Циклический аналог брадикинина, обла-дающий способностью создавать пролонги-рованный депрессорный эффект b эксперимен-te, a также васкулярную прони-цаемость b эксперименте

и 798098 ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советски кСоциалистическихРеспубюаао делам язвбретеяяй н втарытяй(72) Авторы изобретения Г, И. Чипенс, ф, К. Мутулис и И. П. Мисиня Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза АН Латвийской ССР(54) ЦИКЛИЧЕСКИЙ АНАЛОГ БРАДИКИНИНА, ОБЛАДАЮЩИЙСПОСОБНОСТЬЮ СОЗДАВАТЬ ПРОЛОНГИРОВАННЫЙДЕПРЕССОРНЦЙ ЭФФЕКТ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ й ччО,А ТАКЖЕ ВАСКУЛЯРНУЮ ПРОНИЦАЕМОСТЬВ ЭКСПЕРИМЕНТЕ 1 тт Вв 1 ц Изобретение относится к циклическому аналогу брадикинина, биологически ак тивному соединению, которое может най-, ти применение в медицине. 5Брадикинин и другие нептиды, содер-. жащие аминокислотную последовательность брадикинина, широко распростра иены в живой природе и выполняют важные функции регулирования биохимичес ких и физиологических процессов в ор ганизмах животных и человека. С нару шепнем динамики образования и расщеп ления брадикинина и родственных ему пептидов связаны различные заболевания и патологические состояния человеческого организма 1.Природный брадикинин для лечения подобных нарушений не пригоден. Основные его недостатки: кратковременностьдействия (период полураспада брадикинина в крови человека 30 с) и широкийспектр биологических эффектов, т. е. отсутствие селективности. Поэтому терапевтическое применение брадикинина может привести к недопустимым побочнымявлениям. Те же недостатки отмечены иу известных в настоящее время синтетических аналогов брадикинина 2- )4. Цель изобретения - новое соединение, обладающее свойствами брадикинина, селективностью и пролонгированностью биологического эффекта. Псставленная цель достигается циклическим аналогом брадикинина, имеющим структуру:3 7980981й)н-с "1гснМНг1СО СН СН 214 ИН СО Сн МН с Рго - Рго -С 6 - РЬе - Й 0 -Рм- РЬ Способ полу на известных м ЦИКЛИЧЕСКОГО ЭИЭЯОГЗ бДИДИКИОМИЗ(см. схему.) чени ЦРге РЬе Ьу р . Синтез ц глицин)брадики используют пр Прплавления, определяемые в капиллярах, приведены без Индивидуальность полученн проверяют с помощью тонк матографии (ТСХ) на плас фол Уф 254 в системах;А хлороформ. этанол-этилкислота-вода (35:5;8; открытыхисправления ых соединени ослойной хроинках "Силу В синтезе аминокислот, нал (Венгрия иа вакуумномВсе амино авля. Упаривания испарителе пр ацетат-уксу(22,8 ммоль) порошка хлористоводородной соли Й -нитрофенилового эфираО -бензилоксикарбониллизина. Смесь перемешивают 30 мин при -10 С, затемОв течение 2 ч по каплям добавляют раствор 2,55 мл (22,8 ммоль) Й -метилморфопина в 50 мл диметилформамида,Перемешивание продолжают в течение30 мин при -20 С, затем добавляют1,33 мл (12,1 ммопь) Ь -диметиламиноэтиламина, Смесь вновь перемешивают30 мин, упаривают растворитель, остатокрастворяют в смеси 100 мл этилацетатаи 100 мл воды. Эгилацетатный слой от-деляют и промывают 10%-ными растворами бикарбоната калия и бисульфата калия (дважды) и водой. Сушат над сульфатом магния, фильтруют, упаривают. Получают желтоватое аморфное вещество.Выход 13,5 г (86,5%). Р 0,80 (А)и 0,90 (Г).ф(оо,9 (с 1, диметилформамиа) .д(,-Бензилоксикарбонил-Е-(третбутилоксикарбрнил-О-нитро)аргинил) пизилиролин (О 5-7)В раствор 10,0 г (14,2 ммоль)С 5-6 в 100 мл диметилформамида-,вводят 2,46 г (21,4 ммоль) мелкорастертого пропина и 1,66 мл(1,49 ммоль 8 -метилморфолина и,смесь перемешивают на магнитной мешалке 20 ч. Затем растворитель упаривают,. остаток растворяют в смеси 100 млэтилацетата и 100 мл 10%-ного раствора бисульфата калия, водный слой отделяют, этилацетатный слой экстрагируют 10%-ным раствором бисульфата калия, а затеМ 10%-ным раствором бикарбоната калия. Водный слой отделяют,нейтрализуют 10%-ным раствором бисульфата калия, доводят рН до 2 и экстра-.гируют продукт этилацетатом (2 х 100 мл). 5 7980Б хлороформ-этанол-н-бутанол етил 1 ацетат-вода ( 10;6:4:3: 1);В хлороформ-метанол-вода(4:1:1);Д этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода (5;5:1:3)и электрофореза на бумаге г М 16 в 1 Яили 5 Ц уксусной кислоте. Зпектрофоретическую подвижность Е ,; определяют поотношению к гистидину, Пятна веществобнаруживают при облучении хроматограммультрафиолетовым светом, а также опрыскиванием кингидрином или при помощи 1 Юреагента хлора-бензидина. Ипя идентифи-кации соединений используют протонныймагнитныйрезонанс (ПМР) при 60 мГц,спектры снимают на приборе РОГОВЫ 1 ЯВг К 12 А". Амииокислотный анализ 20выполняют на анализаторе 840 СЬЬ 200после гидролиэа пептида в запаянной ампуле при 110 О в течение 24 ч.Трет-Бутиловый эфир бенэилокснкар.;.бонилпролилглицина (Е 8-9). 2%К раствору 10,0 г (40 ммопь)бензилоксикарбонилпролина в 50 мл диметилформамида, добавляют 4,45 мл (40 ммоль)К -метилморфолина и при -15 С (по капОлям) охлажденный раствор 5,30 мл ЗО(40 ммоль) иэобутилового эфира хлоругопьной кислоты в 10 мл диметилформамида.Реакционную смесь перемешивают 30 минпри -15 С и добавляют к ней охлажденОную суспенэию 10,6 г (50 ммоль) фосфита трет-бутилового эфира глицина в100 мл диметилформамиаа и 0,56 мл(50 ммоль) К -метилморфолина. Смесьперемешивают 30 мин при -15 С и осОтавляют на 15 ч при -10 С. Раствори" щОтель упаривают в вакууме, остаток растворяют в смеси 100 мл этилацетата и100 мл воды, этилацетатный слой промывают 10%-ными растворами бикарбоната калия и бисульфата калия и водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют иупаривают. Продукт выкристаллизовываютиэ полученного масла обработкой последнего смесью эфира с гексаном (1:1).Т,па 71-72 С М,0 (с 2,диме-тилформамиа). Выход 9,2 г (63%).Я 0,55 (А); 0,64 (Б) и 0,68 В),Трет-Бутиловый эфир пролвпаицина7 79809Экстракт сушат над сульфатом магния,фильтруют и упаривают. Получают бесцветное аморфное вещество. Выход 7,9 г(Е 5-7).5,0 г (7,37 ммоль) 0 5-7 растворяют в смеси трифторуксусной кислоты с 1 фохлористым метиленом (1:1) при 0 С.Выдерживают 20 мин при комнатной температуре, затем упаривают при комнатнойтемпературе досуха. Остаток растворяютс сухим эфиром, образовавшееся твердое 1 ювещество отфильтровывают и промываютсухим эфиром. Выход бесцветного аморфного вещества 5,0 г (98%). Е 0,49ЯО " о(с 1, диметилформамид),0,57 (В); ро0,70 (Д).Трет-Бутоксикарбои нлфен илал ан ипглнцкн (С 1-2) .6,4 г (16,6 ммоль) 11 -нитрофенилового эфира трет 45 утоксикарбонилфенилалани- рна; 1,13 г (15 ммоль) глицина и 1,67 мл(15 ммоль) И -метилморфопина растворяют в смеси 200 мл диметилформамида и20 мл воды. Полученный раствор выдерживают 20 ч при комнатной температуре,упаривают и оставшееся масло растворяют в смеси 80 мл 10%-ного водногораствора бикарбоната калия и 50 млэтилацетата. Этилацетатный слой отделяют,а водный слой экстрагируют 50 мл эфираи 10%-ным водным раствором бисульфата калия, доводят рН до 2 Полученныйраствор экстрагируют этилацетатом(2 х 50 мл), экстракт промывают 50 млводы сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают досуха, Получают бесцветное кристаллическое вещество, Выход 4,0 г (82,7%). После перекристаллизации из этилацетата Т. пл,165 С (с разложением)/об/-9,0 (с 1,0 70 0диметилформамид), й0,85 (А); О0,90 (Б) и 0,88 (В).И -Нитробензиловый эфир трет-бутоксикарбонилфенилаланил глицил пролилфенилаланина (с 1-4).56К раствору 2,80 г (8,7 ммопь) С1-2 в 50 мл сухого диметилформамиаадобавляют 1,84 г (10 ммоль) пентафторфенола, смесь охлаждают до -20 С идобавляют к ней 1,90 г (9,2.ммоль)дициклогексилкарбодиимица,встряхиваютдо растворения последнего и выдерживают 30 мин при 0 С, Затем добавляо,ют 4,15 г (8,7 ммоль) гидробромида 8 8Д -нитробензилового эфира пролилфениланина (С 3 4) и 0,97 мл (8,7 ммоль)Ц -метилморфолина. Выдерживают прикомнатной температуре, контролируя р 1среды с помощью индикаторной бумаги,и в процессе реакции по каплям добавляют Н -метилморфолин, для поддерживания рН около 8. Спустя 3 ц послевведения аминокомпоненты смесь упаривают, к остатку добавляют 100 мл хлористого метилена, осадок отфильтровывают, фильтрат промывают последовательно 10%-ными растворами бикарбонатакалия, бисульфата калия и водой, Сушатнад безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Полученное маслокристаллизуют растирая с сухим эфиром.Выход 5,4 г (88,4%). Т, пл. 125155 СО -, 45,6 (с 1,диметилформамид). Р 0,88 (А); 0,91 (Б) и0,91 ( Г).Гидразит трет-бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаленина (Е 1-4),3,0 г (4,27 ммоль) Е 1-4 и 1,0 млгидраэингидрата нагревают 1 ч в 30 млоэтанола при 70 С. Фильтруют, к фильтрату добавляют 50 мл воды и смесьвыдерживают 20 ч при -10 С, осадокотфильтровывают и кристаллы на филь:ре промывают 30 мл 50%-ного водногоэтавола, затем водой до нейтральнойреакции фильтрата. Сушат над пятиокисьюфосфора, Выход 2,30 г (92,8%). Т. пл.140-160 С(О -59,8 (с 1 диметилформамид).0,93 (А); 0,92 (Б) и0,91 (Г),о -Бенэилоксикарбонил- (; Л трет-бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланил-у-нитро)аргинил)лизилпролин(Г 1-7).К раствору 2,1 г (3,62 ммоль)Е 1-4 в 50 мл диметилформамида, околажденному до -30 С при перемешиваонии, добавляют охлажденную (-70 С)смесь 3,5 мл (15,7 ммоль) 4,5 нраствора сухого хлористого водорода втетрагидрофуране и 20 мл этилацетата.Затем при -30 С по каплям добавляют0охлажденный раствор 0,45 мл-25 С, затем добавляют 1,76 мл (15,8ммоль) К -метилморфолйна, после чеговводят раствор 2,68 г (3,87 ммоль)Е 5-7 и 0,44 мл Н -метилморфолинав 50 мл диметилформамида. Смесь выдерживают 3 сут при -10 ОС, упаривают,остаток растворяют а смеси 100 мл хлористого метилева и 100 мл аоаы, Слой79809 хлористого метил и отделяют, промывают последовательно 1 ОЪ-ными растворами бикарбоната калия, бисульфата калия и водой (ло 100 мл), сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Получают мчсло, из которого при растирании со смесью эфира с этилацетатом ( 1:1) вь)кристаллизовывается продукт. Выход 3,50 г (85,8%), Т, пл. 140- 177 С.(ф( - 44 1 О (с 1, диметилформа мид).0,53 (Л); 0,84 (Б) и 0,87(Г),Трет-Бутнловый эфир ц 1, -бензилоксикар-. бойил-Я-(трет-бутоксикарбонилфенилаланилглидилпролилфенилаланил-Я-нитро)- -аргинил)лизилпролилпролилглицина 1-9)10иК охлажденному до О С раствору 2,70 г (2,40 ммоль) Р 1-7 в 40 мл диметилформамида добавляют 2,19 г (2,89 ммоль) комплекса дидиклогексикарбодиимида с пентафторфенолом и 1,1 г 20 (4,8 ммоль) трет-бутилового эфира пролил глицина ( Р 8-9) . Смесь выдерживают 20 ч при комнатной температуре, упаривают остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена, фил ьтруют, фильтрат промы-. 2 вают 50 мл 10%-ного раствора бисульфата калия и 50 мл воды, Сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают, Остаток дважды растворяют в минимальном объеме хлористого метилена и осаждают эфиром. Выход 2,8 г (87,2%), Т, пл 150-193 С с разложением/Жфо ) 60,3 (с 1, диметилформамид). Ку 0,57 (А); 0,68(Б) и 0,60(Г).Гидрохлорид 06 -бензилоксикарбонил -Я -( трет-бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланил) -нитро) аргинил)- -лизилпролилпролилглицина (Н 1-9).1,8 г (1,346 ммоль) Я 1-9 при 0 СР растворяют в 20 мл смеси трифторуксус ной кислоты с хлористым метиленом (1:1), выдерживают 20 мин при комнатной тем 0пературе и упаривают при О С. Остаток кристаллируют растиранием с 50 мл сухого эфира, отфильтровывают и растворяют 4 з в 10 мл сухого диметилформамида. К раствору добавляют 033 мл (1,5 ммоль) 4,5 н раствора безводного хлористого водорода в тетрагидрофуране и продукт осаждают 100 мл сухого эфира. Вюиод 1,5 г дд ,(95%) /Й/ ф - 77,8 о. Т. лл. 140 192 С.Й078 В) и 074 )Д).Биллаад.беиаилоисикарбоиил Е фа нилаланилглицилпролилфенилаланил (ЯИ -нитро) аргинил) лизилпролилпролилглицил (Р 1-9).К раствору 1,1 г (0,91 ммоль) Н 1-9 в 2 л сухого дцметилформамида 8 10при перемешивании в атмосфер сухого аргона при О С добавляют 1,5 го(1,98 ммоль) комплекса дициклогексилкарбодиимида с пентафторфенолом (1;3) ( "комплекс ф-").Смесь перемешивают в атмосфере аргона при комнатной температуре, в течение 6 ч. Затем добавляют раствор О, 19 мл ( 1,38 ммоль) триэтиламина в 300 мл диметилформамица. Полученнную смесь выдерживают при комнатной темО пературе 2 сут и упаривают при 28 С. Маслянистый остаток закристаллизовывают растиранием с сухим эфиром, фильтруют и осадок на фильтре просываюг эфи ром, затем водой. Полученный продукт .,чистят на колонке (2 к 100 см) с силикагелем (средний размер частиц 20 мк) (фирмы Хемапол, ЧССР). Для элюирования используют систему хлороформ:этанол: н-бутанол:этилацетат ( 10:6:4: 3) .фракции, содержащие предполагаемый циклопептид, собирают и чистят вновь на колонке с силикагелем (Зх 250 см, средний размер частиц 20 мк)., используя систему Б в качестве элюента. Собирают фракции по 20 мл и регистрируют поглоще- ние при 280 нм ("Увикорд 11") фракции с 55 по 66 объединяют и упаривают, остаток обрабатывают эфиром. Получают 102 мг (9,73%) кристаллического ве 0шества. Т. пл. 163-165 С, Хроматографически чистый (проверен по ТСХ на пластинках МЕРК в 6 системах), К 0,47 (Б). Молекулярный вес найде но 1024 (определен криоскопически, используя расплав мочевины), вычислено по формуле 1163, 313./о(- 64,120 О диметилформамид),О, 3 7 ( А ) ф 0,43 (Б); 0,89 (В); 0,96 (Д) и 0,37 (Г). Цикло (Я -фенилаланилглицилпролилфе);нилаланиларгинил) лизилпролилпролилглицин)диацетат (цикло-(1 лизил 6-глицин)-брадикинин )1-9,50 мг (0,043 ммоль) 3 1-9 растворяют в 5 мл уксусной кислоты и гиарируют 20 ч в присутствии палладиевойчерни. Катализатор отфильтровывают, ифильтрат лиофилизуют. Остаток растворают в 10 мл и вновь лиофилизуют. Растворяют в 10 мл воды, фильтруют через меммембранный фильтр "Сынпор" и вновь,лиофилизуют, Получают белый рыхлый поошок. Хроматографически гомогенныйоцД -76 (с 0,65, вода). Выход45,7 мг (96%). Ец, 0,65 (1 йуксусная кислота), Я0,69 (Л).