Способ получения дипептидныхэфиров

Союз Советских Социалистических РеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ пв 841583(22) Заявлено 0510,78 (21 2570052/2669397/23-04 (23) Приоритет 26.01.78 (32) 2701.77 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(31) 57036/1977 (33)Япония Опубликовано 230681. Бюллетень М 23 Дата опубликования описания 230681ИностранцыЕсиказу Изова, Мунеки Охмори, КаоруЮдзи Нонака, Кейити Кихара, Кийотаки Сигеаки Йисимура(Япония)Иностранная фирмао Сода Мануфакчуринг Ко, ЛТД и (Кемикал Рисерч Сентер"(71) Заявител 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИПЕПТИДНЫХ ЭФИРО тавленная цель д ом получения дип щей формулыМНР .(,.,) . ь. .3 . По посо ов остигает птидных я к способу дных дипептид ки активных ут найти приежуточных сахаристых носит роизв огиче ые мо е про учени иполуныхсоедменепродвеще Н-1 или 2,ающийся в том мето они арб или ил; пособ защище взаимод ты, им ищенну ложным М-защиптидных ангидри- ащищенуппу, минокисолучени ных дип ействия ющего з аминог эфироместен или н путем нокисл и незащ льным 10 оксил щенны эфиро да ами ную ил с алк и з аклю форму О 11то соединен МНРО . О 1 11 11 СН- С-МН-СН-С" Р лоты 1 1 ф НОС"(С-С-СНй го способа состоит с целевыми дипепбразуются дипептиде пептидные связи группе боковой цепи Недоств том, чттидными эфиные эфиры,по карбоксиаминокислот ато о н эт ряд ми еющ ной Ргде Рт, Рх, Р 9,п имеют указанные зна чения, обрабатывают водным растворомкислоты и отделяют полученный ц дипептидный эфир в виде твердог дукта;Способ состоит в разложении продукта присоединения дипептидного сло ного эфира и соли сложного эфира аминокислоты под действием водного раствора кислоты. Существенная часть дипептидного сложного эфира находит ся в твердом состоянии после окончаеле во о проЦель изобретения - создание получения новых производных ных эфиров, позволяющего по ептидный эфир со свободной цепи карбоксильной группой азования побочных продуктов спосо дипеп учить боко без б ди во об обретение о ения новых фиров - био нений, кото ие в качест ктов при по тв. Мори, ТеЬуя Исикава,Ояма, ато, 841583ния реакции, поскольку он обладаетнизкой растворимостью в кислом водномрастворе. В силу того, что соль хорошо растворима в растворе, реакционная система становится, смесью твердого дипептидного сложного эфира ираствора соли, который может содержать избыток кислотного компонента.Полученный твердый дипептидный слож- .ный эфир отделяют обычным способом,например фильтрованием или центрифугированием. Для выделения из отде. ленного солевого раствора сложногоэфира аминокислоты используют кристаллизацию или экстракцию, после освобождения сложного эфира аминокислоты. 15Согласно предлагаемому способудипептидный сложный эфир может бытьлегко получен и выделен путем разложения продукта присоединения без усложненной стадии экстракции и обработки ионообменной смолой. Выход ичистота дипептидного сложного эфиравысокие.П р и м е р 1. К раствору1335 мг (5 ммоль) М-бензилоксикарбонил.-аспарагиновой кислоты и1078 мг (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира -фенилаланина в 20 млводы с рН 6 (доводят с помощью 7-ой аммиачной воды) прибавляют 50 мгтермолизина и смесь встряхивают при ЗОтемпературе 38 - 40 ОС в течение ночи. Выпавший в осадок продукт отделяют, промывают 40 мл воды, сушат,получают 1145 мг тонких игольчатыхкристаллов, имеющих точку плавления 35117 - 120 С (продукт присоединенияметилового эфира М-бензилоксикарбон 1 лл.-аспартил.-фенилаланина и метилового эфира 1.-фенилаланина (1:1);выход: 75,5 Ъ в расчете на хлоргид- ф 40рит метиловго эфира 1.-фенилаланина).Продукт перекристаллизовывают изсмеси этилацетата и п-гексана.Точка плавления .120 - 124 С.1 с + 7,1 (С = 1, метанол).Эл еме йт ный ан али з .Найдено, Ъ: С 63,15; Н 6,15;М 7,00.92 37 392Вычислено,. Ъ; С 63,24; Н 6,13;М 6,97. 501145 мг полученного продукта растворяют в 40 мл 1 н НС 1 и триждыэкстрагируют 30 мл этилацетата. Экстраты смешивают и промывают порциями по 20 мл воды (3 раза) и сушат 55над безводным сульфатом магния.Раствор концентрируют в вакууме, остаток кристаллизуют при добавлениип-гексана, получают 640 мг кристаллического продукта.ф 0Точка плавления 115 - 125 С.15,3 (С=1, метанол),Элементныйанализ.Найдено, Ъ: С 61,52; Н 5,65;М 6 57.фС 2 д Н 24 МдЛЛ б 5 Вычислено, Ъ: С 61,67; Н 5,65; -М 6,54.Метиловый эфир 1.-фенилаланина выделяют из смеси солянокислой фазы и Фракции промывочной воды, отделенной при экстракции из этилацетатной фазы,Соединение, полученное посредствомпервой реакции, является продуктом присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбонил.-аспартил.- -фенилаланина и метилового эфира -фенилаланина. Иэ спектра ЯМР подтверждено, что их молярное отношениесоставляет 1:1П р и м е р 2. К раствору267,2 мг (1 ммоль) М-бензилоксикарбонил.-аспарагиновой кислоты и537,6 мг (3 ммоль) метиловго эфира (.-фенилаланина в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавляют 100 мг термоазы и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встряхивают в течение 20 ч при 38 С. Осадок собирают, промывают водой, сушат, получают 580 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбонил.-аспартил.-фенилаланина и метилового эфира 1.-фенилаланина (1:1) (точка плавления 123 - 125 С, выход 35,5 в расчете на М-бензилоксикарбониласпарагиновую кислоту).Продукт растворяют в 40 мл смеси иэ диметилформамида и воды (1:1) и к раствору добавляют при перемешивании Н-форму сильнокислотной катионообменной смолы, смолу отделяют, Филь- трат концентрируют при пониженном давлении . Остаток растворяют в диметилформамиде и к раствору добавляют воду, Выпавший. осадок собирают, получают 330 мг метилового эфира М- -бензилоксикарбонил.-аспартил-(.- -фенилаланина (выход 77,0 в расчете на М-бензилоксикарбониласпарагиновую кислоту, точка плавления 123 - 125 С).П р и м е р 3. К раствору 267,2 мг (1 ммоль) М-бензилоксикарбонил.-аспарагиновой кислоты и 359,4 мг (2 ммоль) метилового эфира 1.-фенилаланина в 5 мп буферного раст" вора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавляют 100 мг тациназы-М и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встряхивают в течение б ч при 38 С. Выпавший в осадок продукт отделяют, промывают водой, получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира М- бенэилоксикарбонил.-аспартил-(.-фенилаланина и метилового эфира 1.-фенилаланина (1:1) (точка плавления 119 - 123 С выход 19,7).Продукт обрабатывают по примеру 2 Н-формой сильнокислотной катионообменной смолой, в Н-форме получают 50 мг. метилового эфира М-бенэилоксигП р и, м е р 7. В колбе емкостью мл в 70.мл воды растворяют 5,34 г (20 ммоль) М-бензилоксикарбонил-(.-аспарагиновой кислоты и 7,32 г (42 ммоль) метилового эфира -фенилаланина. К полученному раствору с рН 6,2 - 6,3 добавляют 200 мг термолизина и смесь встряхивают при температуре 38 - 40 ОС в течение 4 ч. Осадок отфильтровывают, промывают в 70 мл воды,сушат, получают 10,11 г кристаллов (точка плавления 117 120 С), Проведенный анализ показыва-. ет, что продукт есть продукт присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбониласпартилфенилаланина и метилового эфира -фенилаланина (1:1). После перекристаллизации, продукта из смеси этилацетата и п-, гексана получают следующие значения.Точка плавления 120 - 124 С.),о(3 + 7, 2 (С= 1, метанол) .Элемейтный анализ.Найдено, : С,63, 16; Н 6, 14;.М 6,99. О 20 50 55 СЪ НЪ 7 М 09Вычислено, Ъ: С 63,241 Н 6,13 рМ 6,97.оИнфракрасный спектр и спектр ЯМРпроявляют те же характеристики, которые указаны для продукта присоединения (1:1) метилового эфира М-бензилоксикарбониласпартилфенилаланина и метилового эфира -фенилаланина.После обработки сильной кислотой продукт экстрагируют этилацетатом, после отгонки которого получают в остатке метиловый эфир М-бензилоксикарбониласпартилфенилаланина.К 1,00 г (1,65 ммоль) полученногопродукта. присоединения метиловогоэфира М-бензилоксикарбониласпартил-(,-фенилаланина и сложного эфира 4 О-фенилаланина добавляют 2 мл и2,0 мл 1 н НС 1, смесь перемешиваютпри комнатной температуре в течение10 мин. Полученную суспензию фильтруют и осадок промывают 4 мл воды,получают 0,72 г кристаллического метилового эфира М-бензилоксикарбонилааспартилфенилаланина (выход98,8).Полученные кристаллы перекристаллиэовывают из смеси этилацетата ии"гексана.Точка плавления 121 - 124 С,(.с( 1 Я,4 (С=1, метанол),Элементный анализ.Найдено, : С 61,58; Н 5,64;М 6,56.СаХ Ь 4 М ОтВычислено, : С 61,67; Н 5,65;М 6,54.Инфракрасный спектр продукта совпадает со спектром стандартного продукта.МИдентичность продукта со стандартным подтверждена посредством сравнения водного раствора продукта с вод ным раствором стандартного соединения в высокоскоростной жидкостной хроматографии. Чистота, измеренная этим способом, составляет 100.Этот способ использован также для оценки чистоты продуктов разложения прйсоединения в следующих примерах (если это не оговорено иначе).Устройство для высокоскоростной жидкостной хроматографии (Т 5 К - НС801, поставляемой Тоуо 5 оба К,К.)включает колонку, внутренний диаметркоторой 7,5 ммк, длина 30 см, детектор (дифференциальный рефрактометр).В качестВе наполнителя используюткрахмальный геЛь с размером частиц5 мк (Т 5 К - СЕЕ 5 170, поставляемыйТоуо Боба К.К.) . Элюентом служит 0,5 ный водный раствор ацетата натрия.Измерения проводят при комнатнойтемпературе, скорости потока 0,8 мп/мин,перепаде давления 20 кг/смП р и м е р 8, К 1,00 г(1,65 ммоль)продуктов присоединенияметилового эфира М-бензилоксикарбонил-).-аспартилфенилаланина и метилового эфира-Фенилаланинадобавляют2 мл воды и 1,32 мл 1 н НС 1 и смесьперемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционнуюмассу обрабатывают по примеру 7. Получают 0,70 г тонких призматическихкристаллов, имеющих точку плавления100 - 126 ОС (содержание метиловогоэфира М-бензилоксикарбониласпартилфенилаланина 96,8).П р и м е р 9. 0,534 г (2 ммоль)М-бензилоксикарбониласпарагиновойкислоты и 0,863 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира 0-фенилаланина растворяют в 10 мл воды, значениерН доводят до 6,0 с помощью 7-ойаммиачной воды,Полученный раствор смешивают с50.мг термолизина, смесь встряхивают.в течение ночи при температуре 3840 С, Осадок отфильтровывают, промыовают 10 мл воды, сушат, получают0,90 г кристаллов, имеющих точку плавления 120 - 126 С.Часть кристаллов перекристаллизовывают из смеси этилацетата и и-гексана, получают продукт с точкой плавления 128 - 134 С и с 3 Я равный -6,3(С=1, метанол).,Этот продукт имеетинфракрасный спектр и спектр ЯМР, которые.идентичны этим же спектрам продукта присоединения метилового эфираМ-бензилоксикарбониласпартилфенилаланила и метилового эфира Е-фенил.аланина (1;1),Элементный анализ.Найдено, Ъ: С 63,42; Н 6,17;М 6,95.32.р 3 9 Н М Вычислено, Ъ: С 63,24; Н 6,13; М 6,97. Затем продукт обрабатывают кислотой, получают метиловый эфир М-бензилоксикарбониласпартилфенилалани-на и метиловый эфир О-фенилаланина в мольном отношении 1:1. Эти результаты позволяют сделать вывод, что полу" ченные кристаллы есть продукты присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбонила.-аспартил-фенилалани 5 на и метилового эфира О-фенилаланина (1:1).0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединениясмешивают с 4 мл воды и 0,26 г лимонной кислоты, смеси перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают по примеру 7, получают 0,35 г кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонил- -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина (чистота 15 100, выход 99,3).П р и м е р 10. К 0,50 г (0,82 ммоль) .продукта присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбонил.-аспартил.-фенилаланина и мети- щ лового эфира ;фенилаланина, полученного по примеру 7, добавляют 4 мл воды и 0,24 г (1,2 ммоль) р-толуолсульфокислоты моногидрата. Смесь обрабатывают в условиях примера 7, Получают 0,33 г- кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонила.-аспартил- -1.-фенилаланина (чистота 100, выход93,6) .П р и м е р 11. В колбу емкостью 30 мл помещают 0,45 г (3,2 ммоль) 85 муравьиной кислоты и 8 мл воды и к смеси добавляют 0,50 г (О;82 ммоль) продукта присоединения метилового эфлра М-бензилоксикарбониласпартил- -1.-фенилаланина и метилового эфира Е-фенилаланина, полученного в примере 7. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,312 г 40 белых кристаллов метилового эфира И-бензилоксикарбонил.-аспартил -фенилаланина (чистота 100, выход 88,6).П р и м е р 12. К 0,47 г (8,2 ммоль) ледяной уксусной кислоты и 8 мл воды добавляют 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения метилового эфира И-бензилоксикарбонил-аспартил.-фенилаланина и метилового эфира -фенилаланина, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат. Получают 0,308 г белых кристаллов метилового эфира М-бензилокси карбонила.-аспартил-(.-фенилаланина (чистота 100, выход 87,2).П р и.м е р 13. 1,00 г (1,65 ммоль) продукта присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбониласпар- ЬО тил.-фенилаланина и метилово-о эфира (.-Фенилаланина, полученного в примере 7, загружают в колбу емкостью 30 мл и добавляют 2 мл воды и 0,2 мп 1 н НС 1. Смесь перемешивают при 60 С 65 в течение 3 мин, а затем обрабатывают по примеру 7. Получают 0,35 г кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонил-Е-аспартилфенилаланина (чистота 100, выход 100).П р и м е р . 14., В колбу емкостью 30 мл помещают 0,594 г (2 ммоль) И-р-метоксибензилоксикарбонил-Е-аспарагиновой кислоты и 0,860 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира 1.-фенилаланина и растворяют в небольшом количестве 1 н ИаОН, величину рН доводят до 6,0.Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и встряхивают при температуре от 38 до 40 С в течение ночи, Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды и сушат. Получают 0,928 г кристаллов, имеющих точку плавления 68 - 74 С.Полученный продукт представляет собой присоединение метилового эфира И-р-метоксибензилоксикарбонил.- -аспартилфенилаланина и метилового эфира -фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и и"гексана.Точка плавления 72 - 76 С.Го(3+ 6,5 (С=1, метанол).Элементный анализ.Найдено, : С 61,85; Н 6,04;И 6,46.ЗЗ 39 3 1 оВычислено, : С 62,15; Н 6,16;И 6,59.Инфракрасный спектр:3280 см -" (колебания растяжения связи М-Н у 3020 и 2930 см-" (колебания растяжения С-Н); 1735 см -" (сложный эфир С=О); 1700 см "(С=О уретан); 1640 см-(1-ое амидное поглощение); 1500 до 1540 см-" (2-е амидное поглощение); 1435 см -" (С-Н деформационное колебание); 1380 см- (карбоксилат); 1210 до 1240 см-" (колебание растяжения связи С-О-С и 3-е амидное. поглощение); 1030 см-" (колебание фенила в плоскости) и 690, 740 и 810 см-" .(колебание фенила вне плоскости).Спектр ЯИР:(1) 2,7 частей на миллион (2 Н); (2) 3,1 частей на миллион (4 Н); (3 )3,6 частей на миллион (ЗН)и 3,7 частей на миллион (ЗН);(4) 3,8 частей на миллион (ЗН); (5) 4,0 частей на миллион (1 Н); (6) 4,5 частей иа миллион (1 Н); (7) 4,8,частей на миллион (1 Н); (8) 5,0. частей на миллион (2 Н)р (9) 5,65 частей на миллион (ЗН)р (10) 5,65 частей на миллион (1 Н) (11) 6,2 частей на миллион (1 Н)р (12) 6,8 до 7,3 частей на миллион (14 Н).Эти результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения формулы (1), где Я,1, Я, Яи и означает р-метоксибензилоксикарбо 841583 . 12нил, бензил, метокси и 1; соответственно.0,500 г (0,78 ммоль) продукта присоединения метилового эфира й-р-метоксибензилоксикарбониласпартил-Е-Фенилаланина и метилового эфира (.-фенилаланина, полученного таким образом,помещают в колбу емкостью 30 мп,добавляют 2 мл воды и .0,94 мл .(0,94 ммоль)1 й НС 1, смесь перемешивают при бОфСв течение 3 мин, фильтруют, осадокпромывают б мл воды и сушат, получа- (Оют 0,32 г кристаллов.Следующие результаты подтверждают,что продукт является сложным эфиромй-р-метоксибензилоксикарбонил.-аспартилфенилаланина (чистота 100, выход 89,1).Кристаллы растворяют в этилацетате и высаживают при добавлении и-гексана.Точка плавления 128 - 130 С. 20Го( 3 - 15,1 (С=1, метанол) .Элементный анализ.Найдено, Ъ: С 60,30; Н 5,74;й 5,99.С 25 Н 26 й 08Вычислено, В: С 60,25 Н 5,72;й 6,11.Инфракрасный спектр:3280 см-" (растяжение й-Н); 2930и 3020 см- (колебание растяженияС-Н); 1735 см-"(С=О сложный эфир); 301700 см-" (С=О уретан); 1650 см(1-ое амидное поглощение); 15101540 см ".(2-е амидное поглощение);1440 см-" (деформация С-Н): 12201270 см "(колебание растяжения С-О-С, 353-е амидное поглощение); 1030 и1050 см- (колебание Фенила в плоскости); 690 и 810 см (колебание фени ла вне плоскости),ЯМР спектр; 40(1) 2,8 частей на миллион (2 Н);(2) 3,0 частей на миллион (2 Н)р(3) З,б частей на миллион (ЗН)р(4) 3,8 частей на миллион (ЗН)р(5) 4,5 частей на миллион (1 Н);(6) 4,8 частей на миллион (1 Н)р(7) 5,0 частей на миллион (2 Н)р(8) 6,0 частей на миллион (1 Н);(9) б,б частей на миллион (1 Н);(10) 6,6 частей на миллион (1 Н);(11) 6,8 частей на миллион до 7,8частей на миллион (9 Н);Эти результаты показывают, чтоконечным продуктом является соединение формулы (Н ), в котором В В,й и и означают р-метоксибензилоксиЪкарбонил, бензил, метокси и 1, соотчветственно.0,2 вес.ч. полученного метилового эфира й-р-метоксибензилоксикарбонил-(."аспартилфенилаланина растворя, ют в 2 вес.ч. ацетона и к полученному раствору доба,вляют 1 вес.ч. 4 н .НС 1. Смесь нагревают на водяной бане со слабым противотоком в течение 1,5 ч до полного разложения и получе- б 5 ния раствора, содержащего в качествеосновных компонентов метиловый сложный эфир -аспартилфенилаланина,метиловый эфир -фенилаланина и анисовый спирт, Из указанного раствораполучают метиловый Эфир 1.-аспартил-(.-Фенилаланина.П р и м е р 15. 0,562 г(2 ммоль)й-бензилоксикарбонил.-глутаминовойкислоты и 0,862 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира Е-.фенилаланинапомещают в колбу емкостью 30 мл и добавляют 1 н йаОН до их полного растворения, рН доводят до 6,0,Полученный раствор смешивают с50 мг термолизина, встряхивают притемпературе 38 - 40 С в течение ночи,Осадок отфильтровывают, промывают10 мл воды, сушат. Получают 0,510 гкристаллов, имеющих точку плавления80 - 85 С.Следующие результаты подтверждают,что вещество представляет собой продукт присоединения метилового эфирай-бензилоксикарбонилглутамил.-фенилаланина и метилового эфира -фенилаланина (1:1).Продукт перекристаллизовывают изсмеси атилацетата и р-гексана.Точка плавления 92 - 97 С.а"- 0,1 (С=1, метанол).Элементныи анализ.Найдено, Ъ: С 63,61; Н 6,31;й 6,65.С 9 Н й 09Вычислено %: С 63,75; Н 6,32;й 6,76.Инфракрасный спектр:3340 см-" (колебание растяжения связи й-Н); 2950 и 3030 см- (колебание растяжения связи С-Н); 1730 и 1745 см -" (С=О сложный эфир); 1690 см(С=О уретан); 1660 см -" (1-ое амидное поглощение); 1620 см(карбоксилат) (2-ое амидное поглощение);1440 см(1) 2,0 частей на миллион (2 Н); (2) 2,3 частей на миллион (2 Н); (3) 3,0 частей на миллион (4 Н); (4) 3,6 частей на миллион и 3,7 частей на миллион (ЗН);(5) 3,8 частей на миллион (1 Н);(6) 4,3 частей на миллион (1 Н);(7) 4,8 частей на миллион (1 Н);(8) 5,0 частей на миллион (2 Н);(9) 5,8 частей на миллион (ЗН);(10) 5,8 частей на миллион (1 Н); (11) 7,2 частей на миллион (1 Н);(12) 7,2 частей на миллион (10 Н(13) 7,3 частей на миллион (5 Н) .Эти результаты показывают, чтопродукт является продуктом присоединения формулы;(1),где К й , й ии .означают бензилоксикарбонйл, бен"зил, метокси и 2, соответственно.0,001 г продукта присоединенияметилового эфира М-бензилоксикарбонил.-глутамил.-фенилаланина и мети"лового эфира 1.-фенилаланина добавляют к 2,3 мл (0,32 ммоль) 0,14 н НС 1при перемешивании в пробирке емкостью15 мл. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин.Полученный белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат,получают 0,683 г кристаллов.Следующие результаты подтверждают,что продукт представляет собой этиловый эфир М-бензилоксикарбонил.-глутамин.-фенилаланина (чистота 100,выход 95,8).Кристаллы растворяют в этилацетате и переосаждают при добавлении игексана.Точка плавления 97 - 99 С.Га(3 11,0 (С=1, метанол).Элементный анализ,Найдено, : С 62,63; Н 5,94;М 6,24.Сд Н 6 М 07Вычислено, : С 62,43; Н 5,921М 6,33.Инфракрасный спектр:3300 см-" (колебание растяженияМ-Н); 2930 и 3030 см -1 (колебаниерастяжения С-Н)у 1735 см-" (С=О сложный эфир)р 1690 см -" (С=О уретан)11650 см-" (1-ое амидное поглощение);1530 см-" (2-ое амидное поглощение);1440 см-" (колебание деформации С-Н);от 1220 до 1280 см-" (колебание растяжения С-О-С и( 3-е амидное поглощение); 1050 см- (колебание фенила вплоскости) и 695 и 735 см-" (колебание фенила вне плоскости).Спектр ЯМР:(1) 2,0 части на миллион (2 Н)(2) 2,4 части на миллион (2 Н);(3) 3,1 части на миллион (2 Н);(4) 3,7 части на миллион (ЗН);(5) 4,3 части на миллион (1 Н);(7) 5,1 части на миллион (2 Н);(8) 5,9 части на миллион (1 Н);(9), 7,2 части на миллион (1 Н);(10) 7,2 части на миллион (5 Н);(11) 7,3 части на миллион (5 Н);.(12) 8,1 части на миллион (1 Н).Эти результаты показывают, что конечный продукт представляет собой соединение формулы ( Н ), где К,., Й Н и и означают бензилоксикарбонил, бензил метокси и 2, соответственно.Полученный метиловый эфир М-беизилоксикарбонил.-глутамил.-фенилаланина можно превратить посредством восстановления водородом в метиловый эфир -глутамил-(.-фенилаланина, иего также можно превратить гидролизомв М-бензилоксикарбонилглутамил.- -фенилаланин.П р и м е, р 16. В колбу емкостью100 мл помещают 0,686 г (3,12 ммоль)хлоргидрата метилового эфира 1.-фенилаланина, 25 мл воды, к полученномураствору добавляют водный 2 н МаОНпри охлаждении льдом и при неремешивании рН доводят до .7,5. Продолжаяперемешивания к раствору постепеннодобавляют 0,360 г (1,44 ммоль) ангидрида М-бензилоксикарбонил.-аспарагиновой кислоты и поддерживают рН от7,0 до 7,5 с йомощью -2 н водного рас твора МаОН. Продолжают перемешиваниев течение 2 ч и к,реакционной смесидобавляют водную 1 н НС 1 и доводятрН до б. Выпавший в осадок продуктотфильтровывают, промывают 50 мл во ды, сушат, получают 0,416 г продукта присоединения, метилового эфираМ-,бензилоксикарбонил.-аспартил.- -Фенилаланина (смесь 86 метиловогоэфира М-бензилоксикарбониласпартил- .(С,)-1.-фенилаланина и 14 метилового эфира М-бензилаксикарбониласпартил. - (Ср)фенилаланина) иметилового эфира 1.-фенилаланина(1:1)(точка плавления от 108 до115 С). В процессе реакции образуется значительное количество метилового эфира М-бензилоксикарбониласпартил- (С р )-1,-фенилаланина, нобольшая часть этого соединения остается в фильтреи в промывочной воде.В химическом стакане емкостью12 мл при перемешивании к полученному продукту присоединения метиловогоэфира М-бен.".илоксикарбонил.-аспартил- (С ( и Ср)-1.-фенилаланина и мети лового эФира 1.-фенилаланина добавляют 1,7 мл (0,7 ммоль) 0,4 НС 1 водного раствора и смесь продолжают перемешивать при комнатной температурев течение 15 мин.45 Белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат. Получают0,136 г (выход 96,3) кристаллов. Мметилового эфира М-бензилоксикарбониласпартил.-фенилаланина (содержащий 17 М-бензилоксикарбонил.-аспартил-(Си,)-1.-фенилаланинаТочка плавления 110 - 118 С.П р и м е р17, В колбе емкостью 30 мл 0,543 г (2 ммоль) М-бензилоксикарбонил-.1.-аспарагиновой кисАоты и 0,918 г (4 ммоль) хлоргидратаэтилового эфира 1.-фенилаланина растворяют в 5 мл воды, к раствору добавляют 4 н,водный МаОН, рН доводят.до ббОВ полученный раствор вводят 50 мгтермолизина и смесь встряхивают притемпературе 38 - 40 С в течение ночи.Осадок отфильтровывают, промывают30 мл воды, сушат. Получают 0,913 гкристаллов, имеющих точку плавления85 - 90 С.Продукт тождественен с продуктомприсоединения этилового эфира й-бензилоксикарбонил-С-аспартиЛ-.-Фенилаланина и этилового эфира .-Фенилаланина (1;1).Продукт перекристаллизовывают изсмеси этилацетата и п-гексана,Точка плавления 93 - 95 С.ГЫ 3+ 6,0 (С=1, метанол).Элемейтный анализ,Найдено, : С 64,50; Н 6,56;й 6,63.С 4 Н й,09Вычислено, Ъ: С 64,23 Н 6,50й 6,61.Инфракрасный спектр:3300 см-" (колебание растяжениясвязи й-Н); 2900 - 3050 см -" (колебание растяжения С-Н); 1710 - 1740 см(1) 1,1 части на миллион (6 Н);(2) 2,7 части на миллион (2 Н);(3) 3,0 части на миллион (4 Н);(4) 4,0 части на миллион (4 Н);(5) 4,1 части на миллион (1 Н);(6) 4,5 части на миллион (1 Н);(7) 4,0 части на миллион (1 Н);(8) 5,0 части на миллион (2 Н);(9) 6,2 части на миллион (1 Н);(10) 6,7 части на миллион (ЗН);(11) 7,2 части на миллион (1 Н);(12) 7,2 части на миллион (10 Н);(13) 7,3 части на миллион (5 Н).Эти результаты подтверждают, чтопродукт является продуктом присоединения Формулы (1),где Р К,2, й ии означают бензилоксикарбонил, бензилэтокси и 1 соответственно,В колбе емкостью 30 мл 0,125 г(0,197 ммоль) полученного продуктаприсоединения метилового эфира й -бензилоксикарбонил-.-аспартил-.-Фенилаланина и этилового. эфира .-Фенилаланина смешивают с 2 мл воды и0,24 мл 1 н НС 1 (0,24 ммоль), смесьперемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученную суспензию фильтруют, осадок промывают5 мл воды, сушат, получают 0,0807 гкристаллов этилового эфира й-бензилоксикарбонил-Е-аспартил- -Фенилаланина(чистота 100, выход 92,6). Кристаллы перекристаллизовывают из смесиэтилацетата и п-гексана.Точка плавления 128 - 135 С.1 о(3- 17,3 (С=1, метанол). Элементный анализ.Найдено, Ъ: С 62,82; Н 5,96;й 6,40.Вычислено, : С 62,43; Н 5,92;й 6,33,Инфракрасный спектр:ЗЗООр 2900 - 3100; 1730 р 1690 р1665; 1530 р 1440; 1200 - 1280; 1030620 р 740 см-".Спектр ЯМР, д: .1,1 части на миллион; 2,8 частина миллион, 3,0 части на миллион,4,1 части на миллион; 4,6 части намиллион, 4,8 части на миллион; 5,1части на миллион; 6,0 части на мил 5 лион; 7,1 части на миллион; 7,3 части на миллион; 9,6 части на миллион.П р и м е р 18. 1,189 г (4 ммоль)й-р-метоксибензилоксикарбониласпарагиновой кислоты и 1,837 г (8 ммоль)7 р хлоргидрата этилового эфира .-Фенилаланина помещают в колбу емкостью30 мл и растворяют в 1 н водном йаОН,рН доводят до 6,0.Раствор разбавляют водой до 15 мли смешивают с 0,1 г термолизина.Смесьперемешивают при температуре 38-40 Св течение 7 ч.Полученный осадок отфильтровывают,промывают 30 мл воды, сушат. Получают 2,401 г (выход 90,2) продуктаприсоединения этилового эфира й-р-метоксибензилоксикарбониласпартилфенилаланина и этилового эфира .-фенилаланина (1:1).Продукт перекристаллизовывают изсмеси метанола и диэтилового эфира.Точка плавления 82 - 87 С.(,Ы 3+ 6,0 (С=1, метанол).Элементный анализ,Найдено, Ъ: С 63,52; Н 6,77;40 й 5,54.М 4 З 3 1 оВычислено, : С 63,14; Н 6,51;й 6,31.Спектр инфракрасного поглощенияи ЯМР дают следующие характеристические максимумы. Инфракрасный спектр:3300 см-" (колебания растяженияй-Н); 2900 - 3050 см -1 (колебаниерастяжения С-Н)р 1720, 1730 и 1740 см(1) 1,2 части на миллион (6 Н);(2) 2,7 части на миллион (2 Н);65 .(3.) 3,1 части на миллион (4 Н);Заказ 4875/84 Тираж 443 : Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5(4) 3,8 части на миллион (ЗН)у (5) 4,0 части на миллион (4 Н)ф (б) 4,1 части на миллион (1 Н); (7) 4,5 части на миллион (1 Н); (8) 4,7 части на миллион (1 Н); (9) 5,0 части.на миллион (1 Н); (10) 5,5 части на миллион (4 Н); (11) б,1 части на миллион (1 Н);(12) 6,8-7,4 части на миллион (14 Н). Эти результаты показывают, что30 продукт представляет собой продукт присоединения формулй Л ), где Н 4, В К и и означают р-метоксибензил 2 ф 3оксикарбонил, бензил, этокси и 1, соответственно. 15 Повторяют процесс описанный в примере 22, за тем исключением, что используют полученный продукт присоединения вместо продукта присоединения метилового эфира й-р-метоксикарбониласпартилфенилаланина и метилового эфира -фенилаланина. Получают этиловый эфир -аспартил-Е- фенилаланина. Выход эфира 95,5. формула изобретенияСпособ получения дипептидных эфиров формулы .1ноЕ-(сн Ь. с-нн-н-с-в,-Ь.йгде й бенэилоксикарбонил, и-метоксибензилоксикарбонил;В- бензил;К- низший алкоксил;л - 1 или 2,о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтосоединение формулы0 О НН ООИ 1 н енОс в (Он ) -сн-с-нн-Сн-с Ъй а и ю 3Я 10 где В 4., В, й 3, и имеют указанныезнаяения, обрабатывают водным раствором кислоты и бтделяют полученный,целевой дипептйдный эфир в виде твер,дого продукта.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Японии Р 14217,кл. 16 С 64 к 1974.