Способ количественного определения сульфгидрильных групп цистеина шерсти

Союз Советскин Социалистических Республик) Дополнительное к ав ) Заявлено 30.04,75 (2 вид.в 131184/23-04 601 М 2 ением заявкиспи судврственнмй кама СССР ав делам нзабретен н вткрытнйата опубликовани исания 19.08.7(72) Авторы изобретения В. Калинин и А. А. Мглинец Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт животноводств 1) Заявитель ЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЬИ ГРУПП ЦИСТЕИНА ШЕРСТИ) СПОСОБ СУЛЬФГИДР Изобрете относится к области аналитичес.енно к определению суцистеина и может быть ои химии, а имильных групповано в сельск льфгид- испольхозяистве ных шерсти2 с пос нием ум его длитель.сть подготовкив которомгонка при без гидроли. еточныминтаких обр льтате т апример,и с дисуль го, опре. рованнь о определение содержания сульфгидрупп, заключающееся в обработке(4-хлормеркурифенилазо) -нафтолономдующим калориметрическим измереньшения реагецта в шерсти 11. Недостатком способа является ность 14 25 дней, а также сложно формамидного цветного реактива растворяют реактив Беннета: пер 55 С и давлении 0,1 мм рт.ст.Кроме того, проведение анализ за шерсти может сопровождаться определениями вследствие адсорб шерстяном волокне, а также в рез неспецифических реакций, как, н зование комплексных соединени ными группами цистеина. Помим деление так нгэываемых замаск ульфгидрильных групп возможно только и распаде водородных мостиков н гидрофобць 1 х связей в кератине шерсти,Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного оп.ределения сульфгидрильных групп цистеина пу.тем последовательной обработки анализируемой пробы серной кислотой, раствором 5,5-дитиобис-(2-нитробензойной кислоты) в присутствии буфера - соляной кислоты и трис (оксиметил)О .амицометана - с последующим фотоколориметрированием получсшгого при этом окрашенного раствора (21. Недостатком известного способа является не точное определение сульфгидрильцых групп, поскольку трис.(оксиметил)-ампцометац в необходимой для проведения определения ЗМ коцпент. рации приобретает желтоватый оттенок,что завышает конечный замер. Поэтому требуется дополнительная операция по сопоставлению его с бесцветным стандартом, Кроме того, трис. . (оксиметил)-амицометан - основной компонент буферной системы - является дорогостоящим.Определение зкстинкции вестнымпредлагаемьособом способом 0,100 0,180 0,275 0,360 0,4305 0,095 0,173 0,242 0,320 0,390 0,470 0,540 0,610 0,680 0,725 80 60 9 Таблица 2Содержа. ние ЗН-групп Экстин оказателькалибро.очногографика рсти ция наФЭК 56.М мм/гшерсти,28 0,27 0,27 0,28 0,26 0,64 0,64 13,10 13,00 19,10 19,10 31,78 31,78 0,280 0,230 0,218 0,453 0,452 311 елью изобретения является повьппение точ. ности и упрощение определения. Поставленная .цель достигается описываемым способом коли. чественного определения цистеина шерсти путем, последовательной обработки анализируемой про. бы серно 1 г кислотой, раствором 5,5.дитио бис.(2.нитробензойной кислоты) в присутствии бу фера - смеси зтилендиамина хлористоводород. ного, аммиака и соляной кислоты, взятых в мольном соотношении от 1,2:6,1:1 до 1,3:7,3:6,Отличительным признаком способа являетсяиспользование в качестве буфера смеси этилен. диамина хлористоводородного, аммиака и соляной кислоты, взятых в мольном соотношенииот 1,2.6,1:1 до 1,3:7,3:6.Навеску обезжиренной шерсти помещают в мерную колбу на 25 мл,добавляют 15 мл 1%. ной (по объему) серной кислоты и помещают в сушильный;шкаф для гидролиза на 25 ч при температуре 105 С. После окончания гидролиза перемешивают, охлаждают, доводят до метки 15%ной серной кислотой, приливают 0,8 мл 5,5.дитио.бис-(2.нитробензойной кислоты) и 5,5 мл буферного раствора, содержащего этилен дизмин хлористоводороцный, аммиак и соляную кислоту в мольном соотношении 1,2:7:3. Реак. ция происходит мгновенно, Колориметрирование проводят нз ФЭК 56-М с синим светофильтром Ме 4. Расчет проводят по формулеА 2где С - содержание ЗН групп цистеина,ммоль/г;А - показание калибровочного графика,ммоль;25 - объем мерной колбы, мл;Н в нзвеска сухой шерсти с учетом влаж.ности, г.Основная 0,5184 Параллельная 0,5177 11 Основная 0,3662 Параллельная 0,3510 В Основная 0,5058 Параллельная 0,5035В табл, 3 приведены результаты определенияонпентрзции цистеинз при различных соотноше 4Построение калибровочного графика, В 0 мерных колб объемом 25 мл приливают растворы, содержащие сульфпщрильные группы ЗН цистеина шерсти, 0,1; 0,2; 0,3 ммоль/мл и так дз.лее с последующим добавлением 5,5 дитио. бис.(2.нитробензойной кислоты) и буферной сме си этилендиамина хлористоводородного, аммиака и соляной кислоты и проводят фотоколориметрирование полученных окрашенных рзстворов, го Точность и чувствительность предлагаемого мето.да контролируется калибровочным графиком по стандартному раствору цистеина при разных кон центрациях ЗН.групп в растворе, что обеспечи.вает преимущество по точности определения.В табл. 1 приведены результаты определенияэкстинкции настоящим и известным способом. В табл, 2 приведены результаты количественго определения ЗН-групп цистеина шерсти. ях этилецдиамина хлористоводо 1 я 1 дного, аммиака и соляной кислоты,679853 Таблица 3 Заданная конщнт пределеиная концентрация цистеина, ммоль, при мольном соотноше.нии водного раствора аммиака, этилеидиамина хлористоводородного и соляной кислоты Формула изобретения рацияцистеина,ммоль 6,1:1,2:7;0:1,23,4 7,3:1,3; 6 0,112 0,200 0,280 0,355 0,450 0,115 0,200 0,282 0,380 0,452 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,110 0,190 0,275 0,370 0,450 Составитель Л, СоломенцеваРедактор В. Мннасбекова Техред М,Келемещ Корректор А. Гриценко Тираж 1090 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Заказ 47 8 0,Ъ Х Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Нас 1 оагиий способ не требует применения сложного лорогостсягцего оборудования, дефи. цитных и дорогих реактивов. К его достоинствам относятся также: быстрая растворимость всех реагентов, бесцветность буферных раство. ров, позволяющая проводить колориметрирова иие против дистиллированной воды, не прибегая к холостой пробе, освобождение от трудоемкой и плитсльной операции по перекристаллизации реактива Эллмана. Использование аммиачной бу 6ферной системы снижает затраты средств на оп.ределение сульфгидрильных групп в 15 раз. Способ количественного определения сульф.гидрильных групп цистеина шерсти путем после.довательной обработки анализируемой пробы сер1 О ной кислотой, раствором 5,5 дитио.бис-(2 нитробензойной кислоты) в присутствии буфера, включающего соляную кислоту, с последующим фо.токолориметрированием полученного при этомокрашенного соединения, отличающийся тем,5 по, с целью повышения точности и упрощенияопределения, в качестве буфера используютсмесь этилендиамина хлорнстоводородного, ам.миака и соляной кислоты, взятых в мольномсоотношении от 1,2:6,1:1 до 1,3:7,3:6.20 Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе1, Вогеу В. ЧЧ. "Тех. Веа. Х.",1956,26,р, Э 32336.2, МеснеЬесс Н.вта. Ов ЕгргоЬцпц епег2 пецеп МеФоде гцг Сузивпьеатптиц и ФоИадгоуаатеп, - "Е, цеа Техтим,", 1962, 70,Мф 4,242,