Способ получения кислого альфа-1-гликопротеина

Изобретение относится к медицине, кфракционированию сыворотки крови человека.Целью изобретения является повышение выхода и специфической активности целевого продукт"а","а;также упрощениеспособа.Способ осуществляют следующим образом, Балластный осздок гомогенизируютв дистиллированной,врде в течение 1 ч. Затем растворяют его в гидрооксиде натрия иперекачивают в реактор. Раствор охлаждают до температуры 3-5 ОС, доводят рН до 4,7и вводят в него этанол со скоростью 0,5л/мин, 15Вновь коррегируют рН до 4,7, перемешивают в течение 1 ч и центрифугируют притемпературе 3-15 С, Осадок отделяют, ацентрифугат концентрируют на ультрафильтрационной установке. состоящей иэ двух 20аппаратов (АР). Концентрат пропускаютчерез ДЭАЭ-целлюлозу, отмывают буфером. затем 0,15 М МаС и элюат собирают.Затем концентрируют на аппарате разделительном АР,2. Продукт пропускают 25через КМ-целлюлозу и концентрируют нааппарате АР.2, проводят диафильтрацию,используя дистиллированную воду и получают чистый целевой продукт.П р и м е р. 6 кг осадка заливают 30 л 30дистиллированной воды и гомогенизируют40 мин. Вводят 2 н.раствор йаОН до рН 8,7в количестве 2,8 л. Раствор загружают вреактор и охлаждают до 3 С, устанавливаютрН 4,5 путем введения 4,2 л 1 н.раствора 35НС.Затем вводят 96 этанола до концентрации 20, перемешивают в течение 1 ч иотделяют осадок центрифугированием притемпературе 3 С. Осадок в количестве 5,6 кг 40отбрасывают, а центрифугат в объеме 47 лконцентрируют на ультрафильтрационнойустановке, состоящей из двух параллельносоединенных аппаратов разделительныхАРиз полых волокон ВПУ(г,Кириши), 45манометра и перистальтического насосаНШРм,Площадь фильтрации составляет 4 м,при давлении 0,8-1,0 атм центрифугат концентрируют до 5 л в течение 1,5 ч. Далее 50концентрат подвергают диафильтрации,для чего продолжают процесс ультрафильтрации при непрерывном поступлении0,025 М ацетатного буфера с рН 3,7 (буфер ЬЬ1) из бутыли, расположенной на высоте 0,5-1 55м от бутыли с продуктом. Расход буфера составляет 25 л, процесс диафильтрации занимает 0,8-1,0 ч,Концентрат в буфере М 1 в объеме 5 л пропускают через колонку с волокнистой ДЭАЭ-целлюлозой (г,Олайне), Регистрируют оптическую плотность элюата при длине волны 280 нм, Белки, несвязывающиеся с целлюлозой, отбрасывают и промывают колонку буфером М 1 до экстинции 0,01.Затем целлюлозу промывают 0,15 М йаС, приготовленным на буфере М 1, и собирают 4 л элюата, который содержит 75- 80 кислого альфа - 1-гликопротеида (КГП).Элюат подвергают концентрированию до 1 л и диафильтрации на аппарате разделительном АР,2, используя 6 л 0,01 М ацетатного буфера с рН 3,9 (буфер М 2).КГП в буфере М 2 пропускают через волокнистую КМ-целлюлозу (г.Олайне) и собирают 1,5 л чистого КГП, несвязывающегося с КМ-целлюлозой в данных условиях,Чистый КГП концентрируют до 0,5 л и диафильтруют, используя дистиллированную воду в объеме 3 л, Получают целевой продукт (0,5 л КГП с концентрацией 21 мг), который подвергают стериализующей фильтрации, разливают в ампулы, высушивают из замороженного состояния и герметизируют.Преимущества предлагаемого способа состоят в следующем, По сравнению с прототипом длительность получения целевого продукта сокращается на две стадии, По прототипу длительность процесса составляет 4 суток, а по заявляемому методу только 1 сутки.Выход целевого продукта увеличивается в 3,7 раза. Если по прототипу КГП от его содержания в исходной плазме составляет 10, то по заявляемому методу выход составляет 37, или 0,3 г с 1 л исходной плазмы.Биологическая активность целевого продукта, определенного по степени выживаемости изолированного кожного лоскута у мышей, увеличивалась на 30. В тесте летальной синегнойной инфекции выживаемость животных, обработанных препаратом, полученным по заявляемому способу, возросла на 25, а выживаемость животных на седьмые сутки составила 85 против 60 в группе мышей, обработанных препаратом по прототипу. Общая продолжительность жизни животных увеличилась в 1,5 раза и составила 7,2 суток против 5,5 суток по прототипу,1662039 Составитель В.ЛитовченкоТехред М.Моргентал Корректор О, Кравцова Редактор Н,Тимонина Эаказ 1536 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 101Формула изобретения СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОГО АЛЬФА-ГЛИКОПРОТЕИНА путем растворения, осаждения зтанолом, центрифугирования, концентрирования надосадоч ной жидкости с последующим хроматографическим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и специфической активности целевого продукта, а также упрощения способа, осаждение зтанолом производят при температуре 3 5 - 15 С, а после центрифугирования надосадочную жидкость одновременно концентрируют и подвергают диафильтрации на полых волокнах.