см в течение 6-8 ч.После электрофоретического осаждения ДНК на фильтре жидкость удаляют из цилиндра, а желеобразныйслой ДНК растворяют в нужном объеме0,1 чТЕ,Для выделения препаративных количеств плазмидной ДНК культуру Е.со 1, несущую плазмиду, выращивают в25 100 мл среды В (10 г/л пептона, 5 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л ИаС 1) с добавками необходимых антибиотиков (100 мкг/мл ампицилина, 20 мкг/мл тетрациклина и 50 мкг/мл хлорамфеникола) при 37 С на качалке в течение ночи. Клетки...

Номер патента: 1392094

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Дегтярев, Кравченко, Кузнеделов, Нетесова, Петренко, Ривкин

МПК: C12N 15/00

Метки: coli, днк, днк-полимеразы, кленова, кодирующая, конструирования, плазмидная, рекомбинантная, рсек, синтез, фрагмента

...фрагменты ДНК электрофорезом в 47.-ном полиакриламидном геле. Гель окрашивают в растворе бромистого этидия 2 мкг/мл, вырезают из геля зону, содержащую векторную часть ДНК плазмиды рСЕЕ 12, и выделяют ДНК из геля методом электроэлюции. 10 мкг плазмидной ДНК рС 155 гидролизуют 20 ед. рестрикционной эндонуклеазы ВашН 1 в 100 мкл буфера для гидролиза, содержащего 20 мМ трис-НС 1 рН 7,8, 10 мМ МяС 1, 50 мМ МаС 1, 2 мМ 2-меркаптоэтанола, при 37 С 1 ч. В полученную реакционную смесь добавляют 25 ЙАТР, ВСТР, ЙСТР и ТТР, до 0,05 мМ каждого, 10 ед. ДНК-полимеразы 1 и инкубируют 30 мин при 12 С. Реакцию останавливают добавлением Иа ЭДТА до концентрации 20 мМ, белок удаляют экстракцией водным фенолом, рН 8,0 и ДНК трижды переосаждают...

Номер патента: 1730150

Опубликовано: 30.04.1992

Авторы: Баев, Горбулев, Рубцов, Сагадиев, Садиев, Скрябин, Шульга

МПК: C12N 1/21, C12N 15/18

Метки: бактерий, гормон, гормона, днк, еsснеriснiа, кодирующая, кодирующий, овцы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, роgнтrр11, роста, синтез, фрагмент, штамм

...работы отобрали плазмиду, содержащую Есой 1-Н 1 пб И 1-фрагмент с геном ГР КРС размером 601 п.ообозначенную рВОН Ва 112;П р и.м е р 2. Получение фрагмента ДНК,кодирующего ГР овцы.А) Клонирование фрагмента ДНК, коди рующего ГР КРС, в векторе М 13(фиг, 6).10 мкг плазмидной ДНК рВОНВа 12гидролизовали рестриктазами Есой 1 и НпбИ 1 в 50 мкл инкубационной смеси следующего состава: 50 вМ йаС 1, 10 вМ 5 трисНС 1. рН 7,5,10 вМ МяС 2, 1 еМ дитиот-рейтола(ДТТ), 10 ед; рестриктазы Есойи 10 ед. рестриктазы Н 1 пбИ, в течение 2 ч при 37 С.Проводили разделениефрагментов ДНКв 1агарозном геле и выделяли из геля фрагмент раз мером 601 п,оиспользуя стандартный метод.5.мкг ДНК репликативной формы бактериофага М 13 вр 8 гидролизовалирестриктазами...

Номер патента: 1744111

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Епифанова, Ксензенко, Кулаков, Новикова, Носкова

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: rv7-ii, бактерий, выявления, днк, еsснеriснiа, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, ротавирусов, содержащая, фрагмент, фрагмента, человека, штамм

...мк КиН; АТФ и 1/10 объема поли-А-полимеразы (0,5 мкг,Степень аденилирования определяют по известной методике, Определяют время реакции, необходимое для присоединения 15 - 20 остатков АМФ. Полученный препарат экстрагируют фенолом и осаждают 2,5 объемами спирта.К препарату полиаденилированной РН К в буфере ТЕ добавляют 5 мкг олиго-ОТ 2-в денатурируют 3 мин при 100 С и охлаждают во льду. Синтез кДНК проводят в буфере, содержащем 50 мМ трис-НС 1, рН 8,3, 50 мМ КС 1, 10 мМ МдС 2, 10 мМ ДТТ, 4 мМ пирофосфата натрия, по 0,5 мМ б АТР, б СТР, б 6 ТР, б ТТР, 10 мк Ки Р АТР в объеме реакционной смеси 100 мкл. Добавляют 25 ед,обратной транскриптазы из вируса миелобластоза птиц и инкубируют 2 ч при 42 С,Цепи РНК удаляют щелочным гидролизом (0,25 М...