Фрагмент днк amyamyllich i, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, способ его конструирования, рекомбинатная плазмидная днк prtlich, кодирующая гибридную термостабильную -амилазу, способ ее конструирова

Номер патента: 1626683

Опубликовано: 27.05.1999

Авторы: Баев, Миронов, Смирнова, Сорокин

МПК: C12N 15/52

Метки: amyamyllich, pptlich, амилазу, гибридную, днк, кодирующая, кодирующий, конструиро, конструирования, плазмидная, рекомбинатная, термостабильную, фрагмент

1. Фрагмент ДНК amyamyllich 6, кодирующий гибридную термостабильную -амилазу, полученный в результате замены нуклеотидных остатков с 562 по 680 на гомологичный фрагмент ДНК, кодирующий часть -амилазы Bacillus licheniformis без регуляторной области, со следующей нуклеотидной последовательностью фрагмента amyamyllich 6:2. Способ конструирования фрагмента ДНК amyamyllich 6, заключающийся в том, что однонитевую ДНК рекомбинантного фага M13mWBamy , содержащего часть фрагмента ДНК,...

Номер патента: 1825376

Опубликовано: 30.06.1993

Авторы: Акико, Мориюки, Сейга, Сусуму, Тамио

МПК: C12N 15/18, C12N 15/70

Метки: гормон, днк, днк,кодирующей, днк-фрагмент, кодирующий, конст-ния, лосося, плазмид, плазмидной, промежуточной, рекомбинантной, роста, содержащей

...экстрагируют смесью фенола с хлороформом и осаждают этанолом с получением 0,5 пмоля кДНК-вектора-затравки ДНК, связанной с (дЦ) цепями. Затем 0,08 пмоля ДНК и 0,16 пмоля упомянутой связующей ДНК добавляют к 40 мл раствора, содержащего 10 мМ трис-НС (рН 7,5), 0,1 М йаС и 1 мМ ЭДТА, и инкубируют при 65 С, 42 С и 0 С в течение соответственно 10, 25 и 30 мин. Реакционный раствор доводят до 400 мл (полный объем) раствора. содержащего 20 мМ трис-НС 1 (рН 7,5) 4 мМ МцС 12, 10 мМ (НН 4)2504, 0,1 М КС 1 и 0,1 мМ Р.НАД, К реакционному раствору добавляют 10 единиц ДНК-лигазы Езсег 1 сЬ 1 а со 11 и инкубируют в течение 1 сут при 11 С. Реакционный раствор доводят до раствора, содержащего 40 мкМ дНТФ и 0,15 мкМ /3-НАД. Затем добавляют пять единиц...

Номер патента: 1782029

Опубликовано: 10.07.1999

Авторы: Баев, Болотин, Вольфович, Дебабов, Иомантас, Козлов, Народицкая, Орлова, Попов, Рябченко, Сорокин, Стеркин, Стронгин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/18

Метки: amyloliquefaciens, bacillus, licheniformis, pbatam2, альфа, альфа-амилазы, амилазу, бактерий, днк, кодирующая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК рВАТАМ2, кодирующая альфа-амилазу Bacillus licheniformis, размером 9 т.п.н., содержащая:- HindIII-HindIII - ДНК плазмиды рВА91, размером 4,7 т.п.н.;- HindIII-HindIII - фрагмент ДНК плазмиды pLV7, размером 4,3 т.п.н.;- два участка расщепления рестриктазой HindIII;- один участок расщепления рестриктазой BamH1;- amy-ген, кодирующий синтез термостабильной амилазы B.Licheni-formis;- ermC - ген, детерминирующий устойчивость клеток к эритромицину;- par - область, обеспечивающая стабильное наследование плазмиды.2. Штамм бактерий Bacillus...

Номер патента: 2003689

Опубликовано: 30.11.1993

Авторы: Азизбекян, Дебабов, Йомантас, Козлов, Попов, Стеркин

МПК: C12N 15/32, C12N 15/56, C12N 15/75, C12N 9/28

Метки: amyloliquefaciens, bacillus, альфа, альфа-амилазы, амилазу, днк, кодирующая, плазмидная, продуцент, рва1418, рекомбинантная, штамм-бактерий

...содержит 10 мл 1%- ного растворимого. крахмала, растворенного в 15 мМ йа-К-фосфатном буфере, рН 6,0, и 5 мл исследуемого образца (разведенного в 2 мМ ацетатном буфере, рН 6,0, 03, мМ СаС 2, 100 мМ МаС), Контроль вместо исследуемого образца содержит 5 мл буфера для разведения фермента, Пробы инкубируют при 30 С 10 мин. Реакцию останавливают добавлением к 1 мл реакционной смеси 10 мл 0,1 М раствора НС. Из полученной смеси отбирают 1 мл и переносят в 10 мл раствора йода, содержащего 0,0025% Л и 0,025% КЛ, Реакционную смесь выдерживают при 20 С.20 мин и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 656 нм, Контрольный раствор имеет синюю окраску, а опытные образцы приобретают фиолетовый цвет, Контрольный раствором при...

Номер патента: 1200853

Опубликовано: 23.12.1985

Авторы: Джонатан, Сьюзен

МПК: C12N 15/00

Метки: альфа-амилазы, генетический, гибридной, код, конструирования, плазмиды, содержащей, термостойкой

...производящих дмилазуЕ, со 11, выдепешая как оисапа впримере 3, АТСС .д 31 789, вт.рдттттвается в течение ночи в среде, исттопьзуемой в ттрюере 2, ДНК плдз.птдц усиливается при помаши изтзестцой процедуры Клевеллд Д,Б. с. Испои зотздццем170 Т Г ХтОРДМссвтСОтД ЦД МИЛЛЦМЕтР.Для усцтлеция испо;ьз уст ся следующаясреда, г/л: П т РО 46,0, КП РО 4 3 02 42 Р 4с 1 аС 1 0,5, сПС 1 1,0 кдзвицатесЕаминокислоты 5,0, глюкоза 2,0,СдС 2 НО 0,015,;р.,О 4 7 Н (т0,2 сс 6, витамин В0,001,10 5 20 30 25 Б. Гибридная плазмида, стойкая к хлорамфениколу и ампициллину, полученная в части А, используется в каДНК плазмиды затем выделяетсяпри помощи стандартного метода осветления лизата Клевелла и Хелински. Изолированные плазмиды подвергаются очистке при помощи...