Штамм бактерий аzотовастеr снrоососсuм для получения препарата, применяемого в растениеводстве

союз соВетскихСОИА.п ИСТИН ЕСкРЕСПУБЛИК 170 8,С 12 И 1/ я 5 С 05 Г САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ вательскии Но ка(54) ШТАМ СНЯООСОС ПАРАТА, ПР ВОДСТВЕ (57) Изобрет ственной ми к сельскохоэяйбиотехнологии,ние относитсробиологии превышает 1,5 - 2,0 х 10 к сельскохозяибиотехнологии, бактериальных растениеводста для получения мм К, обладающий н щей активностью, сп овать ИУК.этого штамма явл высокая продуктив при выращивании н а среде Федорова с л ду об яется ность а сре 1 еласЦелью изобрет штамма Аго 1 оЬас 1 щего более высоко лее широким с фитопатогенных г стью к синтезу ИУ Штамм 3064 вы бран по признаку ния бактериальныения являетс г сЬгоососсо й продуктив пектром п ибов, а такж я получение а, обладаюностью и боодавления е способноК,делен иэ смаксимал ьклеток и озема и отоого накопле- ксимальной ГОСУДЛР СТ В Е Н 4 Ы И КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Авторское свидетельстМ 922105, кл. С 05 Р 11/08Защита растений, 1988 БАКТЕРИЙ АЕОТОВАСТЕВ ОМ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕ ИМЕНЯЕМОГО В РАСТЕНИЕ Изобретение относитсяственной микробиологии ив частности к получениюпрепаратов, применяемых вве, и касается нового штаммуказанных препаратов,Известны штамм ы Аго 1 оЬассег сЬгоососсогп, значительно отличающиеся своими свойствами, Штамм К отличается способностью к синтезу физиологически активных веществ, Штамм аэотобактера Ь 92 обладает антагонистической активностью в отношении фитопатогенных грибов,Однако оба штамма обладают способностью либо к синтезу иидолилуксусной кислоты (ИУК), либо обнаруживаю; антагонистические свойства в отношении фитопатогенных грибов; во всех случаях продуктивность штаммов при глубинной в частности к получению бактериальных препаратов, применяемых в растениеводстве. Целью изобретения является получение штамма АгосоЬастег сЬгоососсоа, обладающего более высокой продуктивностью и более широким спектром подавления фитопатогенных грибов, а также способностью к синтезу ИУК, Штамм бактерий АлотоЬасТег спгоососсцгп выделен из серозема, депонирован в ВКПМ М Вдля получения препарата, применяемого в растениеводстве, Штамм обладает продуктивностью, в 6-18 раз, превышающей продуктивность известных штаммов, более широким спектром антагонистической активности по отношению к фитопатогенным микроорганизмам, а также синтезирует в 3,5-4 раза больше ИУК, 5 табл. ферментации неклеток/мл,Известен штас азотфиксируюностью синтезирНедостаткомсравнительно неактивнос 1 и подавления роста фитопатогенных грибов,Штамм деионирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов, коллекционный номер ВКПМ В.Культурально-морфологические признаки, На агаризованной среде, имеющей состав, 6 меласса 3,0; К 2 НРО 4 0,03, СаНРОд 0,02; К 25040,02; йаС 0,05; СаСОз 0,5, культура образует крупные круглые выпуклые блестящие гладкие слизистые колонии, непрозрачные, непигментные, края гладкие ровные, В молодой культуре на 18-м часу роста клетки мелкие, иногда полиморфные - палочки и кокковидные; в зрелой культуре (на 48-м часу роста) клетки кокковидные, с зернистой протоплазмой, капсулированы, размер 1 - 15 мкм,На агаризованной среде Бэрка, имеющей состав, 6: К 2 НРО 4 0,08; КН 2 РО 4 0,02; Ч 93040,02; ИаС 0,02; Са 504 0,01; Ге 2(504)з 0,001; глюкоза 1,0, колонии прозрачные, чуть голубоватые, круглые, гладкие, блестящие, клетки - палочки, в молодой культуре подвижные, размером 0,5 х 1,5 мкм,На среде Апеегп с бензойнокислым натрием роста нет. Физиолого-биохимические признаки, Аэроб, оптимальная температура роста 28 ч. 2 С, оптимальное значение рН 6,5-7,0.Отношение к углеводам: хорошо усваивает сахарозу, маннит, глюкозу, фруктозу, сорбозу, крахмал, этанол; не усваивает ксилоэу, арабиноэу.Отношение к источникам азота: умеренный рост на безазотистых средах; хороший рост на среде с 0,4 6 (ч Н 42304, мелассой.Для хранения штамм, 3064 выращивают на скошенной агаризованной среде состава, 6: меласса 3; КНР 04 0,03; СаНРО 40,02; агар-агар 1,5-2,0; К 2504 0,02; чаС 0,05; СаСОз 0,5.Начальное значение рН 7,0, к концу роста (72 часа) до 7,4. Температура выращивания 28 . 2 С, Условия хранения: в пробирках на скошенной твердой (агаризованной) питательной среде указанного состава при т =7 + 3 С, Маркерных признаков нет.Характерными особенностями штамма 3064 являются высокая продуктивность при глубинной ферментации; антагонистическая активность в отношении фитопатогенных грибов: способность к синтезу ИУК.Г р и м е р 1. Получение бактериального препарата с использованием культуры шт, 3064.Бактериальную культуру, шт,3064 выращивают на жидкой питательной среде Федорова с сахароэой, время ферментации 48ч. температура выращивания 281 С, режим аэрации - перемешивания 1 обьем воздуха: 1 объем среды, титр жизнеспособных5 клеток 8,5 10 клеток/мл.Выращенную жидкую бактериальнуюкультуру смешивают с защитной средой следующего состава, :Меласса 310 Глютамат натрия 2Тиомочевина 0,5Мел 7Потери при смешивании и перекачивании жидкой культуры 5.15 Жидкую бактериальную культурушт,3064, смешанную с защитной средой,высушивают на распылительной сушилкепри температурном режиме на входе120 + 5 С, на выходе 65 .ф. 5 С, Механи 20 ческие потери 15. Содержание жизнеспо-собных клеток шт. 3064 в препарате 15,9 109кл./г.Выход препарата по балансу жизнеспособных клеток 507 ь25 П р и м е р 2. Для сравнения продуктивности известных штаммов (К и 92) и шт. 3064проводят глубинное выращивание бактериальной культуры на жидких питательныхсредах следующего состава, :30 Среда Федорова Среда Федоровасс меласой с сахарозойМеласса 3,0 Сахароза 2,0К 2 Н РО 4 0,03 К 2 Н Р 04 0,03СаНРО 4 0,02 СаНРО 4 0,0235 К 2304 0,02 К 2304 0,02ИаС 0,05 йаО О 05СаСОз 0,5 СаСОз 005Смесь микроэлементов 1 млСреда Бэрка,бглюкоза 1,0К 2 Н РО 4 0,03КН 2 РО 4 0,02М 9504 0,0245 На С 0,02СаЯО 4 0,01Ге 2(504)з 0,0001Выращивание проводят на круговой качалке (и = 180 - 220 об/мин) в колбах при50 28 чС в течение 60-72 ч при условииестественного изменения величины рНжидкой культуры в процессе роста.В табл.1 приведены данные о продуктивности штамма 3064 и известных штам 55 мов(К и 92),Из данных табл.1 видно, что выход жизнеспособных клеток штамма 3064 в 6 - 18 развыше, чем у известных штаммов.1703634 Таблица 1 Таблица 2 П р и м е р 3. Изучение влияния шт. 3064 на фн;опатогенную микрофлору проводят методом колодцев, используя этанольную вытяжку жидкой бактериальной культуры шт. 3064, Эффект учитывают через 2-1 сут и н кубации тест-культур на соответствующих средах и выражают в миллиметрах зоны полного отсутствия роста тест-организма вокруг лунок. Размеры зоны приведены в табл.2. Данные табл.2 свидетельствуют о том, что штамм 3064 имеет более широкий спектр подавления фитопатогенной микро- флоры. чем штаммы К и 92.Результаты сравнения выхода ИУК у штамма 3064 и известных штаммов приведены в табл.З. Данные табл.З подтверждают более высокий уровень биосинтеза ИУК штаммом 3064 в сравнении со штаммами К и 92.Штамм 3064 технологичен; при изготовлении на его основе препарата число бактериальных клеток в препарате на порядок выше, чем в препарате, изготовленном на основе известного штамма К; высокий уровень числа жизнеспособных клеток в препарате сохраняется в течение года,В табл.4 приведенные данные о сохранности жизнеспособных клеток азотобактера в препарате.Препарат на основе штамма 3064 пока зал высокие результаты по увеличению урожая сельскохозяйственной продукции в вегетационных и полевых опытах.В табл.5 приведены данные о прибавкеурожая сельскохозяйственных растений 1 О при использовании штамма 3064 по сравнению с контролем.Прибавка урожая томатов при обработке препаратом на основе шт. 3064 32 ц/га.при обработке препаратом на основе шт, К 15 17 ц/га, т,е. относительная прибавка 15 ц/гаили в 1,8 раза выше, чем при обработке препаратом на основе шт.К.Таким образом, штамм 3064 обладаетпродуктивностью, в 6-18 раз превышающей 20 продуктивность известных штаммов, болеешироким спектром антагонистической активности по отношению к фитопатогенным микроорганизмам, а также синтезирует в 3,5-4 раза больше ИУК, чем известные 25 штаммы.Формула изобретения Штамм бактерий Ао 1 оЬас 1 егсЬгоососсца ВКПМ Вдля получения препарата применяемого в растениеводстве.301703634 Таблица 3 Таблица 4 Табл и ца 5 Составитель С. ЛевинТехред М.Моргентал Редактор И. Шмакова Корректор О. Кравцова Заказ 38 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101