Способ получения коньюгата эритроцитов с белком

Союз Советских Социалистических Республик(б 1) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 120279 (21) 2723507/28-13 (51)М Л с присоединением заявки М -О 01 й 33/48 Государственныч комитет СССР по делам изобретений н откРо 1 тн Й(71) заявитель научно-исследовательский институт медицинской рциологииАМН СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЬЮГАТА ЭРИТРОЦИТОВ С БЕЛКОМ 30 Изобретение относится к медицине, более конкретно к иммунологии и мог жет быть использовано при диагностике заболеваний в реакциях гемагглютинации.5Известен способ получения конъюгата эритроцитов с белком ,1.Однако полученный по этому способу конъюгат стабилен лишь в течение нескольких недель.30Целью изобретения является повышение устойчивости конъюгата.Поставленная цель достигается тем, что эритроциты диализуют в течение 4 сут против нейтрального 5 Формалина, после чего к диализату добавляют раствор периодата натрия доконечной концентрации 0,04-0,05 М, инкубируют смесь в течение 20-30 мин, периодат натрия нейтрализуют, добав ляют сывороточный альбумин до конечной концентрации 1,3-1,7 мг/мл, устанавливают рН среды 9,0-9,5, инкубируют 30-60 мин и вносят затем боргидрид натрия до концентрации 0,18-0,22 М,5 после чего реакционную смесь вновь инкубируют в течение 18-24 ч при 0-4 оС, доводят рН среды до 5,5- 5,7 и отмывают полученный целевой продукт. П р и м е р. 3 мл 50 -ной суспензии бычьих формалинизированных эритроцитов дважды отмывают водой от фор. мальдегида и суспендируют в 5 мл воды, добавляют 5 мл 0,1 М раствора периодата натрия и оставляют на 20- 30 мин. Для разрушения избытка периодата к суспензии добавляют О, 3 мй 1 М этиленгликоля и оставляют ее при комнатной температуре на 5-7 мин.Реакционную смесь при перемешивании вносят в 5 мл водного раствора бычьего сывороточного альбумина, содержащего 20-25 мг белка в указанном объеме, Добавлением 5 -ного карбоната калия устанавливают рН раствора белка равным 9-9,5 и поддерживают его на этом уровне после добавления реакционной смеси в течение 40-45 мин при комнатной температуре. Затем к смеси добавляют 150 мг боргидрида натрия в 5 мл воды, Смесь оставляют на 18-20 ч при ОоС. После этого с помощвю 1 М раствора муравь - иной кислоты доводят рН смеси до 5,5 и через 1 ч - до 8,5 1 М воднымраствором аммиака. После этих процедур эритроциты отмывают стандартносолевым раствором (содержащим 0,15 М хлористого натрия и 0,015 М цитрата.Редактор Т. Веселова Техред Н. Ковалева Корректор О. Билак Заказ 8343/51 Тираж 1019 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5Филиал ПППфПатент",г.ужгород,ул.Проектная,4 натрия ) и суспендируют в 50 мп стандартно-солевого раствора, содержащего 0,2 йп нормальной кроличьей сыворотки и 0,5 мл формалина. Отработанные таким образом эритроциты используют в реакции пассивной гемагглютинации.Для ингибирования титруют исследуемую сыворотку как обычно,.затем к каждому разведению добавляют по 10 мг ингибитора на 30-40 мин перед смещением с сенсибилизированными эрит-. роцитами. Точность измерения концентрацииопределяется возможностями лабораторного оборудования.Эритроциты, сенсибилизированныебелковым антигеном, в реакции пассив-,ной гемагглютинации специфично воздействуют с антисывороткой к этомуантигену,Конъюгаты, полученные по предлагаемому способу, остаются стабильными в течение 3-4 мес.,что снижает стоимость диагностических методов исследований с их использованием. Формула изобретенияСпособ получения конъюгата эритроцитов с белком, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения устойчивости конъюгата,эритроциты диали-,зуют в течение 4 сут против нейтрального формалина, после чего к диализату добавляют раствор периодата натриядо конечной концентрации 0,04-0,05 М,инкубируют смесь в течение 20-30 мин.,периодат натрия нейтрализуют, добавляют сывороточный альбумин до конечной концентрации 1,3-1,7 мг/мя, устанавливают рН среды 9,0-9,5, инкубируют30-60 мин и вносят затем боргидриднатрия до концентрации 0,18-0,22 М,после чего реакционную смесь вновьинкубируют в течение 18-24 ч при0-4 С, доводят рН среды до 5,5-5,7и отмывают полученный целевой продукт.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. ОптепКх Е Иец 1 дегаапь И.,Оопап М. апд опте й. П цйагдеЬдеаь а соцр)п 9 геа 9 епй и разачеЬева 99 ц 1 пайоп - " щацпо 1 о 9 у",16, 35, 1969.