Способ получения человеческого гамма-интерферона

. 37,/ ЕЛОВЕЧЕСКО Г 0.11.82 ся к медициеской промыш учению у.-.инния по вы одукта путем лейкоцитов 3сети Дьяр (Ш 5 ош Тот, Ишти Валерка Э е колич ес 1-12 ч ене-. рифугируют-0,89 Х-нымаммония.в питательной стый кальцийу я калий, сульхлористый ый натрий, о фосфата нат 7 35 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) . 1 шшцпо 1, 1980,ЧЬ.го 1 ощ, 1961, 14,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Ч ГАММА-ИНТЕРФЕР ОНА (57) Изобретение относит .не, точнее к фармацевтич ленности, а именно к пол терферона. Цель изобрете шение выхода целевого пр дополнительной обработки И- или р-интерфероном в 500-5000 Е/мп в течение тем обрабатывают лейкоци тическим агентом и цент Удаляют эритроциты 0,83 водным р-ром хлористого Суспендируют лейкоциты среде, содержащей хлори нитрат железа, хлористь фат магния, гептагидрат натрий, кислый углекисл дигидрат однозамещенног рия и Глюкозуе265 0,1 400 40 Изобретение относится к областимедицины, в частности к фармацевтической промышленности гамма-интерферона. 5Целью изобретения является повыение выхода целевого продукта зачет дополнительной обработки лейко;тов альфа- или бета-интерфероном,Способ осуществляется следуюцим 0бразомеП р и м е р 1. Кровь, полученую в растворе ЛКД (водный раствор,одержащий лимонную кислоту и декстозу),хранят в течение 3 ч при темературе 4 С. Фракцию лейкоцитов отоеляют центрифугированием и оставлят стоять в течение ночи при темпеоатуре 4 С, Затем одну съемную частьолученного таким образом концентраа лейкоцитов смешивают с 5 мас.ч.,897.-ного водного раствора хлоритого аммония при температуре 4 Свыдерживают суспензию до полногоастворения эритроцитов (обычно этотроцесс заканчивается через 5-10 мин ),осле чего лейкоциты отделяют центриугированием и, суспендируют в питаельной среде следующего состава,г/л: 30Хлористый кальцийНитрат железаХлористый калийСульфат магния,гептагидрат 20035Хлористый натрий 6400Кислый углекислыйнатрий 2750Дигидрат однозамещенного фосфатанатрия 140Глюкоз.а 4500После этого вновь проводят удаление эритроцитов, используя при этом10 об ч, 0,83%-ного водного растворахлористого аммония. Лейкоциты суспенДируют в питательном растворе, доводяконцентрацию клеток в нем до 10 кле 7ок/ип. В питательный раствор, кромеказанных ингредиентов, добавляют;1 мг/мп агамной сыворотки человека и:5 мкг/мл неомицина. Полученные каетси подвергают обработке в течениеч при температуре 37 С и постоян-.ном перемешивании альфа-интерферономколичестве 1500 1 Е, обработаннымпредварительно при рН 2,0 для удаления иэ него вируса Яепйа. Затемльфа-интерферон удаляют путем двухкратного промывания клеток раствором Хэнкса и добавляют к ним конкавалин в количестве 15 мкг/мп, выдерживая их при температуре 37 ОС в течение 12 ч, После этого клетки отделяют от надосадочного слоя центрифугированием. Выхрд гамма-интерферона в неочищенном надосадочном слое равен 1666 1 Е/ьш.Для сравнения процесс проводили таким же образом, но перед добавлением индуктора лейкоциты не подвергали предварительной обработке альфаинтерфероном. В этом случае выход гамма-интерферона равен 216 1 Е/мл,П р и м е р 2, Процесс проводят по примеру 1 с той лишь разницей, что в качестве питательного раствора используют среду МЕМ типа Назяоч (Мго 1 ор, 14, 359, 1961), при этом выход гамма-интерферона в неочищенном виде составляет 1600 1 Е/мп.Описанный процесс повторяют за исключением стадии обработки альфаинтерфероном. Содержание активного. вещества в неочищенном интерфероне, полученном таким образом, равно лишь 206 1 Е/мп.П р и м е р 3, Процесс. проводят по примеру 1 с той разницей, что используемый для дополнительной обработки альфа-интерферон не удаляют. Обработанные альфа-интерфероном клетки выдерживают в присутствии конка- валина А (концентрация 15 мкг/мп)опри 37 С в течение 12 ч при постоянном перемешивании, Содержание интер" ферона в надосадочной жидкости составляет 1733 1 Е/кп.Полученный в результате продукт, содержащий альфа- и гамма-интерферон, разделяют на отдельные компоненты с помощью хроматографии. Для этого сырой продукт вводят в колонку, заполненную насадкой из СРС-стекла. Аньфаинтерферон и примеси проходят через колонку, а гамма-интерферон задерживается. Элюирование гамма-интерферона осуществляют с помощью водного раствора, содержащего 20 об,ч. этиленгликоля, 150 ммоль хлористого натрия и 20 ммоль фосфатного буфера.П р и м е р 4. Процесс проводят аналогично примеру 1 с той разницей, что для предварительной обработки вместо апьфа-интерферона используют 2500 1 Е/ип бега-интерферона, Содер" жанне гамма-интерферона в пЬлучаемом14056 Преимущество предлагаемого способа заключается в том, что благодаря предварительной обработке альфа- . или бета-интерфероном, выход гаммаинтерферона возрастает в 5-10 раз, По своим физико-химическим. свойствам (чувствительности при рН 2,0; стабильности, определенной при 56 и.37 С) и биологической активности (антивирусное.и противоклеточное действие), полученный предлагаемым способом гамма-интерферон полностью эквивалентен гамма-интерферону, полученному известным способом. формула изобретения Способ получения человеческого гамма-интерферона путем выделения из крови фракции лейкоцитов, удаления эритроцитов, суспендирования лейкоцитов в питательной среде, с последующей обработкой их митогенетическим агентом и отделением клеток центрифугированием, о.т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, удаление эритроцитов проводят 0,83 - 0,893-ным водным раствором хлористого аммония, а перед обработкой митогенетическим агентом лейкоциты обрабатывают альфа- или бета-интерфероном в количестве 500-5000 1 Е/мп в течение 1-12 ч. Составитель Л. Шилина Редактор Л. Гратилло Техред Л.Сердюкова Корректор Г. РешетникЗаказ 3111/57 Тираж 655 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-пблиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 при этом сыром продукте составляет 1866 1 Е/мл.Повторяют описанный процесс за исключейием стадии предварительной обработки бета-интерфероном. Содержание активного вещества в неочищенном интерфероне, полученном таким образом, составляет 226 1 Е/мл.П р и м е р 5, Получение гамма интерферона проводят по примеру 1 с той лишь разницей, что предварительную обработку проводят альфа-интерфероном в концентрации 500 1 Е/мп, при этом гамма-интерферона получено в 15 количестве 700 1 Е/мл.П р и м е р 6, Процесс проводят по примеру 1, только для предварительной обработки используют бета-интерферон в концентрации 500 1 Е/мл, при 20 этом выход гамма-интерферона составляет 1000 1 Е/мл.П р и м е р 7Процесс проводят по примеру 1 с той лишь разницей, что для обработки лейкоцитов исполь зуют альфа-интерферон в концентрации 5000 1 Е/мл, при этом выход гамма-интерферона составляет 300 1 Е/мл.П р и м е р 8. Получение гаммаинтерферона проводят по примеру 1, 30 при этом обработку лейкоцитов проводят бета-интерфероном в;.концентрации 5000 1 Е/мл. Выход гамма-интерферона в данном случае составляет 1000 1 Е/мл,При проведении обработки лейкоцитов альфа- или бета-интерферонов в течение 30 мин, а не 4 ч как в примере 1, производство гамма-интерферона снижается при этом от 1500 до 914250 1 Е/мл, а проведение ее в течение 15 ч не превышает выхода гамма-интерферона, равного 1550 1 Е/мл.