Способ получения биостимулятора

(51) 5 А 23 К 1 16 омитет Россий о патентам и т й Федерации рным знакам ИЗОБРЕТЕНИЯ 1 Ъ ДЕНТ ной жидкости ацетоном, осадка с ультрафильтрац левого продукта, в качес при гомогенизации испо теор уксусной кислоты в и гомогенизацию проводят творение ацетонового о 0,9%-ном водном раств ультрафильтрацию ведут минальным удержанием 1 табл. растворения ацией и стерилизатве химическогользуют 2 - 4%рисутствии хлори в течение 36 -садка проводяторе хлористого на полых воло2000 - 30000 д(76) Зеленков Валерий Николаевич(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТ(57) Область применения: кормопроизвоСущность: для увеличения выхода целевогодукта и ускорения технологического процеспособе получения биостимулятора путем гомнизации измельченной ткани тимуса в химичрастворе, отделения осадка, обработки надоса ОРА дство, просса в огееском доч -етонового цией цераствора ный расда, цинка, 72 ч расв 0,85 - натрия, а кнах с ноальтон. 2Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к кормопроизводству,Известен способ получения биостимулятора путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса в химическом растворе, отделение осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном, растворения ацетонового осадка с.упьтрафильтрацией и стерилизацией целевого продукта.Однако способ длителен и недостаточно эффективен.Целью предлагаемого изобретения яв- ляется ускорение технологического процесса, увеличение выхода целевого продукта и повышение прироста живой массы.Поставленная цель достигается в способе получения биостимулятора путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса в химическом растворе, отделения осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном, растворения ацетонового осадка с ультрафильтрацией и стерилизацией целевого продукта тем, что в качестве химического раствора п ри гомогенизации используют 2-4%-ный раствор уксусной кислоты в присутствии хлорида цинка, гомогенизацие проводят в течение 36-72 ч, растворение ацетонового осадка проводят в 0,85-0,9%-ном водном растворе хлористого натрия, ультрафильтрацию ведут на полых волокнах с номинальным удержанием 12000-30000 дальтон;Заявленный способ промышленно осу-, ществим.В научно-технической и патентной литературе не имеется технических решений, аналогичных заявляемому. Т,е. предложение соответствует критериям "новизна", "изобретательский уровень" и "промышленная применимость".Изобретение поясняется на следующих примерах. П р и м е р 1, 5000 г замороженного тимуса телят(-40 С) измельчают на мясорубке. К полученному фаршу добавляют 25 л 3- ного раствора уксусной кислоты с предварительно растворенной в ней 25 г Еп С 2 (рН 3,5-4,0), Экстракцию биоактивных веществ проводят в течение 48 ч при температуре 3-14 С при периодическом перемешивании осадка. По окончании зкстракции субстрат отфильтровь 1 вают через бязь, Фильтрат, освобожденный от жмыха, добавляют порциями в охлажденный до -5 С ацетон,Осаждение биоактивных компонентов ацетоном проводят при соотношении ацетон:фипьтрат = 5;1, после чего дают осадку отстояться в течение 1 ч.5 10 15 20 Фильтрацию ацетонового осадка проводят на нутч-фильтре с использованием фильтра из капрона, Осадок на фильтре промывают ацетоном, Осадок высушивают на воздухе в вытяжном шкафу. Получают от 100 до 150 г сухого порошка белого цвета с желтоватым оттенком.90 г полученного ацетонового порошка растворяют в 1 л 0,9 -ного раствора йаС 1,Центрифугируют полученный раствор в течение 20 мин при 3000 об/мин.Надосадочную жидкость в количестве 900 мл пропускают через ультрафильтрационную установку на полых волокнах (УПВ) из ароматического попиамида с удержанием по глобулярным белкам более 15000 дальтон.Полученный ультрафильтрат замораживают (-40 С) и хранят до проведения стерилизации методом фильтрации,Перед проведением стерилизации ультрафильтрат размораживают при комнатной температуре, разбавляют раствором 0,9 о ного КаС 1 до концентрации компонентов не25 менее 100 мкг в 1 мл (контроль концентрации полипептидов проводят спектрофотометрически при 275 нм).Стерилизацию проводят стандартнымспособом с использованием мембран с б =30 02 мкм,Выход препарата с концентрацией0,01/о 13000 мл (13000 мгбиологически активных пептидов).П р и м е р 2, Полученный ацетоновый35 порошок в соответствии с примером 1 вколичестве 50 г растворяют в 1 л 0,9-ногораствора ИаС, центрифугируют при 3000об/мин в течение 20 мин, Полученный осадок отбрасывают, надосадочную жидкость4 ц пропускают через попые волокна на установке УПВ. Полученный ультрафильтрат вколичестве 1,1 л (за счет разбавления 0,9%1 чаС при работе УПВ) замсраживают при-40 С до проведения стерилизации фильт 45 рацией, Перед проведением стерилизацииультрафильтрат размораживают и разводят0.9%-ным раствором Ма С до концентрации300 мкг в 1 мл.Выход препарата 5 л (15000 мг биологи 50 чески активных пептидов),Полученные предложенным способомобразцы препарата безвредны при испытаниях на белых мышах, апирогенны и биоактивны,55 Определение биологической активности проводят по стандартной методике определения 50 о -ного восстановлениячувствительности лимфоцитов селезенкитимзктомированных мышей линии С 51 В 1/6к азатиоп рину, Количество розеткообразую2002428 Таблица 1 аблица 2 щих клеток в пробах должно быть не более 50 О по отношению к значению контроля,В табл,1 приведены данные по определению биоактивности образцов, полученных по предлагаемому способу,Полученные образцы по предлагаемому способу соответствуют по биоактивности критериям биоактивности Тактивина медицинского (В Ф С-1550-85) и Т-активина ветеринарного (ТУ 10-09-18-89).Хроматографический профиль образцов, полученных предлагаемым способом, снятый в геле Сефадекса Г. приведен в табл. 2, Для сравнения приведены профили коммерческих препаратов: медицинского Тактивина (производство НИИВС им,Мечникова И.И.) и ветеринарного Т-активина (производство завода биопрепаратов г,Покров), снятые в тек же условиях.Как видно из табл,2, для всех препаратов. высокомолекулярные примеси с мол.в, 30000 и более отсутствуют (соответственно фракции с М 8 и менее). Для всех препаратов характерен максимум в распределении по молекулярным весам, соответствующий ЬНФ фракций 15-16,Хроматографические профили этих препаратов сопоставимы друг с другом. Различия составляют лишь концентрации полипептидов в конечной препаративной форме при единстве для всех них минимальной границы по содержанию биоактивныхпептидов не менее 0,01 мас. ,Анализ Уф-спектров препаратов пока 5 зал отсутствие различий и в этой характеристике, Максимум поглощения для всехобразцов соответствует (275 .8) нм,Таким образом, предложенный способпозволяет получать полипептидный препа 10 рат иэ тимуса молодняка КРС по качеству ихарактеристикам идентичный Т-активину.По сравнению с прототипным способпроще в технологической реализации, нетребует дорогостоящего оборудования (суб 15 лимационные установки) и позволяет получать продукт с сохранением качества приповышении его выхода.Так, с 1 кг тимуса можно получить предложенным способом от 2500 до 3000 мг це 20 левого продукта биоактивных пептидов привыходе 110 мг в прототипе.Препарат Т-активин, полученный предложенным способом, может использоваться как иммуномодулятор и биостимулятор в25 практике животноводства и ветеринариинаряду с существующим препаратом, полученным другим способом,(56) Авторское свидетельство СССР30 М 16958690 кл, А 23 К 1/00,1991.2002428 Продолжение табл,2 Продолжение табл.2 Ф о р мул а изобретения Составитель В.ЗеленковТехред М,Моргентал Корректор О.Кравцова Редактор А,ЗробокЗаказ 3198 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯ-. ТОРА путем измельчения исходного сырья, отделения осадка фильтрацией и стерилизации, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют ткань железы - тимуса, измельчение ведут с добавлением 2 - 4 ф 6-ного раствора уксусной кислоты в присутствии хлорида цинка с последующей гомогенизацией в течение 36 - 72 ч, после отделения осадка надосадочную жидкость добавляют порциями в охлажденный до -5 С ацетон в соотношении 1: 5, осадок отстаивают, фильтруют, высушивают и полученный порошок растворяют в 1 5 л 0,9 О/-ного раствора хлористого натрия,центрифугируот полученный раствор о течение 20 мин, а надосадочную жидкость подвергают ультрофильтрации на полых волокнах с номинальным удержанием 12 10 000 - 30 000 дальтон, причем перед стерилизацией ультрафильтрат замораживают при -40 С,