Способ получения фосфатов липидного ряда

(51)М, Кл,2 С 07 Г 9/09 Государствеииый комитет СССР ио дедам изобретений и открцти(72) Авторы ИЗОбр 8 ТЮИИЯ Н. Н. Карпышев, А. С. Вушнев, Е. Н. Звонковаи Р, П, Евстигнеева Московский ордена Трудового Красного Знамени институтР 1) ЗайймтЕЛ тонкой химической технологии им, М. В . Ломоносова(54) ШОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФАТОВ ЛИПИДНОГО РЯДА О К-О-Р - ОЯ ОЦ.Изобретение относится к области химии фосфорорганических соединений, а именно к новому способу получения Фосфатов липидного ряда общей формулы где в- остаток церамида или диглицерида, которые являются ключевыми соединениями в синтезе природных15 фосфорсодержащих липидов разнообразного строения: сфингомиелинов, Фосфатидилхолинов, Фосфатидилэтаноламинов.Известен способ получения Фосфатов липидного ряда путем фосфорили рования церамидов илн диглицеридов дихлорангидридом ф-трихлорэтилФосфорной кислоты в хлороформе при охлаждении с последующим гидролизом образующего диэфирохлорангидрида Фосфорной кислоты и обработкой ,полученного продукта цинком в среде уксусной кислоты,в. присутствии пири- дина при 67-70 С И ). ЭО Недостатком этого способа является сложность процесса, связанная снеобходимостью приготовления Фосфарилирующего агента, а также с необходимостью снятия защитной группывосстановлением цинком в уксуснойкислоте и в пиридине.Наиболее близким к изобретениюпо технической сущности и достигаемому результату является способ получейия; Фосфатов липидного ряда,заключающийся в том, что церамид подвергают взаимодействию с 5"б-кратным избытком хлорокиси фосФора вприсутствии пиридина при (-25)-(-30) Св течение 0,5-1 ч с прекращениемреакции гидролизом путем прибавления смеси пиридин-вода. Этот процесс.приводит к образованию целевыхпродуктов с выходом 52 (2);Недостатком описанного способаявляется образование в качестве побочного продукта реакции дицерамидофосфата, который необходимо отделятьпутем длительного колоночного хроматографирования, а также недостаточновысокий выход целевого продукта.Целью изобретения является увеличение выхода Фосфатов липидногоряда,554 кагеля л 40/100 ц в системе раствори 3 662Поставленная цель достигается описываемым способом получения фосфатовлипидного ряда, заключающимся в том,что церамид или диглицерид подвергают взаимодействию с диимидазолидохлорфосфатом при (-20) в (-30) С в хлороформе в присутствии пиридина с последующим гидролизом образующегося продукта разбавленной соляной кислотой.Отличительным признаком способаявляется, то, что в качестве хлорангидрида фосФорной кислоты используют )Одиимидазолидохлорфосфат и гидролизпродукта взаимодействия его.с церамидом или диглицеридом проводят разбавленной соляной кислотой..Описываемый способ позволяет полу чать целевые продукты с выходом69-75,Ввиду того, что большинство образующихся фосфатов являются неустойчивыми соединениями, их выделяют 20и охарактер.зовывают в виде диаммонийных солей.П р и м е р 1. Получение диаььюнийной соли 3-бензоил-стеароил-час-сфинганин-фосфата. ,25К раствору 1,3 мл (14 ммоль) хлор-окиси досфора в 4,0 мл пиридина при0 С прикапывают за 30 мин растворо2,3 г(28 ммоль) имидазола в 60 млхлороформа. Перемешивают при комнатной температуре 1 ч,затем при 20-ЗОСС.прибавляют за 30 ьщн раствор 1,5 г(2,2 ммоль) 3-бензоил-стеароил-час-сфинганина в 60 мл хлороформа иперемешивают при этой температурееще 30 мин, Добавляют 20 мл концентрированной соляной кислоты, интенсивно перемешивают 2 ч при комнатнойтемпературе, органический слой отделяют, промывают водой, упаривают.остаток растворяют в 5 мл эфира, к 40раствору прибавляют смесь 20 мл ацетона и 2 мл 25-ного раствора аммиака,выпавший осадок аммонийной соли 3-бенэоил-стеароил-час-сфинганин-фосфата (1 а) отделяют, сушат и перекристаллизовывают из смеси хлороФорм-метанол, 1:3. Выход 1,3 г (75)т. пл. 136-138 С; В -" 0,45 в тонкомслбе силикагеля Л 40/100 р в системе растворителей хлороФорм-метанол-25 ЮН 4 ОН, 10:б:0,5.Найдено,Ъ Р 3,80.с 4 Н 84 яро РВычислено,%: Р 3,94.П р и м е р 2. Получение диаммоний ной соли трео-час-0-бенэоил-И-стеароил-аминооктадекан,3-диол.-1-фосфата.Аммонийную сбль трео-час"0-бен"зоил-И-стеароил-аминооктадекан(71), т. пл. 71-74 С (из этилацетата) В 0,45 в тонком слое силителей хлороформ-метанолИН 4 ОН10;6:0,5.Найдено,Ъ: Р 3,83С 4, не,и,ОР,.Вычислено, Ъ: Р 3, 94,П р и м е р 3. Получение диаммонийной соли 3-бенэоил-карбобенэоксичас-сфинганин-фосфата.К досфорилирующему агенту, полученному из 0,52 мл хлорокиси Фосфораи 0,90 г имидазола в 25 мл хлороФорма и 1,8 мл пиридина, при (-25)фСприбавляют за 30 мин раствор 0,60 г3-бензоил-карбобенэокси-час-сфинганина в 25 мл хлороформа и перемешивают при этой температуре ещеЗО мин. Добавляют 12 мл концентрированной соляной кислоты, перемешивают 2 ч при комнатной температуре,органический слой отделяют, промывают водой, упаривают., Остаток наносят на колонку с силикагелемЛ 100/160 р (60 х 25 мм), Примесй вымывают системой растворителей хлороФорм-метанолИН 4 ОН, 15:5:1, а3-бензоил-карбобензокси-час-сфинганин-фосфат (1 в), элюируют системойрастворителей хлороформ-метанолЪНН 4 ОН, 5:5:1, Выход диаммонийнойсоли 9,51.г (69); т. пл. 114-118 С(иэ эФира-ацетона); Е = 045 в тонком слое силикагеля Л 40/100 р в системе растворителей хлороформ-метнолМН 40 Н, 10:60,5.Наидено,Ъ:. Р 4,55,СЭНИ э Об РВычислено,Ъ: Р 4,74,П р и м е р 4, Получение 1,2-ди"пальмитоиЛ-час-глицерин-З-фосфата.К Фосфорилирующему агенту, полученному иэ 0,43 мл хлорокиси Фосфора,0,76 г имидазола в 25 мл хлороформаи 1,6 мл пиридина, при (-25)С прибавляют за ЗО мин раствор 0,50 г1,2-дипальмитоил-час-Глицерина в 25 млхлороформа и перемешивают при этойтемпературе еще ЗО мин. Добавляют10 мл концентрированной соляной кислоты и интенсивно, перемешивают 2 чпри комнатной температуре, органический слой отделяют, промывают водой,упаривают,остаток кристаллизуютиз ацетона. Выход 1,2-дипальмитоил-час"(70) р т.пл, 61-62 фС, Ну = 0,30 втонком слое силикагеля Л 40/100 в,(йсистеме растворителей хлороформ"ме"танол" 25 Юн ОН, 10: б: 0,5,П р и м е р 5. Получение диаммонийной соли 3-бензоил-стеароил-час-сфингенин-фосфата.Аммонийную соль 3-бензоил-стеароил-час-сфингнин-фосфата (1 д) получают из 0,5 г 3-бензоил-стеароил-час-сфингенина аналогично соединению (1 а). Выход 0,41 г (60)у т. пл.123- 125 С (из хлороформа"ацетона);5 бб 255В0,45 в тонком слое силикагеляЛ 40/100,/ц в системе растворителейхлороформ-метанолИНЧОН, 10:б:0,5.Найдено,%; Р 3,88.С 4 нд ИЭО РЬцчислено,Ъ: Р 3,95.5Формула изобретения1. Способ получения Фосфатов липидного ряда общей формулы 10. ОИБ,-О-Р 1ОНгде Я - остаток церамида или диглицерида, взаимодействием церамида или диглицерида с хлорангидридом фосфорной кислоты )в хлороФорме в присутствии пиридина при (-20) -(-30)оС с последующим гидролизом продукта взаимодействия, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода целевых продуктов, в качестве хлорангидрида Фосфорной кислоты используют диимидазолидохлорфосфат и гидролиз проводят разбавленной соляной кислотой.Источни.и информации, принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР М 598905, кл. С 07 Г 9/09, 1976.2.ЕпебДпееча Й.Р, ЕчоМоча ЕМ. 3 пчевОфабоп опЧИе вцп 1 Неюв о". врйпфорбоьръобрдб "(а%че(а Лобаева звИе боеопхе Спасове ч, Ь 1 П Вер 1 ЕаЬгЕ, 1976.Составитель М. КрасновскаяРе акто Т. евятко Тех е З.Фанта Корректор О.КовинскаяЗаказ 2 б 39/29 Тираж 512 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва ЖРа шская наб. . 4 5 Филиал ППП фПатент, г. Ужгород, ул. Проектная, .4