Способ получения производных пироглутамил-гистидил-3 алкилпролинамида

Союз Советскик Социалистических Рвспубпик(23) Приоритет (3) 10144/75 (43) Опубликовано суаарственныи комитет вета Министров СССР о лелам изобретенийи открытий(5 4 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕН 1 -ПИРОГЛУТАМИЛЗВОДНЫ ТИДИЛключаю щей фо ПРО -ГИ КИЛПРОЛИНАМИД 1Изобретение относится к способу получения новых производных (, -пироглутамил--гистидил-алкилпролинамида, которые могут найти применение в медицине.Известны способы Получения Пептиутем конденсации аминокислот и дных фрагментов карбодиимидным зидным способом 11 .ью изобретения являетбиологически активныхстидина.стаполб ся в томлыо соединен О-соН 2 дов ппептиили аЦелновыхныхПо Г ся синтезпроизвод 3водород,нил 1имеет ука икарбози гд вленная цель достигается сполучения производных д. -пироь в .гистидил-алкилпролин 15 щей формулы 1СО-МН- СН- СО% В2 собомглут амиамида выше значения; гидроксил илиуют с соединени огруппа,.общей форконден мулы Э СОМВаВ 4 ОКВЯ ыще, нардом с по"бензил- полученаэаноым метсли В как уазидучаеидрир где й 25 бодиимидны сл едующи м,оксикарбони ного продук Предпочт в случае ко), ци ел ьны м способа ил, явля" ариан гидро ю - фЗВ - водород,Я - алкил (Сгй - водород,водород4клоалкил11 - водород,Иностранцынольд Морган и Дерек Джон Ш (Великобритания) Иностранная фирмаекитт знд Колман Продактс Лимитед (Великобритания)ется проведение конденсации соединений формулы 1( и формулы 9 карбодиимидным методом в присутствии оксибензотриазола.П р и м е р 1. ( -Пироглутамил 1 -гистидил-транс-метил- Ь -пролинамид. 5М "трет-Бутоксикарбонил-транс-метил- ) -пролин,Смесь триэтиламина (3,5 мл) и трет-бутил,4,5-трихлорфенилкарбоната"3-метил- Ь, -пролина (1,25 г) в трет-бутаноле(12 мл) и воде (8 мл) .Смесь нагревают 2 ч при 60 С, упаривают, остаток растноряют в 1 н. растворе бикарбоната натрия (50 мл), )5раствор промывают эфиром. Добавивизбыток твердой лимонной кислоты,продукт экстрагируют этилацетатом,объединенные экстракты сушат надсульфатом натрия и упаринают. Получают 1,6 г сырого кристаллическогопродукта, после перекристаллизациикоторого из смеси этилацетата и петролейного эфира (40-60 С) получают1,33 г целевого продукта, т,пл. 146150 С; А 1 о". -60,1 (с = 1,0; хлороФорм) .М -трет -Бутоксикарбонил-транс-метил, -пролинамидМ -Метилморфолин (6,0 мл) добавляют к раствору Й -трет-бутоксикарбонил-транс-метил- Ь -пролина (1 1 г)ов .тетрагидрофуране (50 мл) при -20 С,Затем по каплям вводят свежеперегнанный изобутилоный эфир хлормураньинойкислоты (0,8 г), Смесь перемешивают10 мин при -20 С. После добанлени.яконцентрированного раствора аммиака(5 мл) реакционную смесь перемешивают2 ч, упаривают, остаток растворяют иэтилацетате (100 мл). Раствор пронвают 10-ным водным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сУшат надсульфатом натрия. Растноритель отгоняют, остаток перекристаллизовывают из смеси этилацетата и петролейного эфира (40-60 С), получают целевой продукт (0,91 г), тпл. 100101 С; с(1 = -797 (с" 10; хлороФорм) .Гидрохлорид транс-кетил- ), -пролинамидаРаствбр хлористого водорода н диоксане (7,5 н.5 мл) добавляют к раствору В "третбутоксикарбонил-транс-метил- Ь -пролинамида (О 65 г) вУ 55диоксане (10 мл) . Кристаллическийпродукт через 2 ч отфильтронынают иперекристаллизовынают из смеси этанола и эфира. Выход 0,47 г; т,пл.235-237 С; АЗ д ф -14,8 (с з 1,0; вода),Ь -Пироглутамил- Ь "гистидил"транс-метил- ) -пролинамидидрохлорид транс-метил- ( -пролинамида (0,50 г) в диметилформамиде. азида ) -пироглутаьил-"гистидина, 65 приготовленного из гидразина и дипептида (0,9 г) н ДМФА (15 мл) при -20 Студа же вводят триэтиламин (0,45 мл),/Смесь выдерживают при комнатной температуре 12 ч, фильтруют, упаривают,остаток растворяют в 1-ном водномрастворе пиридина и пропускают черезколонку, заполненную СефадексомфЯ(50 г смолы во влажном состоянии; диаметр 2 см) и.уравновешенную1-ным водным раствором пиридина.Элюирование проводят градиентнымметодом 5-ным водным раствором пиридина через сферический смесительемкостью 1 л, наполненный 1-ным водным раствором пиридина. Фракции, содержащие лродукт (контроль по величине си данным ТСХ), объединяют,упаривают, остаток обрабатывают эфиром. Получают 0,7 г продукта (моногидрата) в виде аморфного твердоговещества, с(,3в -46,7 (с = 1,0; вода);Й(3 В) 048; т. пл 145-148 С,Найдено,: С 52,5 р Н 7,0) Н 21,3,Вычислено,%; С 51,8;Н 6,7, И 21,3.П р и м е р 2. (, -Пироглутамил-гистидил-транс-этил- д -пролинамид,Диэтиловый эфир бензилоксикарбониламиномалононой кислоты (11,5 г,38 мл) растворяют в безводном этаноле (50 мл), к раствору добавляютнатрий (150 мг) в безводном этаноле(10 мл) . При перемешивании в смесьпо каплям вводят пент-енал (3,2 г,38 мл) и перемешивают 1 ч. Добавляютраствор уксусной кислоты (0,29 мл) иэтаноле (1 мл) . Реакционную массу подвергают гидрогенолизу в течение 2 чпри атмосферном давлении, применяяпалладий на угле (5) в качестве катализатора. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, Остатокрастворяют в хлороформе, раствор промывают рассолом, содержащим небольшое количество бикарбоната натрия,сушат над сульфатом натрия, упариваютОстаток перегоняют при 15 мм рт,ст. иполучают 4-этил,5-дикарбоэтокси"пирролин (5,65 г) в виде бесцветногомасла, т,кип. 115-120 С/15 мм рт.ст.,в ИК-спектре полосы 1715, 1610 см .К смеси 1 М гидроокиси натрия(80 мл) и этанола (80 мл). добавляютпирролин (4,68 г., 19,5 мл), перемешивают 4 ч при 50 С, охлаждают, добавляют боргидрид натрия (1,0 г) иперемешивают 10 ч при 25 С, Реакционную смесь аккуратно подкисляют разбанленной соляной кислотой до рН 4,концентрируют и концентрат помещаютв колонку, заполненную смолой дауэкс50 Ю х 8 (Н Форма, 10 мл) . Продукт%(ЗВ) 0,43. При анализе аминокислот на анализаторе Джеола бАН (ко-пролина (3,5 г), как в примере 1. ОПосле хроматографии на колонке ссиликагелем получают трет-бутилоксикарбонил-транс-этил- с)Ю -пролинамид(0,45 г) в виде твердого веществабелого цвета, т .пл . 89,5-91 С; % (ЗА)0)22; В (ЗВ) 0,72,транс-Этил- И -пролинамид (288 мг,2 мл), бутилкарбонил- ) -пироглутамил-гистидин (822 г, 2 мл) и оксибензотриазол (550 мг, 4 мл) растворяют в ДМФА (б мл). Раствор охлаждаютдо ОС, добавляют к нему дициклогексилкарбодиимид (480 мг, 2,2 мл) и перемешивают 18 ч, Осадок отфильтровывают, Фильтрат упаривают, Полученное 40масло растворяют в смеси тетрагидрофурана и воды (1:1,80 мл), к растворудобавляют палладий на угле (10, 60 мг)и смесь гидрируют 4 ч при атмосферномдавлении. Катализатор отфильтровывают,фильтрат упаривают досуха. Полученнуюсмолу распределяют между этилацета"том (50 мл) и водой (80 мл) . Воднуюфазу отделяют, упаривают досуха, .остаток растворяют в водном растворе,содержащем 1 уксусной кислоты и0,05 пиридина, Раствор пропускают 50через колонку с Сефадексом Ц 25 (впиридиновой форме), которую уравновешивают водным раствором, содержащим 1 уксусной кислоты и 0,05 пиридина. Продукт элюируют градиентнымметодом, применяя водный раствор, со.держащий 1 уксусной кислоты и 1 пиридина, с помощью сферического смесителя емкостью 500 мл, наполненноговодным раствором, содержащим 1 уксусной кислоты и 0,05 пиридина, Фракции, содержащие продукт (контроль поданным ТСХ), объединяют, упаривают досуха, получают Ь -пироглутамил- ((205 мг) в виде твердого аморфноговещества белого: вета т,пл. 156160 С; Я (ЗА) 0,27; Я (ЗВ) 0,50,Аминокислотный анализ после кислстного гидролиза продукта показываетследующее: гистидин 0,95, глутаминовая кислота 0,99 и 3-этилпролин 1,06П р и и е р 3. ). -Пироглутамил(. - гистидил,3-диметил- д -пролинамид.Раствор дизтилового эфира бензилчоксикарбониламиномалоновой кислоты(3 мл), В полученную смесь вводят3-метилбут-енал (840 мг, 10 мл) вэтаноле (б мл) и перемешивают 24 чпри 25 С. Затем добавляют уксуснуюкислоту (О 28 мл) и гидрируют 24 ч,используя в качестве катализатора палладий на угле (10 500 мг) . Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, остаток хроматографируют наколонке с силикагелем, применяя в качестве элюента смесь эФира и петро"олейного эфира (40-60 С) (1: 1), получают 2, 2-дикарбоэтокси-З, 3-диметилпирролидин (0,9 г),Полученный продукт (850 мг) нагревают 4 ч с 5 И соляной кислотой (10 мпвыпаривают, получают порошкообразноевещество белого цвета, кристаллизациякоторого из смеси метанола и эфирадает гидрохлорид З,З-диметил- д -пролина (451 мг) в виде кристаллов белого цвета, т.пл, 110-112 С.трет-Бутилоксикарбонил-З,З-диметил- д -продин готовят из гидрохлорида З,З-диметил- сИ -пролина (1,07 г),как в примере 1, Получают 1,45 г крис"таллов белого цвета, т.пл, 107-109,5 С.трет-Бутилоксикарбонил-З,З-диме"тил- И -пролинамид получают из трет-бутилоксикарбонил-З,З-диметил-И --пролина (90 п мг) аналогично примеру 1 в виде кэисталлов белого цвета,т.пл. 115-117 С; выход 375 мг.Гидрохлорид З,З-диметил- сИ -пролинамида получают из трет-бутилоксикарбонил,3-диметил-И -пролинамида(300 мг), как в примере 1, в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 220-223 С 1выход 175 мг.3, 3-Диметил- М -пролинамид готовят из гидрохлорида (170 мг) подобнопримеру 1. Выход твердого продукта135 мг; Я (ЗА) 0,19; 7 (ЗВ) 0,70.Ь -Пироглутамил- Ь -гистидил,3-диметил-сЫ -пролинамид получаютиз 3,3-диметил-д -пролинамида (100 мг),как в примере 2. Получают 195 г белого порошка т.пл, 180 С (размягчается при 135 С); Й (ЗВ) 0,65. Аминокислотный анализ после кислотного гидролиза показывает следующее: гистидин 1, 02, глутаминовая кислота О, 89,(5 мл) с рН 8,5 смешивают с М -оксисукцимидоэфиром бензилоксикарбонилд. -пироглутаминовой кислоты (933 мг)в диксане (5 мл) и перемешивают 15 чпри 22 С, Раствор упаринают, остаток 10хроматографируют на колонке с силикагелем (15 х 330 мм), применяя дляэлюирования смесь изопропанол, -этилацетат-уксусная кислота-вода (3:1:1:1по объему), После упаривания соотнетствующей фракции получают бензилоксикарбонил- Ь -пироглутамил- Н -мегтил. -гистидин (615 мг) в виде твердого вещества белого цвета, т,пл.192 - 195" С; Я (ЗА) 0,21; ЯУ (ЗВ) 0691 З)Ес(.3:-13 (с = 1,0; ДМФА),-метил- Ь -гистидина (207 мг) и транс-метил- ) -пралинамида (77 мг) .Получают гигроскопическое твердое вещество (90 мг) т.пл, 135-140 С; Я-транс-метил- Ь -пролина (1,15. г)и циклогексиламина (2,85 мл), как впримере 1, в виде твердого веществабелого цвета. Выход 1,3 г, т.пл, 130134 С 1 11 (1 Р) 0,53. 45транс-Метил- ). -пролинциклогексиламид готовят из трет-бутилоксикарбонил-транс-метил- Ь -пролинциклогексиламида (900 мг) аналогичнопримеру 1. Получают твердое веществобелого цвета (410 мг), т.пл. 111-113 С,Я (2 А) О, зз,-Пироглутамил- Ь -гистидил-транс" 3-метил -пролинциклогексиламид получают по методике примера 2из бензилоксикарбонил- Ь -пироглута 86мил- ) -гистидина (565 мг) и транс-метил- Ь -пролинциклогексиламида(300 мг) в виде твердого веществабелого цвета (272 мг), т.пл, 145150 С Я (ЗА) 0,43; 1 (ЗВ) 0,78, 60с 3 = -14,9 (с ф 1,0; ДМФА); й (4 А)0,50.П р и м е р б, 1 -Пироглутамил) -гистидил-транс-метил- ) -про(лингексиламид. 65Формула изобретения 1. Способ получения производных " -пироглутамил- ( -гистидил-алкил-пролинамида общей формулы к 2 СОМК кф СО - ЪН-СН- СО-ЪФ ЯО СН 2Ну УВ где В - нодород, метил;В" - алкил (С );г -Э ф8 - водород, метил;В - водород, алкил (С, ), циклоалкил (С 6 );В - водород, метил, о т л и ч а ю щ й й с я тем, что соединение общей формулы где В - водород, бензилоксикарбонил; указ ан ный продукт готов ят подобно примеру 5, Получают порошкообразный продукт белого цвета, Я(ЗВ) 0,82.П р и м е р 7. Ь -Пироглутамил-гистидил- М -этил- " -пролинамид получают, как н примере 5. 9(ЗА) 0,26; )1 (ЗВ) 0,49.П р и м е р 8, Ь -Пироглутамил-гистидил-изопропил -пролинамид получают аналогично примеру 2. 3 (ЗА) 0,19; 11 (ЗВ) 0,75,П р и м е р 9. 1 -Пироглутамил"-гистидил-метил- й, М -диметил 14 -пролинамид получают, как в примере 5, к(ЗА) 0,27; Яу (ЗВ) 0,75.В приведенных примерах для ТСХ используют пластины, покрытые Кизельгелем 6 гЭ 4 , и системы растворителей:1 Е метанол-хлороформ (1:4)1 Р метанол-хлороформ (1:9)2 А хлороформ-метанол-уксусная кислота (18:2:1)ЗА хлороформ-метанол-уксусная кислота-вода (80:18:2:3)ЗВ хлороформ-метанол-уксусная кислота-вода (ЗО:20:4:6)4 А бутанол-этилацетат-уксусная кислота-вода (1:1:1:1)бС бутанол-пиридин-уксусная кислота-вода (30:20:6:12)7 С этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода (120:20;б:11).619101 10 Составитель В.ВолковаРедактор Т.Шарганова Техред Э.Чужик Корректор Н.Яцемирская Заказ 4121/1 Тираж 559 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобрЕтений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул,Проектная,4 В - водород, метил;Ч - гидроксил или азогруппа, конденсируют с соединением формулыИЯ р 1СО.пКкф2 Эгде В, В, Н и В -как указано выае,карбодиимидным или азидным методом, с последующим, в случае если В - бенэилоксикарбонил, гидрированием полученного продукта,2, Способ по п.1, о т л и ч а ющ и И с я тем, что, когда У -гидроксил, конденсацию проводят карбодиимидным методом н присутствии ок 5 сибензотриазола.Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе;1.Шредер К., Любке 5.,Пептиды,ч.1, М.,Мир, 1967 с.116.