Способ диагностики отравлений тяжелыми металлами

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(51)М. Кл. А 61 В 10/00 с присоединением заявки Мо -Государствениый комитет СССР ио делам изооретеиий и открытий(088,8)- -:- Опубликовано 0707.80. Бюллетень М 25 Дата опубликования описания 07.0780(71) Заявитель Иркутский государственный медицинский институт,54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОТРАВЛЕНИЙ ТЯЖЕЛЫМИ МЕТАЛЛАМИИзобретение относится к медицине, а именно к способам диагностикиот-. равлений организма.Известны в медицинской практике способы диагностики отравлений тяжелыми металлами, например таллием, свинцом и др, путемопределения в крови концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, ретикулоцитов, базофильно-пунктированных эритроцитов,.а в моче - концентрации порфири,нов и ь -аминолевулиновой кислоты.Известен способ диагностики отравлений тяжелыми металлами путем определения нуклеиновых кислот в эритро цитах. Сущность этого способа заключается в том, что 0,1-0,2 мл охлажденной крови переносят в центрифужные . пробирки с охлажденным цитратом натрия, перемешивают и центрифугируют 20 6 мин при 15000 об/мин. Эритроциты два раза промывают цитратом натрия и добавляют к ним 30-кратное количество диэтилового эфира. После перемешивания и сливания эФира к остат : ку добавляют смесь диэтилового эфира, этанола и ацетона в соотношении 30:1:1, которую после перемешивания удаляют струей воздуха от водоструйного насоса. Из обработанной органи ческими растворителями пробы экстрагируют нуклеоТиды обработкой. ЬЪ-ным раствором трихлоруксусной кислоты. Экстракт отделяют центрифугированием, трижды промывают охлажденным до 9 оС эфиром и наносят на стартовые полоскибумаги до 0,1 мл.После высушивания полосок бумаги с нанесенными на них пробами прово-, дят электрофорез в условиях охлаждейия при напряжении 850-950 В, при силе тока 2,5 А, падении потенциала.30 В/см и рН 3,9 в течение 2 ч, Элюирование осуществляют 0,5 мл 0,1 н, раствора соляной кислоты, Спектрофотометрируют при 260 нм 11 .Однако, используя известные способы диагностики отравлений тяжелыми металлами, нельзя установить ранние или начальные признаки интоксикации. При помощи известных способов диагностики устанавливают наличиеинтоксикации, когда в системе крови развились значительные нарушения, выражающиеся в раздражении эритроидного ростка красного костного мозга, В периферической крови появляется большое количество регенеративных;клетокретикулоцитов, обнаруживаются дегенеративные формы эритроцитов - базофиль7455064 ной бУмаги и Фиксируют в 10 15смеси 0 2 н раствора хлорной кислоты с 0,05 М хлористого магния,в течение 10-15 мин при 4-5 С. Смесьсливают и процесс повторяют.После этого к обеим пробам приливают ацетон в количестве 10-15 мл,нагревают до кипения, ацетон сливают и процесс повторяют еще раз. После того, как слили ацетон, к эритроцитам добавляют 10-15 мл смесиси этилового спирта и диэтиловогоэфиравзятых в соотношении 3:1, нагреваютдо кипения, смесь сливают. Процессповторяют.1 мК каждому диску Фильтровальной б 5 маги, содержащему пробы эритроцитаруной массы добавляют по 4 мл 0,3 н.раствора едкого калия и проводят гидролиз 50-70;мин при. 36-37 С.Далее, к одному из дисков прилива-,ют 2 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты, гидролизуют 18-22 мин на кипящей водяной бане и выделяют такиМобразом суммарное количество обеихнуклеиновых кислот (Ск), т.е. рибонуклеиновую (Срк) и дезоксирибонуклеиновую (Сцнк ) кислоты, гидролизат охлаждают и фильтруют.На спектрофотометре замеряют оптическую плотность полученного фильтрата в кювете 1 см при длит(е волны 0 270 нм и 290 нм. Проводят расчет кон"центрации нуклеиновых кислот (С )т.е. С +кСрнк + Сана по известной фор- муле Затем ко второму диску Фильтроваль-ной бумаги добавляют 2 мл смеси40 1,2 н. раствора хлорной кислоты с0,05 М хлористого магния и через20-30 мин фильтруют,. выделяя таким образом только рибонуклеиновую кислоту (Срнк ),На спектрофотометре замеряют оптическую плотность фильтрата в кюве-,те 1 см при длине. волны 270 нм и290 нм и проводят расчет концентрации рибонуклеиновой кислоты (С )50 по формуле Определяют в эритроцитарной массе концентрацию рибонуклеиновой кислоты (Срок)По разности концентрации между суммой нуклеиновых. кислот (С нк) и концентрацией рибонуклеиновой кислоты (РНК) ( С нк - С рн = С дик ), судят о концентрации дезоксирибонуклеиновой кислоты (Сдк ) в эритроцитах.Кровь из вены берут в охлажденные полиэтиленовые пробирки, содержащие 3,8-ный раствор цитрата натрия. Центрифугируют при 1500 об/мин, плазму, лейкоциты и тромбоциты удаляют и еще раз промывают 3,8-ным раствором цитрата натрия. 60Затем количество отмытых эритроцитов подсчитывают в мелажерах в миллионах на один микрометр, После чего 0,09-0,11 мл эритроцитарной массы наносят на два диска Фильтроваль где нопунктированные эритроциты. Нарушается синтез гема, о чем свидетельствует повышение концентрации Ь -аминолевулиновой кислоты и появление пер-форинов в моче.Целью изобретения является обеспечение ранней диагностики отравлений тяжелыми металламиПоставленная цель достигается тем, что определяют дазоксирибонуклеиновун кислоту и при содержании ее 20,6- 89 79,7 нг в млн. эритроцитов ставят диагноз отравления.Способ осуществляется следующим образом.П ри определении ранних признаков интоксикации из последуемой кров и темви утем ее очистки и центрифугирования удаляют ядросодержащие клетки и плазму, а из оставшейся эритроцитарной массы вьщеляют дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и по ее количеству судят об отравлении тяжелыми металлами, так как в эритроцитах крови здоровых людей дезоксирибонуклеиновая кислота отсутствует. Данная кислота появляется в эритроцитах при необходимости синтеза каких-либо веществР способных повысить споротивляемость организма токсическому действию металлов. Так, при содержании дезоксири бонуклеиновой кислоты 20,6-89,7 нг в млн. эритроцитов ставят диагноз отравления.П р и м е р. Для определения ранних признаков отравления тяжелыми металлами из эритроцитов крови исследуемого лица вьщеляют дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) методом двухволновой спектрофотометрии. П роцесс количественногоопределения дезоксирибонуклеиновой кислоты(ДНК) в эритроцитах состоит из трех основных этаповОпределяют в эритроцитарной массе суммарное количество нуклеиновых кислот (С нн), т.е. концентрацию ДНК + РНК. 3264 ЬЕ 27 одо СнГ " ": нг/млм.3264 хамС 270- 290рнк Пнг/мин Санк=Снк - Срок " нг/млн Скк - концентрация обеих нуклеиновых кислот;Ср - концентрация рибонуклеиновойкислоты;Сцк - концентрация дезоксирибонуклеиновой кислоты;п - количество эритроцитов;Е - разница оптической плотности при длине волны270 нм и 290 нм.745506 О формула изобретения Составитель Х.Соловьев Редактор С.Тараненко Техред А. Щепанская Корректор Ю.МакаренкоЗаказ 4047/2 Тираж 673 Подписное ЦНИИПИ .Государственногб комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5-14,5 нг/млн=321 мг/млнСледовательно, из эритроцитовкрови человека выделяют 31,2. нг/млн.эритроцитов,дезоксирибонуклеиновойкислоты, что говорит о начале таллиевой интоксикации и требует принятиясоответствующих мер по профилактике 20для предупреждения нарастания интоксикации.Таким образом, способ диагностики отравлений. тяжелыми металлами путем определения нуклеиновых кислот в эритроцитах,позволяет выявитьранние прйзнаки интоксикации металла при помощи определения количественного содержания металлами, а такжеопределения количественногосодержания дезоксирибонуклеиновой кислотыв эритроцитах. Способ диагностики отравленийтяжелыми металлами путем определения нуклеиновых кислот в эритроцитах о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью ранней диагностики, определяют дезоксирибонуклеиновую кислоту и при содержании ее 20,6-89,7 нгв млн. эритроцитов ставят диагнозотравленияИсточники янФормации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРР 316991, кл. О О 1 М 33/16, 1974.