Способ получения замещенных 3-фенил-7н-тиазоло3, 2-в 1, 2, 4 триазин-7-онов

50 Х животных были вызваны повв званы поврежде- ру ( после орального назначения 3 15ния,Уи 6,3 мг/кг вызывало значительную3. Острая токсичность, нормализацию иммунной реактивности,Определение величин Ыеличин Ыо произво- в то время как при дозах до 25 мг/кгдили по ста а т (по мнд Р. у ( о смертности, нас- испытанный напроксен был неэффектитупившей в течение 7 дней у ММК 1 (Яача 1 Мейса 1 йеяеагсЬ 1 пяйй пяйх 1 це) - мы- Ь) Вызванный коллагеном типа 11шей (6 животных на дозу) после одно в артрит.кратного внутрибрюшинного (Ого (1.р.) приема,О Б этом опыте артрит вызывали наРезультаты этих иссле ованедований при- крысах Вистара мужского пола при поведены в табл. 2. мощи коллагена типа 11, который полуИз кривой эффективности дозы в мо-чали по стандартным методам Миллерадели дополнительного артрита получили, и Родеса из носовой перегородки тенапример, для соединения из примера ленка и впрыскивали внутрикожно жи 1 величину ЕД (разовая доза)вотным в смеси с неполной добавкой10,9 мг/кг, которая определенно бла- Фройндша. Процесс иммунизации повтогоприятнее, чем соответствующая срав- ряли через 7 дней, Через 20 дней поснительная величина 17,5 мг/кг для ле первой иммунизации разделяли забостандартного препарата напроксена. В левших крыс на группересчете на острую язву делениемкоторые в последующий 20-дневный пе,0 на Щ вычисл ипбо в числили терапевти- риод лечения получали один раз в деньческий спектр действия 36,7 для . соответствующее испытываемое веществосоединения п име а 1р р , который у срав- или чистую индиферентную основу лекарнительного препарата напроксена сос ственного препарата (контрольная груптавляет только 1,3, что характеризу- па) орально. На 41-й день опытов, т.е.ет хорошую желудочную совместимость через день после последнего приемапредлагаемых соединений. Такие же вещества, определяли прирост объемаданные получены при вычислении терапевтического спектра действия когда 30 При этом соединение по примеру 1брали за основу опре еленные Л 1 50 /Д 50, показывало зависимое От дозы торможедля соединения примера 1 лежит вьппе ние увеличения объема лап, которое от110 и для напроксена 28,6). доз 25 мг/кг при ралмг кг при оральном назначенииТаким образом, испытания показали . было статистически значительным, в тозначительное превосходство, соедине- время как для На рний, полученных по предлагаемому спо- вой дозировке получали только небольсобу, над стандартным препаратом - шие величины торможения.напроксеном.4 ТИ в этой модели артрита с коллаге"орможение иммунопатологических ном чувствительн наувствительно нарушается иммунноепроцессов. 4 О состояние лимфоцитов. Поэтому из сеПрогрессирующее течение воспали- лезенки опытных животных получали лимтельно-ревматических заболеваний в фоциты и исследовалоциты и исследовали их иммунную акосновном вызывается нарушениями в тивность относите ьнность относительно митогенов, приимунной системе и причинная терапия чем соединения лсоединения, полученные по предламожет быть эффективной только в слу гаемому способу, оказывают зависимоечае применения медикаментов которые от дозы лечебно еозы лече ное действие на сильномогут прервать эти иммунопатологичес- ослабленную иммунную с сти мунную систему, в .токие процессы. время как напроксен не проявляет ни" к, например, приа) Вызванный дополнительно артрит. какого действия. Так напримеВ описанной в пункте 1 модели с ц дозе 12 мг/кг (оральное назначение)крысами вызванный добавкой Фройндша соединения по примеру 1 полностью норартрит обычно сильно снижает иммунную мализовали иммунную функцию как Тактивность лимфоцитов относительно так и В-лимфоцитов,определенных митогенов, например кон- с) Активная реакция Артюса.кавалина-А, фитогемагглютинина-А и55В качестве подопыткачестве подопытных ливотныхдекстрансульфата. Поэтому искали служили Бргадие-Ваы 1 еу - крысы с вестимулирующее действие на этот силь- сом тела ЯО - 100 г, которым впрыскино подавленный иммунный ответ. При вали 0,5 мл эмульсии вакцины коклюшаэтом, например, соединение по приме- и овальбумина в вазелиновом масле под 1579462 12кожно в корень копчика. Через две не -дели крыс разделяли.на группы по 8животных. За 24 ч и 1 ч до провоцирования реакции Артюса инъекцией 0,1 мл0,4 /-ного раствора овальбумина в пра 5вую заднюю лапу давали орально соответствующее испытываемое вещество иличистую индиферентную основу лекарственного препарата (положительный конт- Ороль), В левую лапу впрыскивали раствор хлористого натрия, Группу несенсибилизированных животных (отрицательный контроль) точно так же обрабатывали овальбумином чтобы исключитьнеспецифические реакции относительнопротеина.ФКритерием оценки действия препарата служило торможение увеличения объема лапы по сравнению с торможениемсенсибилизированной, но не обработанной контрольной группы (положительныйконтроль) через 4 ч после провокацииовальбумина, когда. опухание достигаетсвоей максимальной величины, 25Нестероидальные противовоспалительные средства, включая напроксен, приэтой постановке опыта неэффективны.Напротив, реакцию Артюса можно с успехом тормозить после орального назна-Очения, например, соединения по примеРу 1 с ЕД 10 - 15 мг/кг,юо5. Антиокислительное действие.В обусловленном многими Факторамипрогрессивном течении ревматоидногоартрита и других воспалительных заболеваний решающее участие принимают агрессивные кислородные радикалы, которыев избытке образуются во время хро-нического воспалительного процесса и 4 Онепрерывно поддерживают протекающеечерез переокисление липидов оболочекклеток разрушение соединительной ткани, Следовательно, оказывающие антиокислительное действие Фармацевтические средства со способностью дезактивирования этих крайне цитотоксическихкислородных радикалов должны обеспечивать целенаправленное вмешательствов хроническое течение воспаления. Подходящую модель на животных для подобного вызванного кислородными радикалами разрушения ткани представляет воспаление, индуцированное на крысе припомощи адриамицина (доксорубицина),а) Вызванное адриамицином воспале-ние.Исследования проводили по методуЗигеля на Яргадие-Эа 1 еу - крысах мужского пола с весом тела 200 -230 г (в группах по 7 животных), которые получали 0,1 мг адриамицина,растворенного в 0,1 мл 0,9 Х-ногораствора хлористого натрия, подкожнойинъекцией в левую заднюю лапу.Через 72 ч определяли увеличениеобъема лапы как меру степени воспаления при.помощи измерения плетизмографом.Оральное назначение испытываемыхпрепаратов в 1 Х-ной водной суспензии карбоксиметилцеллюлозы проводилиодин раз в день в течение четырех слеследующих дней, начиная со дня инъекции адриамицина,Результаты исследований приведены в табл. 3.Как вытекает иэ табл. 3, и в этомтесте соединение по примеру 1 показывало сильный зависимый от дозы защитный эффект против вызванного адриамицином разрушения ткани. Как стероидальные, так и нестероидальные противовоспалительные средства, включаянапроксен, при этой постановке опытанеэффективны б) Торможение в пробирке переокисления липидов.Защитное действие соединений, полученных по.предлагаемому способу, по сравнению с агрессивными. кислородными радикалами определяют с помощью теста с тиобарбитуровой кисло-, той по А.ОССо 1 епуЬ. При помощи этого метода в пробирке можно на основании образующегося при окислительном расщеплении связанных мембраной много-. кратно ненасыщенных жирных кислот малонового диальдегида определять влияние как микросомального, так и,митохондриального переокисления липидов препарата с антиокислительным действием.Результаты исследований показали что соединения формулы 1 оказывают сильное тормозящее действие. Для соединения по примеру 1 с микросомами и митохондриями из печени крыс получали, например, 1 С, - б 10 или310 мол/л.6. Торможение 5-липоксигеназы, Тормозящее действие соединений, полученных по предлагаемому способу, на катализированное 5-липоксигеназой расщепление арахидоновой кислоты было обнаружено на опытах в пробирке на( 31К - водород, прямой или развет 3вленный С-С 4 -алкил или оксиметил.о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, З-меркаптоН,2,4-триазин-он об-, щей формулы 11 НЯ" 3нЛ о где К имеет указанные значения,подвергают взаимодействию с 2-галоген-фенилалканоном общей формулы111 СС Ю 3 Н указанные зна К( и ния;Х - галоген,в нейтральной или кислой среде с чением целевого продукта, или в основной среде с образованием промежу точного Б-алкилированного 2 Н,2,4- -триазин-онаобщей формулы 1 Ч полуС СН)НО.2 где К, К и К,имеют указанные значения,с последующей его дегидратацией с образованием целевого продукта.2. Способ по п, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что получают соединение формулы 1, где К- трет-бутил;К и К - независимо друг от друга,водород или метил.3, Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что получают соединение формулы 1, где К - трет-бутили К и К - одновременно - водородили метил.4. Способ по п. 3, о т л и ч а ющ и й с я тем, что получают 3-(3,5-ди-трет-бутил-оксифенил)-7 Н-тиазоло 3,2-Ь 1,2,4 триазин-он. С СНЯ ИО В изолированных полиморфноядерных гуманных гранулоцитах. Для этого инкубировали стимулированные кальций-ионофором А 23 187 (Са 1 ЪдосЬеш ГмбХ, Франкфурт-на-Майне, ФРГ) клетки с С-маркированной арахидоновой кислотой, и образованные через 15 мин при 37 ОС биотрансформацией радиоактивные продукты основного расщепления арахидо Оновой кислоты - 5-оксиэйкозатетраенивая кислота (5-НЕТЕ) и оказывающий особенно сильное противовоспалительное действие лейкотриен В (1 ТВ 4) пос 4ле отделения определяют количественно методом жидкостной хроматографии при высоком давлении (НР 1,С).В этой экспериментальной установке можно значительно тормозить образование как 1.ТВ 1, так и 5-НЕТЕ и следова-,ф О тельно, расщепление арахидоновой кислоты через 5-липоксигеназу в результате 15-минутного предварительного инкубирования гранулоцитов при помощи соединения по примеру 1 при концентра гции 10- 10 6 мол/л.Следовательно, новые соединения формулы 1 являются терапевтически пригодными противоревматическими средствами, которые выгодно отличаются от 1 О известных нестероидальных противовоспалительных средств лучшей совместимостью и более причинным вмешательством в ревматический патологический процесс. Они усиленно вмешиваются в альтернативный путь расщепления ара.35 хидоновой кислоты, причем они тормозят 5-липоксигеназу и тем самым препятствуют чрезмерному образованию лейкотриенов, дезактивируют высокореак О ционноспособные кислородные радикалы, которые как воспалительные медиаторы , непрерывно подцерживают разрушение клеток и ткани в ревматических суставах, и/или восстанавливают иммунную 45 систему и тем самым открывают возможность болеепричинно лечить медикаментами ревматические заболевания. Формула из обретения1. Способ получения замешенных 3-ЖенилН-тиазоло Ь,2-Ь 1 1,2,41 триа-зин-онов общей формулы 1