Актиноцил-бис-( -диметиламинопропил)-амин, обладающий противоопухолевой активностью

е сггг СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕН А ВТОРСЯОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 2.обладающий против активностью обладает сарколизин. Но наряду с противоопухолевой активностью по отношению к некоторым перевиваемым опухолям сарколизин обладает высокой токсичностью.Целью изобретения является расширение ассортимента биологически активных соединений,В соответствии с изобретением описывается актиноцил-бис-(-диметиламл" нопропил)-амин формулы к новомуного анти с с-а соее обна- ичесэт ни акт лиений е ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТпО изОБРетениям и ОтнРытиямПРИ ГКНТ СССР 1(губ) 23.0,92. Бюл, Н 15 (71) Ленинградский технологический институт им, Ленсовета и Онкологический научный центр АМН СССР (72) О,Ф, Гинзбург, Е.Н, Глибин, З,И.Коршунова,.М.А, Кривцова, З,П. Софьина, С.С. Цымбаловаи Н.П. Яворская (ВС),Изо соедин биотик К н большо кислот динени ружено ки цен Изв рующихретение относитсянию-аналогу природактиномицина О,стоящему времени очисло актиноцил-би их эфиров. Средик настоящему времпока соединений сными свойствами.стно, что из групппротивоопухолевых1 (Н который получают окислением феррицианидом калия в Фосфатно-щелоцном буфере (рН 7,2) или РЬО в спиртовом растворе 2-анино-окси-метилбензоил-( -диметиламинопропил)-амина, Пос" ледний получают каталитицеским гид" рированием 2-нитро-бензилокси- метилбензоил(-диметиламинопропил)- амина либо 2-нитро-окси-метилбензоил-(-диметиламинопропил)-амина.П р и и е р, Хлоргидрат 2-нитро-; 3-бензилокси-метилбензоил(-диметиламинопропил)амина,К раствору 5,6 г хлорангидрида 2-нитро-бензилокси-метилбензой ной кислоты в 100 мл бензола при температуре 25-30 С и перемешиванииодобавляют по каплям раствор 1,77 г"диметиламинопропиламина в 20 мл .бензола. Выдерживают реакционную мас-. :су при перемешивании и комнатной температуре 1 ц, а затеи 7 ц при 50 о 60 С, При этом образуется обильный .осадок. По оконцании выдержки реакционную массу упаривают досуха, Су" хой остаток обрабатывают 50 мл бензола, йагретого до 70 оС, охлаждают, осадок отфильтровь вают, промывают небольшим количеством бензола, сушат. Выход 4,2 г (56,3) . Т.пл . 166-168 С(изопропиловый спирт-бензол, 1:10) .Хроматографически однороден на плас.тинах силуфол Б 7-254 в системе 1-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:1) . Найдено,: С 58,2; Н 6,5; С 1 8,8, Выцислено,З: С 58,6; Н 6,4; С 1 8,7 2-Нитро-бензилокси-метилбен- зоил- Я-диметиламинопропил)-амин,3,5 г хлоргидрата 2-нитро-бензилокси-метилЬензоил- Я-диметиламинопропил)-амина растворяют в20 мл воды, добавляют насыщенный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом (3 раза по 20 мл). Этилацетатные вытяжки обьединяют, промывают водой, сушат сульфатом магния и упаривают в вакууме, Получают2,8 г маслообразного продукта, хроматографицески однородного на пластинах силуфол Р)-254 в системах: 1-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:1),хлороформ-метанол-этилацетат (6:1:3),Анализируют в виде рейнеката, который получают смешением раствора 2 нитро-бензилокси-метилбензоилЯ-диметиламинопропил)-амина в 0,1 н.2 О соляной кислоте и 3 В-ного водногораствора рейнеката аммония, Выделившийся рейнекат 2-нитро.-3 -бензилокси 4-метилбензоил-(-диметиламинопро. пил)-амина отфильтровывают, промывают водой и сушат. в эксикаторе надСас 1.Найдено,3; С 41,6; Н 4,6; Сг 9,0,И 17,9.С Н,р О С П 7 сгИ 60530 Вычислено,г: С 41,6 И"4,7Сг 9,3; 1 Ч 18,3.2-Нитро-окси-метилбензоилЯ-диметиламинопропил)-амин,0,5 г 2-нитро-окси-метилбензойной кислоты растворяют в 10 мл35 абсолютного эфира, добавляют 20 млбезводного бензола и к полуценномураствору при комнатной температуреи перемешивании добавляют раствор400,52 г дициклогексилкарбодиимида вО 5 мл бензола. Реакционную массу выдерживают 0,5 ц отфильтровывают дициклогексилмочевину и к Фильтратудобавляют по каплям приперемешивании раствор 0,18 г (7 -диметиламино 4 пропиламина в 5 мл оензола. Выдер-.живают при перемешивании 0,5 ц, отФильтровывают осадок, промывают егонебольшим количеством бензола и эфира, сушат, обрабатывают 30.мл воды,5 О водный раствор профильтровывают,упаривают до обьема 1-2 мл и наносят на колонку, содержащую 4 г целлюлозы ДЭАЗ, Хроматографируют вводе, собирая Фракцию, отвечающую по55 ТСХ на пластинах Силуфол П 1-254 всистеме метанол-этилацетат-триэтиламин (5:5:1) 2-нитро-окси-метилбензоил-(Г-лиметиламинопоопил)-аминч5 бЭлюат упаривают досуха, Кристаллизуют из смеси спирт-бензол и из бензола. Получают 0,15 г 2-нитро-окси-метилбензоил-(-диметиламинопропил)-амина, т.пл. 182,5-184 С.Найдено,: С 55,5; Н 6,9.с н,иоВычислено,В: С 55,5; 6,8.Яктиноцил-бис- -диметиламинопропил)-амин,а) 2,8 г 2-нитро-бензилоксиметилбензоил- Я-дйметиламинопропил)амина гидрируют в 100 мл метанола приатмосферном давлении в присутствиипалладиевой черни до 2-амино-окси"4-метилбензоил-.ф-диметиламинопропил)-амина, Контроль методом ТСХна пластинах силуфол Щ 1-254 в систе мах: 1-бутанол-уксусная кислота-вода(4:1:1) и хлороформ-метанол-этилацетат (6:1:3). По окончанйи гидрирования реакционную массу проФильтровывают от катализатора и при перемешивании добавляют к суспензии 3,5 гдвуокиси свинца в 30 мл метанола,Перемешивают при комнатной температу-.Ре 7 ч,оставляют на 12 ч, упаривают .досуха, экстрагируют хлороформом,хлороформный экстракт упаривают в вакууме досуха, остаток кристаллизуютиз бензола, Выход 1,4 г хроматогра-фически однородного силуФол 1 Л)-254,система - хлороформ-метанол-этилаце.тат (6:1:3)1 актиноцил-бис-(-диметиламинопропил)-амина . Т,пл. 136-.137 ОС.б) .Профильтрованный от катализатора раствор, полученный при гидри. Ровании 0,55 г 2-нитро-бензилокси 4-метилбензоил- ф-диметиламинопропил),амина, смешивают со 100 мл Фосфатно. щелочного буфера (РН 7,2) добавляютк раствору 1,51 г феррицианида калия в 15 мл того же буфера, Перемешивают 3 ч при комнатной температуре,в реакционную массу вносят насыщен ный раствор бикарбоната натрияи экстрагируют хлороформом. Хлороформный экстракт промывают водой, сушат сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток кристаллизуют из бензола. Получают 0,3 г вещества с т,пл.135-137 С. Не дает депрессии температуры плавления в пробе смешения собразцом, полученным по методу а).Хроматографическая подвижность образцов, полученных по методам а) и б))одинакова. 77293в) Яктиноцил-бис- ф-диметиламинопропил)-амин получают аналогично методу б), исходя из 2-нитро-оксиметилбензоил-(-диметиламинопропил)- амина, гидрирование которого до 2 амино-окси-метилбензоил- ф-диметиламинопропил)-амина ведут приатмосферном давлении в этаноле вприсутствии никеля Ренея. Продукт,полученный по методу в), идентиченсоединению, полученному по методама) и б).Найдено,Ф: С 62,8; Н 4,3; И 16,9Вычислено,о;. С 62,9; Н 4,3;И 16,9.Уф-спектр (натрийфосфатный буфер,РН 6макс нм (Е) 240(2,810 ), 2 Р 445 (2.,4.10 ф) .Спектрофотометрическое титрование .актиноцил-бис- ф-диметиламинопропил)-амина дезоксирибонуклеиновойкислотой (ДНК) в натрийфосфатном. бу Фере (ц 0,1) показало, что полученноесоединение комплексообразует с ДНК.тивности проводилось Ы чьего в системе первичных односуточных стацио-:нарных суспензионных культур опухоле"вых клеток мышей (табл. 1.) и в.системе первичных культур опухолевых кле ток человека (табл,2), а также пчьего в опытах на мышах (табл.3).3 : Из приведенных в табл.1 и 2 данных следует, что актйноцил-бис-Я"диметиламинопропил) -амин йроявляетпротивоопухолевую активность в системах первичных суспензионных куль" 4 О тур опухолевых клеток мышей и пер"вичных опухолевых клеток человекаж чего. Данные, приведенные втабл.3 свидетельствуют о том, чтоактиноцил-бис- -диметиламинопропил)"амин проявляет противоопухолевую ак-тивность, равную активности актино-.мицина 0, при изучении 1 п.ч 1 йго на.солидной опухоли (аденокарциономеАК 755), Он вызывает торможение рос та этой опухоли на 70/, тогда как ак"тиномицин Э тормозит рост этой опухоли на о 33, При этом,в отличие отактиномицина П,актиноцил-бис- -диметиламинопропил)-амин не эффективен 55 при лейкозах, а при солидной опухолидает эффект пролонгирования.Максимально переносимая доза актиноцил-бис- диметиламинопропил)",677293амина в 2500 раз больше дозы актиномицина О, что свидетельствует о его меньшей токсичности,1 Доза, мкг/мл, подавляющая синтез суммы нуклеиновых кислот на 503 ПрепаратСЕ 5178 Эрлих И 1/1 у юе а ее еем в юее аеюю ю е юаеа аю Актиноцил-Ьис- (-диметиламинопропил)-амин 0,001 0,0001 0,001"0,001 0,01 Актиномицин 0 0,001 0,0001ме ааи Таблица 2 Сравнительные данные о цитостатицеской активности на первичных опухолях целовекаТорможение синтеза суммы нуклеиновых кислот, ФКонцентрация,мкг/мл Препарат псевдо- злокач. миксома мезен- хинома мела- ракнома яицника им аи ю ююююеаи Актиноцил-бисЯ-диметиламинопропил)-амин 44,5- 47,5 80,0 79,0 50 т 79 30-40 44,551,0 Актиномицйн Й юа ю а ее блица 3 Т аСравнительные данные о противоопухолевой активности Разовая Продол- жительОпухоль или лейкозГибель от ток ность сичнос жзн числовведений на 1 день е и на 3 на 7 день день животных, о 75,5 а еее71,Р 19,5 24,0 Актиноцилюбис(идиметиламинопропил)-амин АК 755 нет нет 1, 1210 75,5 б/э б/э 100,5 125,5 нет б/э нет Препарат м юееии,0,1 .71,5 55,0 61,571.,00,01 54,5 - 52еее Торможение роста опухоли по окончании лечения, о10Продолжение табл.3 Торможение роста опухоли по окончании лечения, о Разовая Препарат доза хность,жизни ти на 1 на 3 на 7 день день день тете ат юют1 О б/ не 8 75,5. не Актиномицин П ЯК 755 3,0 17,0 1,03 не 26 не т и т тю теехред М Г 1 оргентал актор Т. Шаргановае те тютю щт те еще щ рректор И, Эрдейитютю ю е е е е т тт т те т е щ т т тщете 2310 Тираж Государственного комитета по изобретениям и 113035, Иосква, Ж, Раушская наб Подписноекрытиям при Гд. 4/5 За каВНИИПИ Опухоль или лейкоз(через 9 б ч) (через 96 ч) Продол- жительживотных, Ф Гибель от ток сичнос