Способ выделения наружной и внутренней мембран возбудителя чумы
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1292320
Авторы: Абрамова, Коробейник, Цивин
Текст
(51)5 С 12 0 РЕТЕНИТВУ ова Ю СФ СУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ ОПИСАНИЕ ИЗО Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕП,(54)(57) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ НАРУЖНОЙИ ВНУТРЕННЕЙ МЕМБРАН ВОЗВУДИТЕЛЯ ЧУМЫ путем выращивания клеток на,клеток давлением через пресс, ультрацентрифугирования в градиенте концентраций сахароэы и сбора целевогопродукта, о т л и ч а ю щ и й с йтем, что, с целью повышения выходацелевого продукта и ускорения спасо"ба, подученный экстракт после разру-.шения клеток подвергают дважды ультрацентрифугированию в двух последовательных градиентах концентрациисахарозы (70-203) и (70-453) приускорении 120000-. 130000, я.. Заказ 4362 Тираж 490 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д, 4/5Производственно"полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул,Проектная, 4 1 12923Изобретение относится к области биотехнологии и касается вьщеления наружной и внутренней мембран грамотрицательных микроорганизмов.Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и ускорение способа за счет модификации этапа выделения.П р и м е р. Клетки чумного микроба (штамм ЕЧ) выращивают в сис теме непрерывного культивирования в бульоне Хоттингера, рН 7,2 при 28 С и 37 С до середины логарифмической разы развития и биомассу собирают центрифугированием в течение 15- 15 20 мин при 5000-6000 я. Клетки отмывают буероч (0,01 М трис-НС 1, рН 7,2; 0,02 М МяС 0,03 М 2-меркапто" этанол) и оставляют в осадке при минус 20 С до использования. 20Замороженные осадки (8-10 г бактериальной массы) суспендируют в 30 мл трис-НС 1-буфера, рН 8,0, содержащего 207, сахарозы, добавляют РНКазу и ДНКазу (2 мг на 1 г клеток), инкубируют 30 мин при 4 С и дважды пропускают через Х-пресс (давление 16 т) в замороженном сос" тоянии.Обломки клеток и неразрушенные клетки удаляют центрифугированием при 1300-1400 я в течение 10 мин. Клеточные оболочки (общая Фракция мембран) вьщеляют центрифугированием супернатанта при 120000 к (ротор 35 ,БЮ, .ультрацентрифуга Ь 5-6:) в течение 1 ч в ступенчатом градиенте .сахарозы, содержащем 9 мл 703-ной са 202харозы (я/объем) и 23,5 мл 203-ной сахароэы (в/объем). Плотный оранжевый слой, расположенный в центре пробирки, отсасывают с помощью шприца и используют для дальнейшего фракционирования.Вьщеленную фракцию оболочек или суммарных мембран (наружные и цитоплазматические) промывают О, 01 М трис-НС 1-буфером, рН 8,0, содержащим .0,01 М дитиотреитола и 5 10 М Ма и наслаивают на верх линейного сахарозного градиента (70-453) (общий белок 200 мг). Градиенты приводят в равновесие эа 6 ч на ультрацентрифуге Ь 5-65, используя ротор ЗИи ускорение 120000 в. За это время материал отчетливо распределяется в два кольца. Оранжевый слой и серовато-белый на 0,5 см ниже первого, которые представляют собой материал внутренних и наружных мембран. Проводят измерение оптической плотности при 280 нм на ОасоМ 11 после раскапывания (по 10-12 капель), полученных последовательно Фракций градиента, которые в дальнейшем собирают и отмывают в трис-НС 1-буфере, рН 8,0, содержащем 510 Ирф и 0,01 М ди" тиотреитола. Выделенные чистые препараты наружных и внутренних мембран хранят при минус 20 С. Способ позволяет в 3 раза по срав,нению с прототипом ускорить процесс пблучения мембранных Фракций с высокой степенью чистоты и увеличить выход конечного продукта в 4 раза.
СмотретьЗаявка
3830373, 20.11.1984
РОСТОВСКИЙ-НА-ДОНУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ
КОРОБЕЙНИК Н. В, АБРАМОВА Л. А, ЦИВИН В. С
МПК / Метки
МПК: C12N 1/00
Метки: внутренней, возбудителя, выделения, мембран, наружной, чумы
Опубликовано: 15.10.1990
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-1292320-sposob-vydeleniya-naruzhnojj-i-vnutrennejj-membran-vozbuditelya-chumy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ выделения наружной и внутренней мембран возбудителя чумы</a>
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l. продуцент моноклонального антитела к антигену мембран жировых глобул женского молока
Номер патента: 1698287
Опубликовано: 15.12.1991
Авторы: Авдеев, Барышников, Жордания, Кадагидзе, Казачкина, Кармакова, Короткова, Якубовская
МПК: C12N 5/20, C12P 21/08
Метки: антигену, антитела, гибридных, глобул, женского, животных, жировых, клеток, культивируемых, мusсulus, мембран, молока, моноклонального, продуцент, штамм
...специфичности, клонируют методом предельных разведений на фидере из клеток селезенки и тимуса мышей ВА 1 В/С:Для приготовления фидера кусочки тимуса и селезенки разрушают в стеклянном гомогенизаторе Поттера, Взвесь клеток фильтруют через 2 слоя марли, Суспензию клеток разливают по 0,1 мл в лунки 96-лу 40 45 50 роля используют сыворотку крови мыши,35 а также поликлональные антитела кроликаТитр антител в культуральной жидкостиопрсделяют в иммунофлюоресцентном тесте. Титр антител в культуральной жидкости равен 500,5 Для выращивания асцитной опухоли изштамма гибридных клеток пригодны мыши самки ВА 1 ВС. Интактным мышам за 1 - 7 дн дс прививки опухоли вводят внугрибрю. шинно по 0,5 мл 3%-ного пептона на вазели новом масле, Клетки гибо 7...
Способ получения производных мурамилпептидантигенов
Номер патента: 1055312
Опубликовано: 15.11.1983
Авторы: Альберт, Герхард, Лайос, Роланд, Феликс, Ярослав
МПК: A61K 38/14, C07K 9/00
Метки: мурамилпептидантигенов, производных
...1 -карбамоилзтил) -карбамоилэтил-дезокси-0-глюкозу в виде белого порошкообразного вещества с К = +9 + 1(дистиллированная вода, с 1,090) .Примененное исходное вещество получают следующим образом,. Раствор 6,1 г моногидрата бензил-ацетамино-З-О-1-(Ь-(Р-карбамоил-карбоксипропил) -карбамоилэтил) -карбамоилэтил -2-дезокси-альфа-О-глюкопиранозида и 3,5 г паратолуолсульфоната бензилового эфираЬ-аланина в 30 мл И,И-диметилформамида смешивают с 1,4 мл триэтиламина,1,1 г Б-оксисукцинимида и 2,3 г дициклогексикарбодиимида и реакцион ную смесь перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре. Выделившуюся в осадок в кристаллическом виде циклогексилмочевину отфильтровывают, осадок промывают 10 мл И,И-диметилформамида и...
Способ получения днк,кодирующей гормон роста лосося, способ конст-ния промежуточной рекомбинантной плазмидной днк, содержащей днк-фрагмент, кодирующий гормон роста лосося, для получения плазмид ps gh1, ps gh3,
Номер патента: 1825376
Опубликовано: 30.06.1993
Авторы: Акико, Мориюки, Сейга, Сусуму, Тамио
МПК: C12N 15/18, C12N 15/70
Метки: гормон, днк, днк,кодирующей, днк-фрагмент, кодирующий, конст-ния, лосося, плазмид, плазмидной, промежуточной, рекомбинантной, роста, содержащей
...экстрагируют смесью фенола с хлороформом и осаждают этанолом с получением 0,5 пмоля кДНК-вектора-затравки ДНК, связанной с (дЦ) цепями. Затем 0,08 пмоля ДНК и 0,16 пмоля упомянутой связующей ДНК добавляют к 40 мл раствора, содержащего 10 мМ трис-НС (рН 7,5), 0,1 М йаС и 1 мМ ЭДТА, и инкубируют при 65 С, 42 С и 0 С в течение соответственно 10, 25 и 30 мин. Реакционный раствор доводят до 400 мл (полный объем) раствора. содержащего 20 мМ трис-НС 1 (рН 7,5) 4 мМ МцС 12, 10 мМ (НН 4)2504, 0,1 М КС 1 и 0,1 мМ Р.НАД, К реакционному раствору добавляют 10 единиц ДНК-лигазы Езсег 1 сЬ 1 а со 11 и инкубируют в течение 1 сут при 11 С. Реакционный раствор доводят до раствора, содержащего 40 мкМ дНТФ и 0,15 мкМ /3-НАД. Затем добавляют пять единиц...
Способ определения целостности клеточных мембран микроорганизмов
Номер патента: 1010126
Опубликовано: 07.04.1983
МПК: C12N 13/00
Метки: клеточных, мембран, микроорганизмов, целостности
...к йредлагаемомуявляется способ люминесцентного спектрального анализа клеток, включающийобработку суспензии клеток флуорохромом, отмывание окрашенной суспензииклеток от флуорохрома и измерение интенсивности флуоресценции в максимуме спектра 1 3 1,Однако данный способ недостаточноточен и не дает четкой количественнойхарактеристики целостности мембран,1 Целью изобретения является повышение точности. 4 ОТаблиц а 1 Время куль 0 ч тивирова 1 ч Й 5 мин 2 ч 50 мин 3 ч 50 мин 4 ч 50 ми 50 мин 0,68+00 2+0,0 0,55+0,03 ия изменения целостпри стрессе клетки на азе роста бактериальподвергались термошоку ерений приведены в Таблица 2 Для выявле ности мембран стационарной ной популяции Результаты из табл. 2.В табл. 2 пени поврежде 8010 мин слсвия...
Способ обратимого образования путей пассивного транспорта анионов хлора в мембранах корневых клеток растения trianea воgотеnsis каrsт
Номер патента: 1529114
Опубликовано: 15.12.1989
Авторы: Алиев, Гаджи-Заде, Мусаев, Фархадова
МПК: G01N 33/48
Метки: trianea, анионов, воgотеnsis, каrsт, клеток, корневых, мембранах, образования, обратимого, пассивного, путей, растения, транспорта, хлора
...помощью стандартной микроэлектродной т ехни ки . Р аст вор поли еновогоантибиотика амфотерицина 5 (АБ) в ди метилсульфоксиде в концентрации 3 10 М(молекулярный вес АБ составляет201000 дальтон) вводят в инкубационнуюсреду 0,25 нормы раствора ХогландаАрнона 1, имеющую в своем составе10 мкМ ионов хлора, и доводят до одной иэ конечных концентраций АБ, лежащей в пределах 2 1 О - 10 М.Через 15-20 мин после введения АБ в инкубационную среду регистрируют заметное увеличение значений асо, В и деполяризации плазмалеммы (ДЕ,), достигающих своих максимальных стационарных величин за 80 мин.В таблице приведена зависимостьа, Р, и ДЕкорневых клеток высщего водного растения Тгдапеа ЬооСепяя от концентрации АБ,Изменения приведенжх в таблицепараметров...
Предыдущий патент: Способ диагностики плазмы
Следующий патент: Способ получения меченого j -тромбина
Случайный патент: Котельная установка