Средство для определения лейкоцитов в моче

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ 14666 04 С 01 М РЕТЕНИЯ ПРЕДРЛЕНИЯ ЛЕЙК с(088. 8)на патенл. С 01 ФРГ 33/1 б, 1974. СЬ СО бром;С -С -алкэ С-С = тилмерино ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(5 б) ЗаявкатУ 2240471, к И Изобретение относится к медицине,в частности к средствам для визуального или фотометрического опреде-, ления лейкоцитов в .моче по уровню ферментов.Цель изобретения - повышение чувствительности средства.Поставленная цель достигается эа счет использования реактива на осно-. ве диаэониевой соли производных бензола общей формулы 1(57) Изобретение относится к биохимии. Цель иэббретения - повышениечувствительности средства. Йильтровальную бумагу пропитывают средствомсодержащим водный буфер иэ буры исоляной кислоты, основной реактиви дополнительный, Затем фильтровальную бумагу погружают в мочу, содер"жащую 200 лейкоцитов/мкл. Чувствительность средства тем выше, чеминтенсивнее окраска. 7 табл. 2пиррилидино, в случае необходимости замещенная метилом группа 11-пипераэино, группа Н-пиперидино:К - Водород 1 С 1-С алкил метокси, бром;К - водород, фтор, хлор, бром, гидроксил С С алкил, С, С алкок сил, группа метйламино, С-С -диалкиламино, в случае необходимости замещенная метилом или метокси фенильная группа, группа фенокси, М- морфолино, Ж-тиоморфолино, группа Я-пирролидино, в случае необходимости замещенная метилом группа Н-пиперазино, М-пиперидино, метилмеркапто одород, метил, метокси,дород, С-С-алкил, си, метилмеркапто, бром1466663 отношениях компон где К - водородпентил; ом, метокси,1-10 эток-; нзольО си, беное колК стогоукалу путем гредиент оотношен нение об путем в щей Форм анном й формодеи17 1,-аланил лил, Ь- В оеди получ5 нени заи уль б а О нные зн гд 0 КЗ 5 лы,оединени НО АиВ его ре ное значенным произв 0- во кокси О н тил, мето Реак ород, этилмино, диэтиород, метилалкиламфю в хиоводят изаестн ами и, диме приемами.ных примерах испытыв мии пептид В прив средства,45 веденныеип аокси, С, -но; пиламиеактивы, пр содержв табл. аблица т, С (разл ) Х 6 1 2 11 98 НСН, НН С,Н,С,Н,С,Нос,нБ-СН3 115 142 ОС Н Х - тетрафторборат, перхлорат и тетрахлорцинкат,и в качестве дополнительного реакти" ва содержит соединение общей формулы 11 водород, бром, С-Снитро, ацетиламино,е бензольное кольцо;водород, бром, метилзил, аннелированное беьцо;- бензоил, толуолсульфонил,ил, бензилоксикарбонил, аиетими"нзолсульфонил и метокситозил,одержит соединение общей Формурод, С-с,.-алкил, С -етиламино, диметиламиК- водород, метил, этил, метокси, а также два соседних заместителя К, К, К и К, - аннелированное бензольное кольцо;А. - аланил, Ь-аланил-аланил,1.-аланил-аланил-аланил, валил, Фенилаланил, лейцил, глицил;В - толуолсульфонил, ацил,10 бензоил, бензилоксикарбонил, ацетамидо-бензолсульфонил, бензоилкарбонил и метокситозил,и следующихв, мол./%;. Соединение Соединение или соедин лы 111 Буфер с рНСредство пешивания ег имеют укачения,общей Форму1 )А - В-СН Н В 4 93128 С 10 ВРф 18 Н Н 27, ОСН ВР 4ВР ННН Н1(СН,СН Я Я 13 18 19 20 21 8 . ОСН9 ОСН0 Н О НННСН ВР ВР 4 ВРа 42 46 37 27 08 45-А 1 Н 135(разл)142(разл)180 Н Н Н СН,ТосБензоил Н Тос 137Тос 88Тос , 119Ацетил 97 Н Н Н Н Н Н Н 15 Н 127127 114 Н Н Н Н Н СН 21 Н 22 Н23 С 1 24 25 Н ВгОСНэ Ацетам добенз суль етил итоз Н 17 18 19 2 О Аланил,Толуолсульфонил 4 СН, Н Н Н Н Н -СН=СН- Н Н Н снвг 4 Ь-А 1 а 1.-АТа Ь-А 1 а Глицил З Ь-вал Ь-лейцил Ь-фенил-А 1 а Ь-А 1 а Ь-А 1 а Ь-А 1 а Ь-А 1 а Тос Тос Тос Тос Тос Тос ТосБензилоксикарбонилТо жеН 123 145 128 156 177 184 28 03 47 641 О 1466663 Т аблица 3 Дополни тельный оТц, С А реактив ОСНОс НСНзН-0(СН )Н 11111117Ч71Ч 11 Н Н Н Н С,Н Н Н Н ОСН,Н НН СНуН НС Н1(С,Н,), Н 134 187 15221 147 К 10,72 142 Тос Тос Тос Тос Ацил Тос Бензоил 17397124128-ЮНСН3 Н Н Н Н Н Н ЧТ 1 Т1 ХХХТ ТосТосТосБензоилН Н11 НСН оксикарбонил 117 ОСН 1.-А 1 а з Тос Аннелиров анныйбензол ХТТ Ацетами добензолсульфонилБензоил карбонил Ь-лейцил Аннелированный Нбензол Х 111,ОСН Аннелированныйбензол 1.-А 1 а Н ХТЧ Тос 142 Ь-(АТа)3 Аннелиро ванныйбензолН НН НОСН Н Тос 119Тос 121Тос 182МетокситозилТосТос Э 1.-в алил1.-А 1 аЬ-АТаЬ-АТа 1(Сн з)аН(С,Н Х 71 Х 711ХХЧТ 11ХТХ Н Н Н Н Глицил Ь-А 1 а Н Н 158 152127 131 156 Тос Тос Тос Тос Тос Ь-АТа 1.-А 1 а Ь-А 1 а Ь-АТа Ь-А 1 а НОСНННН Н Н Н Н Н 158 Ь-А 1 а Ь-А 1 а Тос ОСН 147 ОСН Н Тос ХХТХ ОС Н,176 Тос П р и м е р 1. Фильтровальную бумагу пропитывают средством, содержащим 99-99,9 мол.% водного буфера из буры и соляной кислоты, 0,05 мол.% имеющего рН, указанного в табл.4 реактива и 0,05 мол.%, указанного в табл,4 дополнительного реактива, сопоследующей сущкой при 60 С.Приготовленную таким образомфильтровальную бумагу погружают на3 мин в содержащую 200 лейкоцитов/мклмочу, после чего визуально определяХХ 11ХХ 111ХХ 1 ЧХХЧХХЧ 1ХХ 7 Т 1ХХЧ 111 Н ОСНАннелиров анныйбензолН НН. Мснэ),НАннелиров анныйАннелиров анныйбензолАннелированныйбензолАннелированныйбензол 1-А 1 а1,-А 1 аЭ,1,-А 1 а1,-А 1 а1.-валилЬ-АТа-Ь-А 1 аЬ-фенилаланилЬ-А 1 аЬ-АТа1.-А 1 а1."А 1 аЬ-А 1 а1466663 12 ют получ аемую окраску. Чув ствительность средства тем выше, чем интенТ аблица 4 Активные вещества средстваОкраска по истечении 3 мин Дополнительный Р еактив реактив Предлагаемое средство красно-коричневаякрасно-коричневаясеро-голубаякраснаясветло-краснаяФиолетовая Я рковыраженная 11лиловаякрасно-фиолетоваяфиолет ов аясеро-голубаялиловаялиловая светло-краснаясветло-краснаякрасно-.фиолетоваякрасно-фиолетоваяСогласно прототипуКрасноватаяКрасноватаяСлабо красно-коричневаяСеро-голубоватая 28 24 29 30 Извес тное средствоСиневатая Т аб лиц а 5 Сравнение данных по окраске, при. веденных в табл.4, свидетельствует о том, что предлагаемое средство проявляет более высокую чувствительность, чем известные.) Активные вещества средства 11 экс П р и м е р 2. 1 мп,средства, содержащего 98 мол.% водного фосфатно" го буфера с рН 7,0, 1 мол.% указанного в табл.5 реактива и 1 мол.% указанного в табл.5 дополнительного реактива, смешивают с 1 мл мочи, содержащей 100 лейкоцитов/мкл. Через 3 мин после смешивания фотометром определяют экстинкцию при 600 нм. Результаты опытов приведены в табл,5,реактив Ыгсредство2,4 25 г,з г,1 Предлагаемое11211 28 24 29 30 28 24 29 30 28 24 29 28 19191919Х 111Х 1 Т 1Х 111Х 111ХХп 11ХХ 11 ТТХАУТ 1ХХ 7111ХХ 1 ХХЧТХЕТТХЧТТТ сивнее соответствующая окраска, Результаты огпттов приведены в табл.4Реактив Дополни 50 111 г тельный1466663 13 Продолжение табл.5 Продолжение табл.5 Активные вещества средства 11 э Реак Реактив Ог Дополнительный ополниельныйеактив Кт реакт Яг23ХХТТ 23 23 3ТТТ41 Ч ХХ 1 Ч25ХХЧ26ХХЧ 1ХХЧ 11ХХЧ 111ХХТХ1 25 25 26 Ч6Ч 17Ч 118Ч 111 28 29 ЗО 1 Х10Х 31 31 32 33 33 34 34 11 Т 12Х 1113Х 11 Т14Х 1 Ч Т 5 огласно прот 5 звестное средст 16ХЧ 117 2,2 2,0 2,6 2,42,9 3,0 2,1 2,2 4 ОСравнение данных по экстинкциичерез 3 мин, приведенных в табл,5,свидетельствует о том, что предлагаемое средствопроявляет более высо кую чувствительность, чем известноеП р и м е р 3. Процесс проводятсогласно примеру 2, за исключениемтого,что используют средства, содержащие по 10 или 25 мол.Х реакти О ва и дополнительного реактива, указанных в табл.6. Т Т 1 19 Х 1 20 2:1 19 20 2, 2 е 21 21 22 22 2,3 2,5 2,8 2,6 ХХ 122ХХ 1 9 9 10 10 11 11 12 12 13 13 14 14 15 15 16 16 17 17 18 18 2,6 2,4 2,8 2,7 2,2 2,4 2,9 3,0 2,5 2,3 2,6 2,3 2,1 2,3 2,82,6 25 2,5 2,9 2,7 2,1 2,2 2,4 2,6 Активные вещества5средства 2,7 2,5 2,6 2,4 2,5 2,8 2,6 2,1 2,4 2,7 2,6 2,4 2,2 2,5 2,6 2,71466663 15 16 Таблицаб Активные вещества средства ополодержаие доолниСодержаниереакеактельй в тельно го ре- актива е тив а, мол.%,% средст едлагае 1 10 1 25 1 10 1 25 10 .1 О 10 25 10 1025 2,6 2,7 2,6 2,8 2,3 2,5 2 5 10 25 10 25 10 25 10 25 25 Х 10 20 2 2 2,7 2,9 2,8 3,0 2,8 2,9 2,7 2,9 5 25 1 О 25 10 3 3 3 25 10 рототипу огл 5 Известное сре 5 р с рН 6;р с рН 8пытов приве ж) трис-буфз) трис-буфРезультатыле 7л, б свидетель 1 соком содерзвестныествительны в Т аб лиц а 7 с. Опыт Дополни тельный олни ельныи еактнв 1. Сравнение данных табствует о том, что при вьжанни активных веществ исредства уступают по чувности предлагаемому составу.П р и м е р 4, Процесс ведут аналогично примеру 2, за исключением того,. что используют средство, содержащее 1 мол.% реактива,1,1 мол.% дополнительного реактива 1 илии 98 мол.% следующего водного буфера:а) натриево-боратный(соляная кислота с рН 8;б) натриево-борта с,рН 8;в) натриево-боратный сг) калиево-фосфатный сд) калиево-фосфатный се) калиево-фосфатный с18 17 Средство для определения лейкоцитов в моче, содержащее реактив на основе диазониевой соли производных бензола и буферное вещество, о т л ич а ю щ е е с я тем, что, с целью повышения чувствительности средства, оно содержит в качестве диазониевой 10 соли соединение обшей формулы 1"г м,группа М-тио- случа ая метиломгруппа Н-пиЬд Ъ где К- водС -С -алкокси5амино;К, - водород,0 токси, диметиламиноК - водород,этил, метил, меди э тил амино;метил, С-Сз-алкно, дипропилами-С-алкил, ркапто, бр т, перхл ного реактибщей форму 50 Формула изобретения Ь Егде К, - водород, хлор, бС-Су-алкил, С, - Г-алкоксиметилмеркапто, 11-морфолино,морфолино, И-пиррилидино,необходимости з амещеннгруппа Н-пиперазино,перидино;К - водород, С,-С -алкил,метокси, бром;Кэ - водород, фтор, хлор, бромгидроксил, С,-С -алкил, С-Г -алкоксил, группа метиламино, С-С -диалкиламино, в случае необходимости эамещенная метилом или метокси фенильная .группа, группа фенокси, Н-морфолино, М-тиоморфолино, группа Ипирролидино, в случае необходимостизамешенная метилом группа Н-пипера-.зино, М"пиперидино, метилмеркапто;К - водород, метил, метокси,бром К - водород, С, С-С-алкокси, метилме и хлор;Х - тетрафторборат и тетрахлорцинкат,и и качестве дополнител ва содержит соединение лы 11Ь где К 6 - водород, .хлор, бром, метокси, пентил;К - водород, бром, С-С алкил, метокси, н 1 тро, ацетиламино, аннелированное бензольное кольцо;К - водород, бром, метил, этокси, бенэил, аннелированное бенэольное кольцо;К - водород, бром, метил, фенил;А - аланил, 1."аланил-аланил,Ь-аланил-аланил-аланил, глицил, валил, Ь-лейцил фенилаланил;В - б енэоил, толуолсульфонил, ацетил, бензилоксикарбонил, ацетимидо-бензолсульфонил и метокситоэил, или содержит соединение общей формулы 111О А ород, С,-С -алкил,метиламино; диметил окси, С-С-алкиламино;К- водород, метил, этил,метокси, а таже два соседних заместителя К,о, К, К, и К,. - аннелированное бензольное кольцо;А - аланил, 1,-аланил-аланил,1,-аланил-аланил-аланил, валился фенилаланил, лейцил, глицил;В - толуолсульфонил, ацкл,бензоил, бензилоксикарбонил, ацетамидо-бенэолсульфонил, бензоилкарбонил и метокситозил,при следукицих соотношениях компонен"тов мол ДСоединение общейформулы Г О, 05-25Соединение общейформулы 11 или соединение общей формулы 111 0,05-25Буферное веществос рН 6-10 .Остальное