Штамм бифидобактерий вifidовастеriuм аdоеsсеnтis мс-42, используемый для приготовления кисломолочных продуктов и способ получения закваски бифидобактерий для кисломолочных продуктов

:.,Н АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ Союз Советскмк Соцналистическия Реслублнк(6 ) Дополнительное к авт. свид-ву - (22) Заявлено 251279 (21) 2900607/28-13 с присоединением заявки Ио -(51)М. Кл. С 12 й 15/00 А 23 С 9/12 С 12 й 15/00 С 12 й 1/01 Государственный комитет СССР ио аелам изобретений и открытий(1%3) УДК 663,15 (088.8) Дата опубликования описания 15.0981(54),ШТАММ БИФИДОБАКТЕРИЙ В 1 ЕООВАСТЕВ 1 ОМ АООЕБСЕИТ 15МС, ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНЫХПРОДУКТОВ, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАКВАСКИ БИФИДОБАКТЕРИЙДЛЯ КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ Изобретение относится к молочной проьаыленности, а именно к технической микробиологии, и касается штамма В 1 Г 1 доЬастег 1 цщ абоеясеот 1 а МС, используемого для приготовления кисломолочных продуктов, и способа получения закваски бифидобактерий для кисломолочных продуктов.Известны штаммы бифидобактерий, в частности В 1 Е 1 с 1 оЬасеег 1 ощ Ь 1 Г 1 дца 1 В 1 применяемые для производства би" фидумбактерина и колибактеринаИ .Однако эти штаммы не сквашивают молоко и в связи с этим они не пригодны для производства кисломолочных 15 продуктов.Известны различные способы получения заквасок молочнокнслых бактерий (лабораторных и производственных), используеьщх для производства кисло молочных продуктов 23Однако эти способы не предназначены для получения заквасок бифидобактерий.Известен также способ получения закваски бифидобактерий для кисло-. молочных продуктов, предусматривающий приготовление лабораторной закваски путем культивирования в питательной среде исходной культуры бифидо" 30 бактерий с последующим приготовлением производственной закваски эаквашиваиием лабораторной закваской молочной . питательной среды, содержащей серно- кислый магний, уксуснокислый натрий и аскорбиновую кислоту, с последующим инкубированием при 37-38 С в те. -очение 24 ч. Продолжительность культивирования бифидобактерий при приготовлении лабораторной закваски 48 ч при 37 С. Для приготовления производственной закваски по известному способу расходуют 5% лабораторной закваски, которую вносят в молочную питательную среду, содержащую уксуснокислый натрий, сернокислый магний, аспарагин, цистин, аскорбиновую кислоту и пече.: ночный бульон, и ведут процесс культивирования 133 . Недостатком укаэанного способа является его длительность, сложность, а также то, что для получения лабораторной эакваскй бифидобактерий требуется сложная синтетическая питательная среда, а для получения производственной закваски питательная среда с набором ростовых я питательных веществ, а также длительность процесса ее получения 172 ч) .86 3639 3Цель изобретения - получение штам- ма бифидобактерий, пригодного для приготовления кисломолочных продуктов, а также упрощение и ускорение процесса получения закваски и удешевление ее.Для осуществления способа прлучения закваски предложен штамм бифидобактерий, которые связаны между со- . бой единым изобретательским замысломеДля достижения указанной цели получен штамм В 1 Г 1 ЬоЬассег 1 цв аЬфезсвпС 1 з МС, а согласно способу получения закваски бифидобактерий для кисломолочных продуктов, предусматривающему приготовление лаборатозной закваски путем культивирования .в питательной среде исходной культу,ры бифидобактерий .с последующим приготовлением производственной закваски заквашиванием молочной питательной среды, содержащей сериокислый магний, уксуснокислый натрий и аскорбиновую кислоту, полученной лабораторной закваской при температуре инкубирования 37-38 фС, лабораторную закваску готовят на молочной питательной среде, используемой для приготовления производственной закваски, .при этом в питательные среды для эаквасок.дополнительно вводят кукурузный экстракт в количестве 0,5- 0,7 от их объема, а в качестве исходной культуры используют штамм бифидобактерий В 15 ЬоЬассег 1 ца аЬо 1 езсепс 1 з МС, высушенный сублимацией. При этом количество лабораторной закваски, используемой для приготовления производственной закваски, преимущественно составляет 3-5, а продолжительность сквашивания 12-14 ч.Для получения штамма В 1 Г 1 ЬоЬассег 1 цв ЬГ 1 Ьцщ пригодного,для приготовления кйсломолочных продуктов получают свыше 100 штаммов бифидобактерий, выделенных иэ Гаесез грудных детей, находящихся на груд-ном и смешанном вскармливании.Штамм проверяют по скорости кислотообразования в стерильном молоке. Из выделенных 100 штаммов поэнергии кислотообраэования отобра"ны 20 штаммов, сквашивающих молокоза 2-3 аут. Из них штамк МСнаиболее активный. Он сквашивает молоко. за 36-48 ч. Этот штамм устойчивк перввивкам на среде Блаурока истерильном молоке. Полученный штамм бифидобактерий МСобладает следующими морфолого-, Фиэиологическими и биохимическими признаками,. Это анаэробная, неспорообразуащая палочка, грамположительная, хорошо окрашиваемая метиленовой синью, зернистая, форма клеток изменчивая и за. висит от условий питательной среды. При выращивании на среде Блаурокадает ветвление на концах, образуях и Ч -образные формы, хаотичнорасположенные. При анаэробном выращивании на твердой питательной среде поверхностные колонии 5-формы, светлые, 5 круглые, диаметр колоний 1,5-2 мм,при выращивании на полужидкой средеБлаурока в пробирках высоким столбиком колонии имеют вид гвоздиков с поверхностной стерильной зоной. При 10 культивировании в молоке бактериипринимают вид зернистой палочки раз-.ной величины, ветвление исчезает,иногда клетки напоминают кокковые формыеШтамм не образует каталазу, Н,СО 1, не восстанавливает. нитраты инитриты, не обладает уреазной актиВностью, не разжижает желатин.Сбраживает глюкозу, лактозу, ара бинозу, ксилозу, слабо инулин, несбраживает маннит.При сбраживании углеводов образует уксусную и с(+) молочную кислоту. Минимальная температура развития20 оС, .оптимальная - 37-38, максимальная - 45 С.По определителю Бердже "Иапца 1 ОеГе.гв 1 паС 1 че" этот штамм определенкак вариант В 11 ЬоЬассег 1 цв аЬо 1 взсеп"с 1 з36 При внесении в молоко (чистое бездобавок) 5 закваски, приготовленнойна этом штамме, начальная концентрация клеток составляет 5 10в 1 мп.Спустя 24 ч их концентрация увеличива ется на порядок и достигает нескольких сотен миллионов. Предельная кислотность через 7 сут равна 90 Т. Прииспользовании питательной среды, т.е.молока с добавками кукурузного экстракта (0,5) и раствора солей, процесс сквашивания ускоряется и происходит за 12.-14 ч. Максимальное количество клеток образуется через 1618 ч культивирования при 37-38 С исоставляет десяток миллиардов в фф 1 мл среды.Предельная кислотность равна240 оТ и достигает этого значенияэа 7 дней культивирования.ФО преимуществах штамма МСможно судить по следующим данным, полученным в результате культивированияпредлагаемого штамма В 1 Г 1 ЬоЬассег 1 цааЬоезсепс 1 з МСи известного штамма Б 111 ЬоЬасс Ь 1 Г 1 Ьаа 9 1, применяемого при производстве бакпрепаратов,на обезжиренном молоке (см. табл. 1,и молоке с 0,5 кукурузного экстракта и раствором солей (см. табл. 2).Известный штамм В 11 ЬоЬасс. Ь 1 Е 1 -4 Ьцв Р 1 не сквашивает молоко в течение 48 ч при .37-38 С даже при внесении в него 0,5 кукурузного экстрактаи раствора солей, в то время как.штамм МСпри этих условиях сква- Ю шивает его через 12-14 ч , а начистом обезжиренном молоке (без добавок) через 36-48 ч.Антибиотическая активность вццеленного штамма МСпо отношениюк патогенным культурам Е.со В и 5 сар 1, ацгець 209-р представлена в табл. 3, где знак ф-" означает отсутствие роста "+" - слабыйрост, ф+" - наличие роста патогенной культуры.Рост Е.со и БйарЬ ацгеце, в количестве одной петли 500 млн. взвеси, 16подавляется в фильтратах культуральной жидкости, полученной из 16-часовой закваски штамма В.абоеьселсьМС, нейтрализованной мелом, бвзразведения и в разведении 1:4 и 1:2 15соотввтстввнно,Предлагаемый способ получения заквасок, содержащих жизнеспособныебифидобактерии, для приготовлениякисломолочных продуктов заключается 20в следующем.В начале готовят питательнуюсреду. Для этого обезжиренное молоко разливают в бутылочки по 100 мл,стерилизуют при 121 С в течение 3 мин 5охлаждают до 38-40 С, а затем вносятростовые и питатвльныв вещества вследующем количестве, мас.:Кукурузный экстракт 0,5-0,7Уксуснокислый натрий 0,1-0,5Сврнокислый магний 0,01-0,05Аскорбиновая кислота 0,01-0,03 Эти вещества предварительно растворяют в дистиллированной воде, устанавливают рН 6,8-7,0 и стерилизуют при 114 оС в течение 30 мин.В полученную питательную среду вносят культуру бифидобактерий (штамм МС), высушенную сублимаци ей, и выдерживают 20-24 ч в термостате до наростания кислотности 60- 70 Т. В результате получают лабораторную закваску бифидобактерий. .1Для получения производственной закваски используют питательную среду того же состава, а именно приготовленную на стерильном молоке с указанными добавками. В нее вносят 3-5 лабораторной закваски и выдерживают в термостате при 37-38 С в течение 12- .14 ч. Получают закваску, готовую для употребления, Она может быть использована для получения кисломолочных продуктов. Кислотность готовой закваски 60-70 Т, количество жизнеспособных клеток бифндобактерий 10/мл,П р и м е р 1, Для приготовления 100 мл лабораторной закваски бифидобактерий готовят питательную среду. Для.этого бутылочку со 100 мл обвэ жиренного молока стврияиэувт в авто- клаве при 121 оС втечение 3 мин.Затем берут 5 мл кукурузного экстракта, разбавляют водой в соотношении 16 и стерилизуют в колбочке при 114 С в течение 30 мин для дости" жения полной стерильности. К полученному раствору добавляют, г: уксуснокислый натрий 5, сернокислый магний 0,5, аскорбииовую кислоту 0,3, и доводят дистиллированной водой до ,объема 50 ью. устанавливают рН 6,8 добавлением 40-ного раствора МаОН.Полученный раствор ростовых и питательных веществ стерилизуют повторно при 114 оС в течение 30 мин. Затем в бутылочку со 100 м. стерильного молока, охлажденного до 38 С, вносят асептически 5 мл стерильного раствора ростовых и питательных веществ и 1 или 2 флакона сублимированного штаююа бифидобактерий МС, чтобы крличество вносимых клеток было не9менее 5 10 . Засеоянную среду термостатируют при 37 С до сквашивания 20 ч.В результате получают 100 мл лабораторной закваски кислотностью 60 Т. Данного количества закваски достаточно для получения 2 л производственной закваски. Для этого готовят питательную среду указанного состава. На приготовление питательной среды расходуют 2 л обезжиренного молока, стерильного, охлажденного до 38 С, в которое вносят 100 мл вышеприведенного раствора ростовых и питательных веществ(из расчета 50 мл раствора на 1 л молока) и 5 лабораторной закваски, т.е. 100 мл. Смесь термостатируют при 37 оС 14 ч. Таким образом получают 2 л(немногим более) производственной закваски, которая имеет кислотность 70 Т. В ней содержится 1 109 мл клеток бифидобактерий. Закваску используют нз расчета внесения 3 ее для приготовления 66 л кисломолочного продукта.П р и м е р 2. Для приготовления 100 мл лабораторной закваски бифидобактерий бутылочку со 100 мл обезжиренного молока стерилизуют в авто- клаве при 121 оС в течение 3 мин,Затем в качестве добавки к обвзжи"1 ренному молоку готовят раствор ростовых и питательных веществ, содержащий 0,7 кукурузного экстракта. По" скольку добавки к молоку для приготовления лабораторной закваски и производственной одни и тв жв, то готовят раствор ростовых и питательных веществ (из расчета 50 мл приготовлви863639 Таблица 1 Культивирование культур В,Ь 111 дце штамм 9 1 иВ.адо 1 еьсеп с 1 в МСна обезжиренном молокепри 37-38 аС .г Титруемая кислотность, Т, при культивированиина обезжиренном молоке в течение часов Культура 24 В. Ь 1 16 це штамм 9 1 38 Не сквашивает48 40 ного раствора на 1 л обезжиренного молока), следующим образом:7 мл кукурузного экстракта разбавляют водой в соотношении 1:5 и стерилизуют в колбочке при 114 С в течение 30 мин для достижения полной стерильности, к полученному раствору кукурузного экстракта добавляют, г: уксуснокислый натриЯ 5, сернокислый магний 0,5, аскорбиновую кислоту 0,3, доводят дистиллированной водой до обаема 50 мл, устанавливают рН 7,0 40-ным раствором йаОН и повторно стерилиэуют при 114 С в течение 30 мин.Далее в бутылочку со 100 мл стерилизованного молока, охлажденного до 40 С, асептически вносят 5 ьк 15 стерильного раствора ростовых и питательных веществ и 1 или 2 флакона штамма бифидобактерий МС"42, высу.шенного сублимацией, чтобы количество вносимых клеток было не ниже р 5 10 , и термостатируют при 38 С до сквашивания 24 ч.В результате получают 100 мл лабораторной закваски с кислотносотью 70 Т, данное количество которой позволяет получить 3,3 л производственной закваски.Для этого заквасочник с 3,3 л обезжиренного молока стерилизуют в автоклаве при 121 С в течение 3 мин, охлаждают до 40 С, после чего вносят в него 165 мл вышеприведенного раствора ростовых и питательных веществ (из расчета 50 мл раствора на 1 л ролока) и 3% лабораторной закйаски,т.е. 100 мл, термостатнруют при 38 Св течение 12 ч,Полученная производственная закваска имеет кислотность 70 Т колнчестФво клеток бифидобактерии 1-510/мли может быть использована при внесении 3 закваски для приготовления110 мл кисломолочного продукта.Таким образом, процесс приготовления закваски по предлагаемому способу по сравнению с известным ускоряется в 1,5-2 раза, а использованиев качестве ростового и питательноговещества кукурузного экстракта снижает затраты на ее производство, путемудешевления питательной среды, используемой для получения лабораторной ипроизводственной заквасок, так какстоимость 1 кг кукурузного экстракта 8 к, а также упрощает приготовлениезакваски, исключая процесс подращивания лабораторной культуры на сложнойпитательной среде, в состав которойвходят такие дорогостоящие компоненты, как аспарагин, цистин, печеночный бульон,Закваска, полученная предлагаемым способом найдет широкое применение при производстве детских и лечебных кисломолочных продуктов, предназначенных для питания детей раннего возраста, а также для детей, страдающих различными желудочно-кишечными заболеваниями.Ориентировочный экономический эффект - 30 р на 1 т продукции.8636 39 10 Таблица 2 Культивирование культур В. Ь 111 дцв штамм М 1 и В. адо 1 езсеп 0 зМСна обезжиренном молоке с 0,5 кукурузного экстрактаи раствора солей при 37-38 С. Титруемая кислотность,оТ при культивировании на обезжиренном молоке с добавками (ростовые н питательные вещества) в течение часов Культура 12 В,Ь 1 Е 1 доа штамм У 1 40 Не сквашивает 28 В. абое ьсеп 1 1 ьМС150 190 70 Образование сгустка.ас 1 дорЬ 11 исследовался ас 1 ЬорЬ 11 е7 В. е исследовался ормула изобретени в э ас 1, В 1 тамм бифндобактерий. В 111 доЬас Сег 1 ое адо 1 евсеп 1 ь МС(коллекция музея промьваленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В"1987), используемый для приготовления кисломолочных нро.". 50 дуктов.2. Способ получения закваски бифидобактерий для кисломолочных продуктов, предусматривающий приготовление лабоРаторной закваски путем культиви рования в питательной среде исходной . культуры бифидобактерий с последующим приготовлением производственной закваски заквашиванием молочной питательной среды, содержащей сернокислый: магний, уксуснокислый натрий и аскор- .0 биновую кислоту, полученной лабораторной закваской при температуре инкубирования 37-38 ОС, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса получения 65 закваски н удешевления ее, приготовление лабораторной закваски осущест ляют на молочной питательной среде, используемой для приготовления прой водственной закваски, при этом в питательные среды для эаквасок дополни тельно вводят кукурузный экстракт в количестве 0,5-0,7 от их объема, а в качестве исходной культуры используют штамм бифидобактерий В 111 до Ьасйег 1 ив адо 1 евсепй 1 ь МС, высушенный сублимацией.3Способ по п.2, о т л и ч а ющ и Я с я тем, что, количество лабо раторной закваски, используемой для приготовления производственной эакв ки, составляет 3-5, а продолжительность сквашивания ее при этом 12- 14 ч. Источники информациипринятые во внимание при экспертизе1. Гончарова Г.И. и др, Бифидобактерии и перспектива их примене863639 12 Составитель Л.ШпитонковаТекрЕдл. Пекарь Корректор С. Номак Редактор И.Петровам Ф Ш ФЮ 4 ФШШШ Эаказ 7702/40 Тираж 531 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5Ф -жм Филиал ППП фПатентф, г. ужгород, ул. Проектная, 4 ния при нарушении бифидофлоры у детей младшего возраста. - "Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии", 1971, 9 7, с.91-95.2. Королева Й.С. Техническая микробиология цельномолочных продуктов,М., "Пищевая промышленность", 1975,с. 70-81,3, Патент ФРГ М 1692313,кл. А 23 С 9/12, опублик. 1977.