Способ определения нарушения оплодотворяющей способности эякулята

11499Изобретение относится к медицинеи может быть использовано при лабораторной диагностике мужского бесплодия и последующей патогенетичес-кой терапии,5Известен способ определения нарушения оплодотворяющей способностиэякулята путем определения ферментатив-ой активности эякулята 1.Недостатком известного способаявляется его низкая точность,Цель изобретения - повышениеточности способа,Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу определения нарушения оплодотворяющей способности эякулята, включающему определение Ферментативнон активностизякулята, в пробе определяют ак 1 ивность креатинфосфокиназы, гидроок.-.и- -,;.бутиратдегидрогеназы, лактатдегидрогеназы, рассчитывают соотношениегидрооксибутиратдегидрогеназы клактатдегидрогеназе и при сниженииэтого соотношения менее 1,0 и одно- двременном повьилении активности креатинфосфокнназы относительно нормыопределяют нарушение оплодотворяющей способности эякулята.Способ осуществляют следующим уооразомо В пробе эякулята определяют активность Ферментов: креатинфосфокиназы(ГБДГ) и лактатдегидрогеназы (ГЩГ), 35Определение креатинфосфокинаэыгидрооксибутиратдегидрогеназы, лактадегидрогеназы осуществляют спектрофотометрически по изменению оптическойплотности субстрата при 340 нм в течение 1 мин при 37 С для ГБДГ.и ЛДГи при 25 фС для КФК,Для определения креатинфосфокиназы реакционная смесь содержит 20 мклисследуемого образца эякулята, кото- -5рый предварительно разводят фнзиологическим раствором 1:20 (рабочийраствор), н .525 мкл субстрата, содержащего 100 ммоль 3-этаноламиновогобуФера, рН 7,0, 35 ммоль/л креатинФосфата, 20:маколь/л глюкозы,9 ммоль/г глютатиона, ,О ммольл уксуснокислого магния, 1 ммоль/л АДФ,,0,6 ммоль/л НАДФ, 10 ммоль/л АИФ,192 кЕ/л 9 мин глюкозо,6 фосфатде 55гндрогенаэы 9 1,2 кЕ/л мин гексокинзэы,Полученную смесь перемевявают н инкубируют при 25 С в тенение 5 мин,40 1 Затем при 340 нм измеряют изменениеоптической плотности в 1,0 см кюве"те через 1,0 мин, в течение 3 мин.Активность фермента рассчитывают поФормуле: дА/мин х 3524 Е/л и выражаютв международных единицах Е/л,Для определения гидрооксибутиратдегидрогеназы реакционная смесь содержит 20 мкл раствора эякулята, развепенного 1:20 физиологическим раствором, и 630 мкл сусбстрата, содержащего 3,0 ммоль/л натрневой солис-кетобутирата 9 О, 18 ммоль/л НАД Н,и 50 ммоль/л фосфатного буфера, рН7,5, Полученную смесь перемешивают,инкубируют при 37 С в течение 1,0 мин,а затем при 340 нм измеряют изменение оптической плотности через1,0 мин в 1,0 см кювете в течение3 мин, Активность фермента рассчитывают по формулед А/мин х 5000 Е/ли выражают в международных единицахЕ/л.Для определения лактатдегидрогеназы реакционная смесь содержит 20 мклэякулята, разведенного 1:20 физиологическим раствором, и 630 мкл субстрата, содержащего 0,6 ммоль пирувата,О, 18 ммоль/л НАД Н50 ммоль/л фосфатного буфера, рН 7,5, Полученнуюсмесь перемешивают, инкубируют при37"С в течение .1,0 мин и измеряютизменение оптической плотности в1,0 см кювете в течение 3 минут,Активность рассчитывают по формуле:АА/минн 492 Е/л и выражают в междунайодных единицах Е/лРассчитывают оношение величиныактивности ГБДГ к ЛДГ и при повышении активности КФК относительно нормы (более 950 Е/л) и отношенииГБДГ/ЛДГ менее 1,0 диагностируют. П р я и е р 1, Больной Б обсле",овлн по повод; бесплодного брака,л и. актически здоров вторич ные половые признаки выражены. Исследование =якулята показало нормальное содержание сперматозоидов, их. жизнеспособность, подвижность 8939 лейкоциты единичные, слизи нет,Проба Курпрока-Миллера положительная, проба Симса-Гунера положительная, микроагглютинация по Баскинуотрицательная. Данные предлагаемогоспособа: креатинфосфокиназа 1230 Е/л,ГБДГ/ЛДГ 0,89. Заключение: снижение оплодотворяющей способностиэякулята. Проведенное лечение поз1149940 Составитель Н. ВалееваРедактор А, Ренин Техред Т.Дубинчак Корректор Е, Сирохман Заказ 1986/3 Тйраж 722 Подписное ВНЙИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 45Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3волило нормализовать КФК, ГБДГ, ЛДГ, Через 2 месяца после лечения у супруги наступила беременность. Л р и м е р 2, Больной К обследован по поводу бесплодного брака, 27 лет, практически здоров.Первичные и вторичные половые признаки выражены. Исследование эякулята по прототипу выявило нормальную оплодотворяющую способность,Определение .КФК, ГБДГ, ЛДГ показало, что активность КФК составляет949 Е/л, а соотношение ГБДГ к ЛДГравно 1, 1, что указывало на отсутствие изменения оплодотворяющейспособности эякулята. РекомендованоВкомплексное обследование и лечениесупруги. В последующем у нее наступила беременность,4П р и м е р 3. Больной П., обследован по поводу бесплодного брака, 25 лет. Практически здоров,Первичнйе и вторичные половые при 5знаки выражены. Исследование эякулята по прототипу выявило нормальнуюоплодотворяющую способность. Определение КФК, ГБДГ, ЛДГ показало,что активность КФК была 951 Е/л,а соотношение ГБДГ к ЛДГ равно0,99, что указывало на снижениеоплодотворяющей способности зякулята.Рекомендовано комплексное лечение,после проведения которого у супругинаступила беременность,Использование предлагаемогоспособа в медицинской практике повышает точность диагностики до77,7 Х. Кроме того, способ прост висполнении, может быть осуществленв лабораторных условиях,