Способ получения защитного соматического антигена коринебактерий дифтерии

Шссо,оэня А В-Й-ОПИСИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социаиистичвских Республик.(22) Заявлено 060679 (2) 2767705/28-13 с присоединением заявки Й 9(51)М. Кл. А 61 К 39/05 Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗЩИТНОГО СОМАТИЧЕСКОГО АНТИГЕНА КОРИНЕВАКТЕРИЙ ДИФТЕРИИ Изобретение относится к областимедицины, а именно к инфекционнойиммунологии.Известен способ получения защитного соматического антигена коринебактерий дифтерии путем выращиваниямикроорганизмов на питательной среде с последующим высушиванием биомассы, экстракцией из них целевого.продукта и его фракционированием 1), 10Однако соматический антиген коринебактерий дифтерии, полученный известным спосббом, проявляет малуюзащитную активность при высокой токсичности. 15Целью изобретения является повышение иммуногенности и снижение ток"сичности антигена.Эта цель достигается тем, что впроцессе фракционирования выделяют 20Фракцию с молекулярным весом более300000 дальтон,Способ поясняется следующим примером,П р и м е р, 5940 мг сухой микробной массы коринебактерий дифтерии (штамм У 665 П серовара, гравис,токсигенный) взвешивают в 600 мл0,5 в-ного раствора дезоксихолата натрия на Трис-НС 1 буфере, М 0,005 рН 30 28,6. Проводят 18-часовую экстракцию на холоду (+4) при непрерывном встряхивании, Экстракт отделяют от осадка центрифугированием (20 мин при 3000 и 20 мин при 15000) и подвергают диализу. Диализ проводят на холоду в четыре этапа: против фосфатного буфера М 0,01, рН 7,7, против того же буФера М 0,02, рН 7,2, против дистиллированной воды и против Трис-НС 1 (буфера М 0,005, рН 8,6.Экстракт пропускают через бактериальный фильтр со стерилиэующей мембраной МФА 0,2 (размер пор 0,2.мкм).Затем на приборе для ультрафильтрации экстракт пропускают через четыре мембраны Диафло с последовательно возрастающими размерами пор: ИМ 2 ОЕ,ХМ 50, ХМ 100 и ХМ 300. Разведение и промывку прсмежуточных и окончательных концентраций проводят Трис-НС 1 буфером рН 8,6. С мембраны ХМ 300 собирают 14,6 мл концентрата (78 мг по сухому весу), т.е, выход этой фракции равен 1,2-1,6 от исходной массы бактерий.Концентрат с мембраны ХМ 300 пред" ставляет собой фракцию дезоксихолатного экстраКта с молекулярным весом более 300000 дальтон. По химическом784878 " Фракции для имм низации, дальто 000000000-300000 0 0 000-1000000000 онтроль Формула изобретений 5 нформациипри экспертизе Источники ринятые во внимани1. Филиппова Л.М солевая экстракция терни с осаждением Труды МНИИЗМ, 1969,с соавт. Водно оринебактерий дифбелковых фракций, 13, с. 77. т 45 тавитель С.МалютиРед М.Петко орректор М.Демчик Редактор П.Горько а 00/4 Тираж 673 ПВЙИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 дписно Зак глиал ППП Патент , г.ужгород, ул. Проектная,4 составу фракция является комплексомиэ белка (89, 5), полисахаридов (8, 3),и н леиновых кислот (2, 2),Полученная предлагаемым способомФракция соматических антигенов коринебактерий дифтерии характеризуется высокой степенью иммуногенностипри -отсутствии токсичности, что подтверждается следуюцими материалами.Несколько групп животных (морские свинки) были иммунизированы высокомолекулярной фракцией соматичес" " "ких"антигенов коринебактерий дифтерии. Рылиприменены разные схемы Как видно из таблицы, уровеньантибактериального иммунитета у мор ских свинок, иммунизированных высокомолекулярной фракцией соматическихантигенов коринебактерий дифтерии,достаточно высок, чтобы противостоятзаражению животных безусловно смертельной дозой (ДЛ),Приведенные материалы позволяютсчитать высокомолекулярную фракцию(м.в.300000 дальтон) дезоксихолат нбго экстракта коринебактерий диФтерии защитным соматическим антигеном этого микроба,Защитный соматический антигенкоринебактерий дифтерии в очищенном" виде выделен впервые и может бытьиспользован как основа химическойвакцины, с помощью которой .устраняе.ся дефицит протнвомикробных антителу больных дифтерией или бактерионосителей. иммунизации и дозы антигена. Для палучения сравнительных данных параллельно по тем же схемам другие свинки иммуниэированы низкомолекулярнымифракциями. Контролем служили неиммунизированные животные, Для определения напряженности антимикробного иммунитета, полученного в ответ наиммунизацию,свинки всех групп былиодновременно зараженй живой вирулентной культурой" С.ЖрЬЖег 1 ае, временно лишенной способности токсинообразования, Результаты опыта приведены я таблице,Способ получения защитного соматического антигена коринебактерий дифтерии йутем выращивания,микроорганизмов на питательной среде, с последую". щим высушиванием биомассы, экстракцией из них целевого продукта и его фракционированием, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью повышения иммуногенности и снижения токсичности антигена, в процессе фракционирования выделяют фракцию с молекулярным весом более 300000 дальтон.