Способ получения термостабильных коли-фагов

Союз Советски нСоциалистическиеРеспублик Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 905282(5 )М. Кл. С 12 Ч 7/00 с присоединением заявки РЙ(23) П риоритет Ъвулзрстеенай кве 1 нтет СССРав делен нзвбретеннй к втнрытнй Опубликовано 15,02,82 Бюллетень6 Дата опубликования описания 18.02.82(72) Авторы изобретения Г. Н. Никовская, Л, И. Глоба и М, Н. Ротмист овИнститут кэллоидной химии и химии воды АН Ькраинскэй ССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕ 11 ИЯ ТЕРМОСТАБИЛЬНЫХ КОЛ И-ФАГОВИзобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии я молекулярной биологии.Известен способ получения термостабильцых коли-фагов и культуры бактерий в условиях непрерывнэй аэрации с последуюшим отставанием и отделением фаголизата 1Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода коли-фагов Т 2 или Мй 2, так как концентрации колифагэв в культурах, полученных вырашиванием их смесей с бактериями, недостаточно высоки. Бель изобретения - повышение выхода коли-фагов Т 2 или ЧЯ.Эта цель достигается тем, что в способе получения термостабильных колифагов и культуры бактерий в условиях непрерывной аэрации с последуюшим отставанием и отделением фаголиздта, смесь коли-фагов и культуры бактерий культивируют при 15 - 24 С в течениео 20 - 90 мин, д затем прц 37+ 0,1 С.в течение 2,5 - 3,7 ч.Способ эсушествляют следуюшим образомКультивирэвание смеси коли-фагэв и 5культуры бактерий производят в две стадии. Вначале смесь выдерживают при15 - 24 С в течение 20 - 90 мин иоодновременной аэрации, д затем повытиают 1 Отемпера туру до 3 7 ф О, 1 э С, продол жаяаэрацпю. Выдерживают при этой температуре в течение 2,5 -3,7 ч. Полученный фагэлизат отстаивают в течение 12 чпри комнатной температуре и определяют 15концентрацию кэли-фагов.П р и м е р 1. 100 мл культурыбактерии Е. СОЕ 1 В выр:ццивают и течение 3 ч при аэрации на качалке90туру бактерий зардждот фдгом с мнокствепностыо 1: 1, Смесь коли-фдг Т 2. бактерии вырднплвдют при 22 ОС и аэра иии на качалке (128 кдч./мин) в течеГи 1 ч, а затем повышают температуру до 37 С и продолжают дэрдцию в течение 3 ч, Полученный фдголиздт Отстаивают в течение 12 ч при комнатной температуре и определяют методом агдровых слоев по Грациа концентрацию коли-фага Т 2, равную 2 10БОЕ/мл.П р и м е р 2. 100 мл культуры бактерии Е, ОЙ К = 12 выращивают при 37 С н аэрации нр канапке (128 кдч./мин) в течение 3 ч до концентрации 10 кле 8 ток/мл нд среде состава, г/л: Ма) 11 Р 04 7,00; КЙ РО 4 3,00; к 10 И 0,50; ГлюкОза 4,00; МЙ М 1,00;, ЧАВО, 780 0,03; СССР 0,02; тидмин бромпд 0,09, рН доводят до 7,4 пр помощи 1 н.раствора МаОЧ . Получспную культуру бактерий заракают фдгом МВ 1 с множественностью 10: 1. Смесь коли-фаг - бактерии выращивают прп 22 ОС и аэрации нд качалке (128 кач./ ,мпн) в течение 1 ч, а затем повышают температуру до 37 С и продолжают дэрдщпо в течение 3 ч. Фдголизат отстаивают в течение 12 ч при комнатной температуре и определя 1 от методом агдровых 5282 4слоев по Грацид концентрацию коли Фдгд45, равную 1,8 101 БОЕ/мл,Таким образом, по предложенномуспособу выход коли-фага Т 2 2,2 10БЬЕ/л, ю юесн у 4,2 10 БОЕ/мпо предложенному способу выход колифага МЬ 1,810 БОЕ/мл, по известному 3,6.10 БОЕ/мл. Следова 10.тельно, по предложенному способу выходколи-фага можно получить в 5 раз больший, чем по известному.Формула изобретения Способ получения термостабильных коли-фагов путем культивирования смеси коли-фагов и культуры бактерий в условиях непрерывной аэрации с последующим отстаиванием и отделением фаголизата, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода колифагов Т 2 или МЪ, смесь коли-фагов и культуры бактерий культивируют при 15 - 24 ОС в течение 20 - 90 мин, а затем при 37+ 0,1 ОС в течение 2,5- 3,7 ч.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Борисов Л. Б, Энтеропатогенныекишечные палочки и их фаги. Л.,фМедицина", 1976, с, 160 - 163.С ос та втел10, А лмаз ОвГеддктоР И. Ки Улинец ТехРед С МиГУнова КОРРе ОР Г. НазароваЗаказ 2 92/3 8 Тирак 504 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская набд. 4/5Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4