Способ анализа воды на содержание вируса гепатита а

3 17357цие энтеровирусов, основанный на адсорбции их на аморфном осадке гидрата окиси алюминия 31.Авторами был воспроизведен данныйспособ применительно к анализу различных видов воды на содержание вируса гепатита А, Способ заключается вследующем, В приготовленные модельныерастворы с иэвестньи содержанием ви 10руса гепатита А вносят аморфный Гидрат окиси алюминия, доводят рН друровня 3,0-1,5 соляной кислотой и приперемешивании инкубируют в течениеночи, Осадок отделяют низкоскоростнымцентрифугированием. Злюцию вируса осу 15ществляют 0,05 М глициновым буферомрН 11,5, нейтрализуют рН 7,0-8,00,05 М глициновым буфером рН 1,5, проводят антимикробную обработку хлоро-формом, концентрируют ультрафильтрацией до минимального объема и анализируют на наличие специфической антигенной активности вируса гепатита А припомощи иммуноферментного анализа (ИФА),2Однако к недостаткам этого способаотносится;невысокая степень выявления вируса гепатита А, которая составляет всреднем 20-25: от внесенного количества и воэможность осуществлять анализ"небольших объемов жидкости, посколькувозникают технологицеские трудности ввыделении осадка,Целью изобретения является повышение степени выявления вируса гепати- З 5та А в больших объемах воды разнойстепени загрязненности и его упрощение,Поставленная цель достигается тем,что вместо аморфного гидрата окиси 40алюминия для адсорбции вируса гепатита А из воды используют кристаллический гидрат окиси алюминия в форме гидраргиллита.Способ осуществляют следующим образом,Анализируемую воду подкисляют соляной кислотой до уровня рН 3,0-1,5и пропускают через одну или несколькоколонок, заполненных кристаллическим Ягидратом окиси алюминия из расчетасмна 10 л анализируемой воды соскоростью 1,0-20 мл/мин, элюцию проводят 0,05 М глициновым буфером рН11,5, нейтрализуют рН до 7,0-8,0 550,05 М глициновым буфером рН 1,5, затем осуществляют антимикробную обработку хлороформом, доводят объем элю 67 4ата ультрафильтрацией до несколькихмиллилитров и анализируют на наличиеспецифической антигенной активностивируса гепатита А при помощи ИФА,Способ поясняется следующими примерами,П р и м е р 1, Питьевую воду объемом 10 л с внесенным в нее культуральным вирусом гепатита А (штамм НА15) в концентрации в 1000 раз меньшеминимально детектируемой методом ИФА,подкисляют соляной кислотой до уровнярН 3,0-ч,5 и пропускают через колонку с кристаллическим гидратом окисиалюминия объемом 1 смз со скоростью10-20 мл/мин, После прохождения водычерез колонку пропускают десорбирующий 0,05 М глициновый буфер рН 11,0Злюат нейтрализуют до уровня рН 7,00,0, используя 0,05 М глициновый буферрН 1,5, проводят антимикробную обра"ботку хлороформом, концентрируют ультрафильтрацией до конечного объема5 мл и анализируют на наличие специфической активности при помощи ИФА.Проводят количественное определениеантигена вируса гепатита А, которое вданном случае составляет 983 от внесенного.П р и м е р 2, Проведение анализаосуществляют как в примере 1, за ис-ключением того, что вместо культурального вируса гепатита А (штамм НА - 15)используют "дикий" вирус, выделенныйот больного вирусным гепатитом А.Результаты полностью идентичны полученным с использованием культурального вируса,П р и м е р 3, Проведение анализа осуществляют, как в примере 1, за исклюцением того, что для проведения анализа используют сточную воду, Количественное содержание антигена вируса гепатита А, определяемое при помощи ИФА, составляет в данном случае 80 90 от внесенного количества,П р и м е р ч, Сточную воду объемом 1 л с внесенным в нее вирусом гепатита А в концентрации в 100 раз меньше минимально детектируемой методом ИФА подкисляют соляной кислотой до уровня рН 3,0-ч,5 и пропускают через колонку с кристаллическим гидратом окиси алюминия с различной скоростьюУстановлено, цто сорбционная емкость гидрата окиси алюминия была максимальной и оставалась неизменной приНаименование десорбирующего буфера Показатели экстинкции ОП 192 нм Процент"выхода"вируса 0 5760,5 М трис буфера рН 8,50,5 М Фосфатный буферрН 8,2 70,03 й,О 0,281 5 1735767бскорости пропускания сточной воды че- используя 0,05 глициновый буферрез колонку от 1 до 20,0 мл/мин, /аль", рН 1,5.нейшее увеличение скорости лимитиро- Злюаты с колонок объединяют и провалось гидравлическим сопротивлением изводят антимикробную обработку хлорои забиванием колонки взвешенными в5 Формом, концентрируют ультрафильтрасточной воде твердыми частицами, цией до конечного объема 5 мл и аналиП р и и е р 5, Проведение анализа зируют на наличие специфической антиосуществляют, как в примере 3, но генной активности при помощи ИФА. Ан"анализируемую сточную воду перед про- тиген вируса гепатита А был определенпусканием через колонку с кристалли- в разведении 1;8, Кроме того, частьческим гидратом окиси алюминия не элюата после дополнительного освобожподкисляют, Установлено снижение выхо- дения от контаминирующей бактериальда вируса до 50;, ной Флоры при помощи стерилизующейОптимальную адсорбцию получают при фильтрации была использована для эара 15значениях рН между 3, 0-1,5 (см. черт. ) . жения культуры клеток ГгНК, ПослеП р и м е р 6. Проведение анализа . трех пассажей вирус гепатита А был обосуществляют, как в примере 1 за ис- наружен при помощи ИФА. Наличие вирусаключением операции элюирования, кото- гепатита А подтвердили, используярую проводят с использованием различ О непрямой иммунофлюоресцентный метод.ных десорбирующих буферов, В таблице 11 спользование предложенного спосоьаприведены результаты использования позволит увеличить степень выявленияв качестве десорбирующих буферов вируса гепатита А, которая не зависит0,5 М три - буфера с рН 856; 0.,5 М от вида и степени загрязненности анафосфатного буфера с рН 8,2; 3 мясным 25 лизируемой воды по сравнению с иээкстрактом с рН 9,0; 0,05 глициновым вестным способом, а также - эначибуфером с рН 11,5. тельно упростить анализ эа счет исПредставленные в таблице результа- ключения этапа низкоскоростного центты свидетельствуют, что наилучшие ре- рифугирования, воэможности использовазультаты получают при использовании в ния простейшего оборудования отечесткачестве десорбирующего 0;05 М глици- венного производства,нового буфера с рН 11, 5.П р и м е р 7, Сточную цоду объе- Ф о р и у л а и 3 о б р е т е н и ямом 30 мл отобранную из канализацион-ного коллектора детского дошкольного Способ анализа воды на содержаниеучреждения по эпидемическим показа вируса гепатита А путем пропусканияниям (зарегистрировано несколько слу- воды через колонку с сорбентом, провечаев заболеваний вирусным гепати- дение элюции, очистки от микрофлорытом А), подкисляют соляной кислотой . и определения в элюате специфическойдо уровня рН 3,0-ч,5 и пропускают че- вирусной активности при помощи ИФА,реэ две колонки с кристаллическим гид" 40 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сратом окиси алюминия общим объемом целью повышения степени выявления ви 20 см со скоростью 5-20 мл/мин Пос- руса гегатита А и его упрощения, в3ле прохождения воды пропускают де- качестве сорбента используют кристалсорбирующий 0,05 М глициновый буфер лический гидрат окиси алюминия в фор"11,5, нейтрализуют до уровня 7,0-8.0, 5 ме гидраргиллита.1Изучение эффективности десорбции вируса гепатитаА с кристаллического гидрата окиси алюминия взависимости от используемого буфера1735767 Продолжение таблицы 3 мясной экстракт рН 9,00,05 11 глициновый буферрН 11,5 91) 0 0,752 98,0 0,810 Примечание: объем элюата во всех случаях был одинаков и равнялся 5 мл. А%С 006 цхя вируса,// Составитель А, БурТехред И.дицыкРедактор А орректор Л. Пилипенко роизаоцственно-издательский комбинат патент", г, Уагород, уп. Гагарина, 101 Заказ 1812 Тираж ВНИИПИ Госуцарственного комитета по113035, Иосква, В-З Подписноеобретенилм и открытилм при ГЕНТ СССРауаскал наб д. 4/5