Способ получения арахидоновой кислоты

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сотов Советских Социанистинесиии Республик)М,Кл,22) Заявлено 310 с присоединением аявк С 07 С 57/02 С 11 В 13/00 т оорЩФотвоааы 1 аовитот Воввта Миииетраа СОВР ао долив ааоорвтевии а втирытииа Трудового Красного Энамениимической технологии им. М.В,Ломоносова Московский б нститут тонк(71) Заявител 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АРЬХИДОНОВОЙ КИСЛ комра Изобретение относится к способам получения биопредшественника простагландинов (,в, и Е , а именно, к получению арахидоновой, цис-, цис цис-, цис,8,11,14-эйкоэатетраеновой кислоты (Ае)1Известные ранее способы получения арахидоновой кислоты из надпочечных желез крупного рогатого скота путем фракционной кристаллизации концентратов высших жирных кислот с последующей очисткой:арахидоиовой кислоты методом бромирования .", дебромирования 11или дробной кристаллизации Соединений включения с мочевиной 2 , не дают воэможйости получить целевой продукт, не содержащий примесей,Известен также способ получения арахидоновой кислоты 31, заключаю-. цийся в том, что липиды животных тка ней (надпочечные железы) омыляют .и после Фракционной кристаллизации при -70 - -20 С обрабатывают мочевиной с дальнейшей кристаллизацией мочевинныхплексов при -75 - -20 С. ПослеФэложения комплексов получают концентрат:арахидоновой кислоты, окончательную очистку которой проводят алсорбционной хроматографией на окиси алюминия. Выход арахндоновой кислоты (96 чистоты) 19-20. Недостатком способа является процесс изомериэации, протекающий на окиси алю миния, снижающий чистоту целевогопродукта появлением изомерных примесей, являющихся ингибиторами биосинтеза простагландинов.Целью изобретения является увели чение чистоты и выхода целевого продукта, Это достигается тем, что мочевинный комплекс после кристаллизации разлагают при рН 3 и прн темпера .туре 40-45 фС, полученную при этом 16 смесь полиеновых кислот этернфицируютв присутствии кислых катализаторов,и полученные эфиры полиеновых кислотпоследовательно подвергают фракционированию прн остаточном давлении 0,01.0,06 мм рт.стомылению и фракционированию при 0,01"0,06 мм.рт.ст, Получение мочевинных комплексов проводятпо способу описанному выше. Однаков качестве исходных веществ целесообразно использовать липиды поджелудочной железы - отход производстваэндокринных препаратов. Выход целевого продукта - арахидоновой кислотыП р и м е р. К перемешиваемой эмуль" сии 400 г липидов поджелудочной железы животных в 450 мл метилового спирта за 50 мин прибавляют раствор 107 г едкого кали в 300 мл воды. Реакционную массу перемешивают 3,5 ч в токе азота, затем охлаждают до (-)5-Оф С и к отделенному Фильтрату добавляют 200 мл толуола, подкисляют 175 мл 10-ной серной кислоты до рН 3, пе ремешивают 1 ч, отфильтровывают осадок и промывают его 50 мл толуолаОрганический слой отделяют от водного, Из водного слоя - вещество извлекают толуолом (2 х 50 мл). Объеди ненные толуольные экстракты обрабатывают 230 мл 15-ного водного раствора метабисульфнта натрия (2 часа). Органический слой отделяют, сушат сер. нокислым натрием. Остаток 233,5 г смеси высших жирных кислот с содержанием Я 3,1 растворяют в 600 мл ацетона, охлаждают до -25 - -20 С, перемешивают 2 ч, осадок отделяют. С фильтратом (около 600 мл) проводят подобное разделение последовательно при -55 "45 С, -70 - -65 С. Конечный фильтрат отделяют, удаляют ацетон, а остаток (34,0 г смеси высших ненасыщенных жирных кислот с содержанием Д 17,6) прибавляют за 15 мин к нагретому до 60-65 раствору 1420 г мочевины в 400 мл метилового спирта, перемешивают 20 мин, охлаждают до 18-20 и выстаивают 10 ч.Осадок отделяют, фильтрат упаривают до половины 35 объема, охлаждают до -50 - -45 О, перемешивают 2 ч. Осадок отделяют, фильт" рат упаривают до 50-80 мл и снова перемешивают при -70 - -65 2 ч, осадок отделяют, фильтрат подкисляют 40 30 мл 10-ной соляной кислоты до рН 3. Затем реакционную массу перемешивают в токе азота 45 минут при 40-45 , ох лаждают и обрабатывают толуолом (Зх 50 мл) . Органические экстракты 4 отделяют, сушат сернокислым натрием и после удаления растворителя получают 11,2 г концентрата полиеновых кислот (А 48,9), который растворяют в 60 мл безводного метилового р спирта в присутствии 2,5 г хлористого ацетила и перемешивают 1 ч при 65-67, Затем реакционную массу охлаждают, метанол удаляют, остаток последовательно обрабатывают водой (10 мл), насы- щ щенным водным раствором бикарбоната натрия (2 х 20 мл) до рН 6-7 и вещество извлекают толуолом (5 х 50 мл). Толуольные экстракты сушат, остаток (10,8 г) после отгонки растворителя перегоняют. Получают 3 фракции: 1 Фр. 1,5 г, т.кип. 108-118/0,06 мм, л 1,4538 уЯ фр. 2,05 г, т.кип. 118-124 /0,06 мм, иг 1,4643 р Й Фр. 6,00 г, т.кип, 124,5-150 /0,06 мм, ф 1,4745. Ц) 65 фракцию снова фракционируют и получают2 фракции: 1 фр. 1,8 г, т.кип. 118123 /0,09 мм, рр 1,4709, содержаниеА 27 0; Ц Фр. 3 5 г, т кип. 126"130 /0,09 мм, пщ 1,4755, содержаниеА 73,1. Й фракцию (3,5 г) концентрата эфира арахидоновой кислотыприбавляют к раствору 0,87 г едкогонатра в 50 мл метилового спирта. Реакционную массу перемешивают в токеазота 6 ч при 18-20 , метанол отгоняют, к остатку добавляют 20 мл воды(Зх 30 мл). Толуольные экстракты с20 мл 7-ного водного раствора мета"бисульфита натрия перемешивают 3 ч.Толуольный слой отделяют, сушат иостаток (3,2 г) после отгонки растворителя перегоняют, получают 3 фракции: 1 фр. 0,6 г, т.кнп. 150-156при 0,06 мм, п 1,4810; Й Фр.2 1 г, т.кип. 158-160 при 0,06 мм,яр 1,4870; ш фр. 0,1 г, т.кип.16 1-165 при 0,06 мм, ио 1, 4910И фракция после обработки на аргентированном силикагеле представляет собой арахидоновую кислоту,9798,0 чистоты (примесь /по даннымГЖХ/ составляет цис-, цис-, цис-,цис,11,14,17-эйкозатетраеновая кислота) , 2 О 0 9245 и в 1 4870мй 1, 94,1 (найдено), мй 1 97,2 (вычислено) .Найдено,С 78,91 Н 10,51. И.ч.;532, 5СНО Г,Вычислено,С 78,951 Н 10,53.и.ч. 333,6.Структура и индивидуальность целевого продукта подтверждена УФ-,ИК-, ПМР-спектрами и данными ГЖУ. Формула изобретенияСпособ получения арахидоновой кислоты из липидов животных тканей путем их омыления с последующей последовательной фракционной кристаллизацией полученной смеси высших жирных кислот при -70 - -20 цС и обработкой мочевиной, дальнейшей кристаллизацией полу- ченных мочевинных комплексов,при -7520 С, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты и увеличения выхода целевого продукта, мочевинный комплекс после крис- таллизации разлагают при рН 3 и температуре 40-45 фС, полученную при этом смесь полиеновых кислот этерифицируют в присутствии кислых катализаторов, и полученные эфиры полиеновых кислот последовательно подвергают Фракционированию при остаточном давлении 0,01"