Способ получения антисоматотропной сыворотки

О П И С А"фН И-Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Р 11 460647 Союз Советских Сскиалистическик Реслублик(32) ПриоритетОпубликовано 25.07.75. БюллетеньДата опубликования описания 11.02 сударственный комитет Совета Министров ССС пв делам изобретений. Трубицина 71) Заявител осковск вакцини Мос онкол ьскии институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИ СЫВОРОТКИОМАТОТРО П Изобретение относится к области медицинской промышленности, а именно к производству антигормональных сывороток.Известен способ получения антисоматотропного гаммаглобулина путем иммунизации лошадей микродозами гормона роста человека, получения сыворотки, очищения активной фракции высаливанием с последующим ферментативным гидролизом при рН 3,1 - 3,8, обработки диализата хлороформом и дополнительным очищением на сефадексе.Однако известный способ не обеспечивает высокой активности сыворотки.С целью повышения активности сыворотки проводят гипериммунизацию животных убывающими дозами.Способ получения антисоматотропной сыворотки осуществляется следующим образом.Продуценты - лошади в возрасте 4 - 8 лет. Подготовительный цикл иммунизации состоит из 3 - 5 инъекций антигена с интервалом в 1.0 дней. Антиген (высокоочищенный человеческий гормон роста в смеси с адъювантом) вводят подкожно не более 2,5 мл в одно место, с поочередным вовлечением в иммунигенез региональных лимфатических узлов.По окончании подготовительного цикла в пробе сыворотки крови определяют титр антител и, если содержание антигормональных флокуляционных единиц превышает 250 АФЕ/мл, продуцентов кровопускают 2 раза по 5 л и переводят под гипериммунизацпю.Гипериммунизацию проводят путем 1 - 3 инъекции антигена с интервалом в 7 дней, прп 5 наличии высокого титра антител лошадепкровопускают спустя 7 - 9 дней после последней инъекции антигена.Из 140 - 145 л иммунной крови получаютсепарированием примерно 100 л цитратной 10 плазмы или 85 л сыворотки,К 100 л иммунной плазмы добавляют 5 л5%-ного раствора фенола для консервации и плазму сохраняют в камере при 4 - 10 С до начала ее очистки, но не более 5 суток.15 Очистку начинают, добавляя к 105 л консервированной плазмы сухой стерильный сернокислыи аммоний, из расчета 240 г/л, размешивая смесь до полного растворения соли.При этом происходит выпадение в осадок 20 глобулинов, которое полностью заканчиваетсячерез 5 - 12 час выдержки. Осадок отфильтровывают, отжимают под прессом. Для дальнейшей очистки и конденсации пммунных глобулинов отжатый осадок растворяют в стериль ной апирогенной дистиллированной воде дообъема 100 л. К раствору добавляют еще 150 л воды 20 мл 2,2 н. НС 1 и 756 г медицинского пенспна без наполнителя. Ферментатпвный гидролиз глобулинов продолжается 1 час ЗО при температуре 20 - 24 С и рН З,З - 3,4. По460647 Составитель С. Малютина Текред 3. Тараненко Корректор И. Позняковская Редактор Н. Хлудова Заказ 79/5 Изд, М 59 Тираж 559 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раугпская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 сле чего рН раствора поднимают 2,5 н. едким натрием до 4,2 и гидролиз продолжают еще 1 час. По окончании ферментации к раствору при рН 4,3 - 4,4 добавляют 140 г/л сернокислого аммония и смесь прогревают при 56 С в 5 течение 45 мин для термоденатурации и осаждения лабильных белков. Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием.Прозрачный фильтрат доводят 6 и. едким натрием до рН б,б - 7,2 и активные иммуно глобулины выделяют сернокислым аммонием, доводя его концентрацию в растворе до 340 г/л, Осадок иммунных глобулинов собирают фильтрованием, прессуют и диализируют 48 час против водопроводной воды. Полу чаемый диализат, объемом 7 - 8 л и концентрацией белка 18 - 19%, подвергают дополнительной очистке с помощью хлороформа.При комнатной температуре к диалпзату добавляют 2,1 - 2,4 л хлороформа, смесь пере мешивают и помещают в холодильную камеру с температурой плюс 56 С па 18- - 24 час прп периодическом интенсивном перемешиванпп. По истечении этого времени диализат подогревают до комнатной температуры и проводят изоэлектрическое осаждение остаточных балластных продуктов при рН 5,1 - 5,5 (по мнкропробс), 11 одкисление проводят 1 н. соляной кислотой, примерно до 25 мл/л диалпзата. Предмет изобретенияСпособ получения антисоматотропной сыворотки путем многократной иммунизации животных, например лошадей, гормоном роста человека, выделения активной фракции, высаливанием с последующим ферментативным гпдролизом, диализом и обработкой диализата хлороформом, отличающийся тем, что, с целью повышения активности сыворотки, проводят гипериммунизацию животных убывающими дозами.