Способ выращивания культуры ткани высших грибов

ОЙИСАНИВ ИЗОВРЕТЕНИЯ Союз СоветсиикСоцналнстнчесМнаРеспублни ои 86460 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 29,08.79 (21) 2812439/28 - 13 с присоединением заиякн М -Гввударатевеъа квнитет ВСВР ав двлам изобретений . в втврцтнй(088,8) Дата опубликования описании 07,09,81АНИЯ КУЛЬТУРЫ ТКАНИ ВЬКШИХ ГРИБО 54) СПОСОБ ВЫРАЩИ 12Изобретение относится к области мнкуотй 461 то- Цель. изобретения. - удешевление спосооа,гической промышленности, а именно к полую- . Это достигается тем, что в способе выращиванию биомассы высших грибов, ния культуры ткани высших грибов на жидкойИзвестен способ выращивания кудьтуры тка. питательной среде, содержащей источники угле.ни высших грибов на жидкой иитательВЙсре- рода,.азота, минеральные соли и нуклеотидсоде, содержащей. источники углерода, азота, не-держащие соединения, в качестве стимулятора . обходимые.минеральные соли и стимуяятрр. роста,. предусмотрено использование:из нуклеороста 111тндсодержащнх соединений экстракта, включаюВ качестве. стимулятора роста иааользум: .: щего олнгоиуклеотнды и иуклеоэндмонофосфадрожжевой экстракт..:ты, полученного при удалении нуклеиновыхЮНедостатками этого способа вцратнивання . кислот из биомассы . высших грибов, в коли.культуры ткани высших грибов являются срав-: часике 0,05. - 0,2. вес.%.кительно низкий выход мицелия и.использова- Сущность способа заключается в. том, что вние дорогостоящего дрожжевого экстракта,", .:, питательную среду для выращивания тканиНаиболее близким к предлагаемому являет-вйсших грибов добавляют нуклеотндсодержащийси способ выращивания культуры ткани высших . экстракт, получаемый в значительных количест 1,грибов иа жидкойпйтательной среде, содержа.вах как отход пртг деиуклеииизации биомассыщей источнйки углерода, азота, минеральныемицелия вйсшмх грибов. Денуклеинизациюсоли и нуклеотидсодержащие соединетппг.в:ка-:биомассы миделня йроводят следующим обра.чеетве стимулятора роста Щ..., зом,Иагрев. биомассы осуществляют в двеСогласно известному способу иэ нуклеойщ . атадии, первая нэ:которых длится 5-30 мин содержащих. соединений используют нуклеози 1 т-при 70 - 80 С, рн 3,5 - 7,5; вторая -30-50.мии днфосфаты или нуклеозидтрифосфаты, которвте нри 80 - 90 С и рН. - .1,5 (рН доводят соляной,являются. дорогостоящими.. серпой или ортофосфорной кислотой). Йрн61400 0,06 55 этом между этими стадиями проводят инкубирование в течение 1,5 - 2 ч при 30 - 80 С, а после второй стадии нагревания рН повышают до 3,5-6,5 и проводят сепарирование, получая целевой продукт (биомассу с пониженным содержанием нуклеиновых кислот) и суперна. таит (нуклеотидсодержащий экстракт, включающий олнгонуклеотиды и нуклезидмонофосфаты), Экстракт содержит продукты фермен. тативного гндролиза нуклеиновых кислот - нуклеотиды, а также соли и небольшое количество аминокислот н витаминов. Нуклеотидсодержащий экстракт добавляют в питательную .среду в жидком илн высушенном виде в количестве 0,05 - 0,2% по сухому весу.П р и м е р 1, Биомассу базидиального гриба Рецоготцз озтгеатцз (Ег) Кцтгпег (вешенка обыкновенная) выращивают в колбах на качалке. Питательная среда имеет следующий состав, вес.%:Этиловый спирт 1,0Азотнокислый аммоний 0,3Фосфорнокислый калийодноэамещенныйФосфорнокислый калийдвухзамешенный 0,06Нуклеотидсодержащнйэкстракт 0,05 (АСЭкстракт получают следующим образом.Биомассу мицелия (концентрация 100 г влаж ного веса на 1 л среды) суслензируют в культуральной жидкости (рН 6,0) и нагревают 20 мин при. 75 С, выдерживают 2 ч при 37 С и вновь нагревают до 85 С при рН 1,08 в те. чение часа (рН суспензии доводят соляной кислотой), После проведения стадии экстракции нуклеиновых кислот рН доводят до 3,5 и сепарируют, Полученный таким образом супернатант содержит, вес,% от сухого вещества:Нуклеотндсодержащневещества 12Аминокислоты 5Соли 60На 1 л среды добавляют 50 мл эгого супер. натана, этиловый спирт вводят дробно (3 раза через 24 ч), выращивание проводят 72 ч при26 С н рН 6,0.Концентрация биомассы через 72 ч составля. ет 6,3 г/л, что соответствует выходу от этило.вого спирта 63%.Контролем служит аналогичное выращивание этого же,базидиального гриба на среде вышеуказанного состава с заменой нуклеотидсодержащего экстракта на дрожжевой экстракт, Концентрация биомассы в этом опыте через 72 ч составляет 3,06 г/л, т,е, 30,5% от внесенного этанола.П р и м е р 2. Культуру ткани гриба Рецоготцз озтгеатцз 1300 (вешенка обыкновен 5 1 О 15 20 25 В,30 35 40 45 50 4ная) выращивают в периодическом режимев ферментере (с рабочей емкостью 200 л) смеханическим. перемешнванием (300 об/мин)при 26 С, рН 5,8 - 6,1 и аэрации 1 л воздухана 1 л среды в минуту на питательной средеследующего состава, вес,%:Этиловый спирт 2,0Аммоний азотнокислый 0,2Мочевина 0,07Калий фосфорнокислыйоднозамещенный 0,2Магний сернокислый 0,05Кукурузный экстракт 0,25В контрольном опыте концентрация биомас.сы через 72 ч культивирования - 6,1 г/л(АСВ), содержание белка - ,. 33%, нуклеиновыхкислот - 3,5%.Выращивание с добавлением нуклеотндсодер.жащего экстракта осуществляют в аналогичныхусловиях на среде вышеуказанного состава,с заменой кукурузного экстракта на нуклеотндсодержащий в количестве 2 г сухого вещества на 1 л питательной среды. Выход био.массы через 72 ч - 12,3 г/л (АСВ), содержание белка - 37%, нуклеиновых кислот - 4,0%,П р и м е р 3. Мицелий базидиальногогриба Роурогцз зццаеозцз (Нцаз еФ Гг)(трутовик чешуйчатый) выращивают в условиях,аналогичныхпримеру 1, за исключением того,что этиловый спирт добавляют в количестве1,5%, а нуклеотидсодержащий экстракт в количестве 0,1%.Концентрация биомассы мицелия - 10,1 г/л,что соответствует выходу от этилового спирта67,3%.Замена в питательной среде нуклеотидсодержащего экстракта на дрожжевой экстрактприводит к снижению выхода мицелия до6,2 и/г (АСВ), то есть 41,3% от внесенногоэтилового спирта.П р и и е р 4. Мицелий гриба Роурогцзз 1 цавюзцз (Нцпдз, ет Ег) вырашивают в условиях, аналогичных примеру 3, за исключением того, что экстракт грибов добавляют в количестве 0,05%,Накопление АСВ мицелия составляет 8,0 г/л,что соответствует выходу от этилового спирта53,5%.Таким образом, предлагаемый способ выра.щииания культуры ткани высчвх грибов является более дешевым, так как предусматриваетзамену дорогостоящих нуклеознддифосфатови нуклеозндтрифосфатов на экстракт, содержащий более дешевые олигонуклеотиды и нуклеозидмонофосфаты. Формула изобретения Способ выращивания культуры ткани выс.ших грибов на жидкой. питательной среде, содерСоставитель В. Зайцева Техред А; Ач Корректор Е, Рошко Редактор Т. Колодцева Заказ 6456/7 Тираж 528 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и .открытий . 113035, Москва, Ж - 35, Раущокая наб д. 4/5Подписное Филиал ППЛ "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5 861400 , 6жащей источники углерода, азота, минеральные высших грибов, в количестве 0,05 -соли и нуклеотидсодержащие соединения в ка 0,2 вес,%.честве стимулятора роста, о т л и ч а юИсточники информации,щ н й с я тем, что, с целью удешевления принятые ао внимание при экспертизеспособа, из нуклеотидсодержащих соединений 5 1. Патент Японии У 5016433, кл. 36(2)используют экстракт, включающий олигонуклео- В 221,2, опублик. 1975,тиды и нуклеозидмонофосфаты, полученный 2, Авторское свидетельство СССР Яф 644824,при удалении нуклеиновых кислот из биомассы кл. С 12 В 3/14, 1976.