Способ получения арахидоновой кислоты

ОЮ 01) СООЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЯИОТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 31/20// А 61 К 35/68 4150 А ЕТЕНИЯ ИСА а амен ечен орд су.В омо о 97 т ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ВТОРСНОМУ СВИДЕ(71) 1-й Московский ордена Лени ордена Трудового Красного Знмедицинский институт им. И,М.Сва и Московский ордена Ленина,на Трудового Красного Знамении ордена Октябрьской Революциидарственный университет им. Мносова(56) 1. Авторское свидетельствУ 463450, кл А 61 К 31/075, 12. Авторское свидетельство64 496 кл, С 07 С 57/03, 19СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АРАХИДТы, включающий обрабо липидов водным раствором щелочи, подкисление, экстракцию целевого продукта органическим растворителем, охлаждение полученного экстракта, после,дующую его хроматографию на колонке с силикагелем, импрегнированным нитратом серебра, и обработку щелочью, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, и с целью повышения чистоты и выхода о- целевого продукта, после экстрагирое- вания липидов жгутикового простейшего Аейаеа опта смесью хлороформ - метанол в соотношении 2: 1, обработку липидов водным раствором щелочи проводят в этиловом спирте, экстракцию целевого продукта проводят хлоро-9 ССР формом, растворитель удаляют, образовавшийся остаток растворяют в аце- Р тоне, прибавляют к мочевине и проводят хроматографию на колонке при со- НО- . отношении смеси высших жирных кислот.и адсорбента (1:120)-(1:150).Изобретение относится к фармацевтической и медицинской промышленности и касается способа получения био-логически активного средства.Известен способ получения арахидоновой кислоты из липидов поджелудочкой железы экстракцией изопропиловым спиртом, омылением, подкислением,последующей экстракцией хлороформоми его отгонкой многоступенчатой низ"котемпературной кристаллизацией,кристаллизацией с мочевиной в метано-. ле, отгонкой метанола и хроматографированием в тонком слое силикагеля И. Недостатками способа являются неэкономичность из-за дефицита природного сырья липидов, нетехнологичность (использование хроматографии в тонком слое), усложненность способа, невысокий выход и невысокое качество целевого продукта (из 800 г липидов получают 1,45-1,55 г арахидоновой кислоты с чистотой 90-95%).Известен также способ получения арахидоновой кислоты иэ липидов надпочечников крупного рогатого скота, в котором липиды омыпяют, подвергают низкотемпературной кристаллизации, этерифицируют и вновь омыпяют, Полученную после омыления смесь высших жирных кислот далее подвергают крисо таллизации при температуре 0 " -5 С,20 25 из жидкой фазы извлекают неомыляемую 35 40 45 часть липидов экстракцией петролейным эфиром, оставшуюся жидкую фазу подкисляют минеральной кислотой, из полученной реакционной массы экстрагируют жирные кислоты петролейным эфиром, экстракт подвергают кристаллизации при С -28 - -30 С, а затем при с -75 - -78 С, петролейный эфиро1 отгоняют полученную смесь кислот подвергают кристаллизации в ацетоне при-77 - -78 С с последующей его отгонкой, полученный при этом концентрат арахидоновой кислоты этерифицируют метиловым спиртом и очищаютхроматографией на силикагеле, импрегнированном АрНО в колонке с использованием в качестве элюэнта гексана или диэтилового эфира, причем последний берут в количестве 5-100% отвеса гексана. Из полученного концентрата метиловых эфиров. выделяют арахидоновую кислоту путем испарения элюэнта с последующим щелочным гидролизом, экстракцией петролейным эфиром, подкислением полученной реакционной смеси минеральной кислотой и экстракцией арахидоновой кислоты петролейным эфиром 2 .Недостатками известного способа являются усложненность процесса, неэкономичность вследствие дефицита природного сырья, невысокий выход и недостаточно высокая чистота целевого продукта (иэ 250 г липидов надпочечников получают 5-6 г арахидоновой кислоты с чистотой 95-97%).Целью изобретения является повышение выхода и чистоты целевого продукта.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения арахидоновой кислоты, включающему обработку липидов водным раствором ,щелочи, подкисление, экстракцию целевого продукта органическим растворителем, охлаждение полученного экстракта, последующую его хроматографию на колонке с силикагелем, импрегнированным нитратом серебра и обработку щелочью, после экстрагирования липидов жгутикового простейшего АзСаза Гопака смесью хлороформ-метанол в соотношении 2:1, обработку липидов водным раствором щелочи проводят в этиловом спирте, экстракцию целевого продукта проводят хлороформом, растворитель удаляют, образовавшийся остаток растворяют в ацетоне, прибавляют к мочевине и проводят хроматографию на колонке нри соотношении смеси высших жирных кислот и адсорбента (1:20)-(1 й 150) .П р и и е р 1. 8,0 г липидов жгутикового простейшего Азаз 1 а опта экстрагируют смесью хлороформ:метанол 2:1, подвергают щелочному гидролиэу в водно-этиловом (1:1) растворе, исходя иэ расчета 0,25 г НаОН на 1 г липидовРеакцию проводят 3 ч с обратным холодильником прибани 50- бО С в токе азота. (В дальнейшем все операции проводят в токе азота) . Этиловый спирт упаривают, водный раствор подкисляют 10%-.ной серной кислотой до рН 3,5, осадок отфильтровывают, вещество извлекают хлороформом (25 мл х 3). Органические экстракты объединяют, промывают равным количеством воды, сушат над Йа 2 БОд и растворитель удаляют в вакууме.Получают смесь жирных кислот 4,2 г с содержанием арахидоновой кисло947 4лейный эфир и переносят в колонкудлиной 100 см и диаметром 35 см,Смесь метиловых эфиров жирных кислот (0,84 г с содержанием .арахидоно- вой кислоты 67%) растворяют в 10 мл петролейного эфира и наносят на колонку (соотношение нисших жирных кислот ВЖК и адсорбента 1:120). Вещество элюируют последовательно петролейным эфиром, смесями: диэтиловый .эфир - петролейный эфир (0,5;99,5), (1:99), (4:96), (1:9) объем Фракций от 50 до 10 мл. фракции, содержащие метиларахинодат чистотой 98% (анализируют методами ТСХ и ГЖХ) объедиияют. Элюэнт упаривают и получают 0,44 г метиларахидоната указанной чистоты. Строение арахидоновой кислоты доказано масс-спектрометрией. Для анализа получали пирролидидовые производные жирных кислот. Массспектрометрические исследования проводили на хромато-масс-спектрометре"финннган - 3200 Р" с автоматической системой обработки данных (энергия ионизирующих электронов 70 эВ, диапазон массовых чисел 40-420 а.е.м., температура источника ионов 120 С. ,В максимумах пиков, реконструированных с помощью ЭВИ хроматограмм, определяли времена удерживания и соотношения пиков характеристических ионов в масс-спектре. Эти параметры, а в ряде случаев и полные масс-спектры, использовали для идентификации жирных кислот.Адсорбент готовят следующим образом,К нагретому до 80 С раствору А 8 ИО 50в дистиллированной воде, прибавляютсиликагель марки 100/250 меш.(соотношение силикагеля и Арф 2:1), интенсивно перемешивают 15 мин,.фильтруют и массу активируют 12 ч при 55120 ОС,Затем адсорбент охлаждают, добавляют к нему прн перемешивании петро 1 П р и м е р 2. 6,8 липидов жгутикового,простейшего А.0 опда подвер-гают щелочному гидролизу как в примере 1 и получают 3,53 г смеси жирных кислот с содержанием арахидоновой кислоты 20%. Эту смесь кристаллизуют последовательно из ацетона пр е -5 С и р е -25 пс, согласно .опримера 1 и получают остаток ненасыщенных жирных кислот 2,3 г с содержанием арахидоновой кислоты 37,5% Этот остаток кристаллизуют с мочевиной в ацетоне как в примере 1 и получают О,1 г смеси полиненасыщенных жирных кислот, содержащих 65% арахиноновой кислоты, которую этерифицирувт по примеру 1 и получают 0,65 г метиловых эфиров полиненасыщенных жирных кислот.Метиловые эфиры ВЖК подвергают хооматогоайии на колонке с силикагелем, импрегнированным нитратом сеуаб1132947 Составитель В.БрусиловскаяРедактор Ан,Шандор Техред А.Бабинец Корректор В.Бутяга Заказ 9886/8 Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 ра (соотношение эфиров ВЖК и адсор бента 1:150, элюируют как в примере 1, Получают 0,34 г метиларахидоната с чистотой 993.Предлагаемый способ проще и экономичней, чем известный, так как имеет 7 стадий вместо 8,В предлагаемом способе также отсутствуют сверхнизкие температуры-30 - -70 С требующие затрат больо)ших энергий. Лрахидоновую кислоту 5 получают с большей чистотой и с большим выходом, В способе используетсясырье непищевого назначения.