Способ определения клеток крови

(72 и Я (71 3 ДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК опускание света ние интенсивносчерез клетку, с я тем, что,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ АВТОРСКОМУ СВИД) Ордена Ленина институт проблемуправления и Тбилисский государственный медицинский институт(5 Ь) 1. Рабинович Ф.М. Анализ лейкоцитометрической кривой с помощьюкондуктометрических счетчиков частиц, - В сб.: Третье совещание попроблемам автоматизации анализа изображений микроструктур, Тезисы докладов. Пущино, 1971, с. 73-74,2. Егзегг У.С. ес а 1. 1 пйегпа 1са 1 гЪгагоп со аЪзо 1 цге ча 1 пег хпЕ 1 оеСЬгоцзЪ зе апа 1 уздз. - Кечгешой Бдепсхй пзггщпепсз. 1978, ч. 49,12, р. 1617-1621 (прототип).(54)(57) СПОСОБ ОПРЕКРОВИ, включающий прчерез клетки, измерети света, прошедшегоо т л и ч а ю щ и й с целью повышения точности дифференцирования крови, измеряют минимальную и максимальную интенсивности света и выделяют зону оптической плотности, составляющую 1/5 часть от разности максимального и минимального значений интенсивности и расположенную в минимальной области значений интенсивности света, далее определяют в данной зоне площадь клетки (Ба) и отношение этой площади к площади прямоугольника (Бп), образованного касательными к ядру лейкоцита,и при величине Ба, равной 30 - 300 мкм, и величине Бп, боль- фе шей или равной 0,73, клетку классифицируют как базофил, при Ба, равной 30 - 300 мкм, и Бп, меньшей 0,7 как моноцит, при Ба; большей 10 и меньшей 30 мкм и при Яп, большей или равной 0,7 - как лимфоцит, при Яа, большей 10 и меньшей 30 мкм и при Бп большей или равной 0,5 - как эозинофил, при Ба большей 10 иа меньшей 30 мкм и при Бп меньшей 0,5 - как нейтрофил,11499Изобретение относится к медицинеи биологии, в частности к методаманализа биологических микроструктур(цитологических препаратов),Известен способ определения лейкоцитов, согласно которому выделяютлейкоциты и регистрируют кривую ихраспределения по объемам с помощьюкондуктометрического счетчика частицпутем всасывания разведенной кровичерез узкое отверстие, Для классификации и подсчета клеток крови применяют метод электронной сепарации лейкоцитов. Если средний объем клетки7. порядка 280 мкз, то клетку классифицируют как лимфоцит, если Ч порядка 420 мкэ, то клетку относят кполиморфноядерным гранулоцитам (нейтрофилы,эозинофилы, баэофилы), еслиЧ порядка 550 мк, то клетку классифицируют как моноцит 13,Недостатком известного способаявляется то, что он не позволяетдифференцировать лейкоциты на известные классы и составлять лейкоцитарную формулу крови, а также не позволяет классифицировать нейтрофилы,эозинофилЫ, баэофилы и моноциты, которые не образуют отдельную вершинуна лейкоцитометрической кривой рас 30пределения объемов клеток,.Известен способ определенияклетоккрови, согласно которому клетки крови разделяют в пространстве, прогпускают через них световойоток,измеряют интенсивность прошедшегочерез клетку светового потока, определяют по измеренной общей интенсивности светового потока размеры длинных осей клеток и классифицируют их40на две группы - эритроциты и леикоциты 2,Однако известный способ не позволяет точно осуществлять дифференцировку лейкоцитов.Цель изобретения - повышение точ 45ности дифференцирования крови,1Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу определенияклеток крови, включающему пропускание света через клетки, измерение интенсивности света, прошедшего черезклетку, измеряют минимальную и мак"симальную интенсивности света и выделяют зону оптической плотности, 55составляющую 1/5 часть от разностимаксимального и минимального значений интенсивности и расположенную в минимальной области значений интенсивности света, далее определяют в данной зоне площадь клетки (Ба) и отношение этой площади к площади прямоугольника (Бп), образованного касательными к ядру лейкоцита, и при величине Ба, равной 30 - 300 мкм 2, и величине Бп, большей или равной 0,73,клетку классифицируют как базофил, при Ба, равной 30 - 300 мкм, и Бп, меньшей 0,73 - как моноцит, при Ба, большей 1 О и меньшей 30 мкм, и при Бп, большей или равной 0,7 как лимфоцит, при Ба, большей 10 и меньшей 30 мкм, и Бп, большей или равной 0,5 - как эозинофил, при Ба, большей 10 и меньшей 30 мкм 2, и при Бп, меньшей 0,5, - как нейтрофил,Способ осуществляется следующим образом.Заранее приготовленный мазок крови, окрашенный по методу Романовского, помещают на предметный столик устройства, которое содержит телевизионный микроскоп, представляющий собой сочетание светового биологического микроскопа и телевизионного датчика. Световой микроскоп (например, МБИили МБИ) снабжен специальным автоматическим перемещаемым в двух взаимноперпендикулярных направлениях предметным столиком, на котором помещается исследуемый биологический препарат (мазок крови), В качестве датчика может быть использована видиконная камера телевизионной установки ПТУ. Устройство содержит также блок обработки видеосигнала, специализированное вычислительное устройство и логический блок.Изображение клетки с помощью телевизионного микроскопа вводится в.устройство обработки видеосигнала, в котором выделяется амплитудный диапазон сигналов, соответствующий уровням максимальной и минимальной интенсивности света, прошедшего через клетку, и зоне оптической плотности, составляющей 1/5 часть от разности максимального и минимального значений интенсивности светаВ зоне оптической плотности определяют площадь клетки (Ба) и отношение этой площади к площади прямо3 1угольника, образованного касательными к ядру лейкоцита (Яп).В специализированном вычислительном устройстве происходит накопление данных, сопоставление значенийизмеренных параметров Яа и Яп сэталонными значениями и отнесение(классификация) данной клетки к одному из типов. При величине Яа, равной 30 - 300 мкмжд, и Яп, большейили равной 0,73, клетку классифицируют как баэофил, при Яа, равной30 - 300 мкм, и Яп, меньшей 0,73,как моноцит, при Яа, большей 10 именьшей 30 мкм, и Яп, большей илиравной 0,7, - как лимфоцит, при Яа,большей 10 и меньшей 30 мкм, и Яп,большей или равной 0,5 - как эозинофил, при Яа, большей 10 и меньшей,30 мкм, и Яп, меньшей 0,5, - какнейтрофил,Зона интенсивности светового потка, соответствующая -оптической плотности ядра лейкоцита, выделяется вданной зоне как связная область наизображении,Данная зона была выделена на основании исследования большого статистического материала, что позволилосделать вывод о том, что разделениелейкоцитов на все 5 видов возможноименно в этой зоне оптической плотности.Расширение или сужение этойзоны, или ее смещение приводит кискажениям, в результате чего однозначное определение вида лейкоцитастановится невозможным. Например,если расширить зону оптической плотности, в которой проводится измерение, то в измеряемую площадь могутвойти значения некоторых эритроцитоврасположенных рядом с лейкоцитами и,в таком случае, лимфоцит может бытьклассифицирован как базофил или моноцит. Заметим, что для базофила вуказанной зоне оптической плотностиневозможно выделить ядро клетки отцитоплазмы и вся клетка воспринимается как связная область.Полное разделение лейкоцитов (ихклассификация) возможно при одновременной оценке клеки по указаннымдвум признакам в интервалах значений оптической плотности, полученныхисследованием статистических данных,П р и м е р 1. Значение измеренной площади в выделенной зоне оптической плотности равно 30 мкма149941 4 5 1 О 15 20 253035 4045 50 55 относительной площади - 0,73. Это означает, что (в соответствии с предлагаемым способом) клетку следует классифицировать как базофил,П р и м е р 2. Значение измеренной площади равно 300 мкм, а относительной площади - 0,73. Клеткаявляется базофилом.П р и м е.р 3Значение площадиравно 30 мкм, а относительной площади - 0,72. Клетка является моноцитом.П р и м е р 4. Значение площадиравно 300 мкм, а относительной площади - 0,72, Клетка классифицируетсякак моноцит.П р и м е р 5. Значение измеренной площади равно 11 мам, относительной площади - 0,7. Клетка классифицируется как лимфоцит,П р и м е р 6, Значение площадиравно 29 мкм, а относительной площади - 0,7, Клетка является лимфоцитом,П р и м е р 7. Значение площадиравно 11 мкм, а относительной площади - 0,5, Клетка классифицируетсякак эозинофил.П р и м е р 8, Значение площадиравно 29 мкм, а относительной площади - 0,5, Клетка является эозинофилом.П р и м е р 9. Значение площадиравно 11,мкм, а относительной площади - 0,4. Клетка классифицируетсякак нейтрофил.П р и м е р 10, Значение измеренной площади в выделенной зонеравно 29 мкм, а относительной площади - 0,4. Клетка классифицируетсякак нейтрофил,Результаты экспериментов по классификации клеток предлагаемымспособом проверялись квалифицированными специалистами, Вероятность правильной классификации при этом составила 96-97 . Время обработки одного мазка на ЭВМ с телевводом составляет 1-2 мин.Таким образом, предлагаемый способ позволяет осуществлять дифференцирование лейкоцита на все пять разновидностей. Кроме того; по сравнению с "ручной" обработкой повышаются точность и скорость классификации и составления лейкоцитарной формулы крови. Так погрешность дифференцирования лейкоцитов при лабораторномЗаказ 1986/3 Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 анализе, как известно, составляет не менее 6-87., и вызвана она в том числе и субъективными факторами, Погрешность классификации по пред-. лагаемому способу, как было показано выше, не превышает 3-4 Х, т.е, точность повышается не менее чемв два раза. При реализации предлагаемого способа в автоматическом режиме вышеописанным устройством быстродействие (скорость классификации клеток) повышается более чем на порядок по сравнению с ручной" обработкой. Использование предлагаемого способа позволит освободить медицинскихработников от монотонного и утомительного труда, повысить производи тельность труда, исключить субъективные факторы при определении лейко.цитарной формулы крови, проводитьпериодические массовые обследованиянаселения, способствовать . ранней 10 диагностике,предупреждению заболеваний и реализации принятой недавно в стране программы АСПОН (автоматизированные системы профилактического осмотра населения),