Способ получения пентасахарида

Редактор Н.Рогулич Заказ 4086 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 абсорбции, вызываемой бензильными группами, Тогда растворитель выпаривают и в остатке получают соединение 48,д) Сульфатирование МН 2-групп, затем омыление карбоксильных,Соединение 48 растворяют в воде(4 мл), доводят рН до 9,5, после чего добавляют комплекс триметилэмина с ЯОз(54 мг). Значение рН поддерживают равным 9,5 в течение всего процесса путем добавления 0,1 н. раствора гидроксида натрия,Спустя ночь, снова добавляют сульфэтирующий агент (27 мг). Последнее добавление осуществляют спустя 24 ч,Через 48 ч добавляют раствор гидроксида натрия (ЗМ, 34 мл) к образовавшемуся соединению 49, затем раствор перемешивают в 3 ч при комнатной температуре, чтобы гидролизовать сложные метиловые эфиры звеньев типа уроновой кислоты, Реакционную смесь нейтрализуют, затем концентри. руют до объема около 2 мл, Полученный раствор вводят в верхнюю часть колоннь с Сефадексом 6 25 (Па+) (100 мл), элюируя водой. Собранные фракции анализируют с помощью Уф- абсорбции (206 нм) и поляриметрии (265 нм), Обладающие оптической активностью фракции группируют, растворитель удаляют, остаток растворяют примерно в 2 мл воды и лиофилиэуют,Получают производное 50 общей формулы (1) в виде белого порошка (5,6 мг, 25 О по отношению к продукту 45),ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру, В частности для аномерных протонов глюкоэаминных единиц находят сдвиги ( д. ТМС) 5,36, 5,45 и 5,52 м.д, 16940655 10 15 25 ч 1 л 20 сульфатирующего средства типа указанного выше при рН 9,5 в водной среде с последующим омылением группы А и выделением целевого продукта в виде натриевой соли на ионообменной смоле в натриевой форме.Приоритет по признакам:Ф ъд щ,.14 МФзФф,. е 4Иэебретениефбтносится к способу получения олигосахаридов, фрагментов мукополисахаридных кислот, в частности к способу получения пентасахарида общей формулы ОВ О ОР О (ОВ УНВ ОВ НН ОВ- О- О ОВО О ОВ ОНОВ МНВгде Ой - группа ОН или ОЯОз;й - атом водорода или группа ЯОз,, в виде натриевой соли,Целью изобретения является получениеприродных фрагментов мукополисахаридных кислот использованием химических реагентов заданной структуры, содержащихактивные группы, способные к реакции гликозилирования, а также блокирующие группы, позволяющие вводить функциональныегруппировки,П р и м е р 1. Получение дисахарида 20общей формулы (11)или 1-бром,6-ди-ацетил-азидо-0-(метил-(2,3-ди-О-бе на ил-хлорацетил - Р -0-глюкопиранозил) уронат)- а -О-глюкопиранозида.а) Получение аллил- а -О-глюкоплранозида (соединение 1).Раствор газообразного хлористого водорода (18 г) в аллиловом спирте (600 мл)нагревают до 70 С, Затем добавляют безводную глюкозу (300 г) и выдерживают 3 чпри этой температуре.За течением реакции следят с помощьютонкослойной хроматографии (ТСХ) в смесиметанол/хлороформ (1/4 по объему). Полученный спустя 3 ч коричневого цвета раствор концентрируют досуха под вакуумом,нейтрализуют концентрированным раствором аммиака (50 мл), затем снова концентрируют досуха. К полученному остаткудобавляют ацетон (500 мл), доводят до кипения и выдерживают до полного растворения, После охлаждения жидкостьдекантируют. Остаток снова подвергают такой же обработке вплоть до тех пор, пока 01.02.82 при синтезе дисахарида (111), 28.05.82 при конденсации моносахарида И с глюкуроновой кислотой,06,08.82 при синтезе дисахарида (11), взаимодействии дисахаридов (11) и (111), получении пентасахарида(1). ТСХ экстракта не покажет истощение состаЭва остатка производным 1 или слишком сильное загрязнение экстракта примесями. Часть экстрагированной первой фракции (12 г) хроматографируют на двуокиси кремния. Рекуперируют производное 1, которое может быть кристаллизовано из смеси ацетон/эфир (6,5 г, т.пл, 95-99 С). Остаток продукта может быть очищен тем же способом.б) Блокирование положений 4 и 6 аллильрого производного, приводящее к аллил,6- 0-бензилиден- а -О-глюкопиранозиду (соединение 2).Соединение 1 (37 г) растворяют в диметилфармамиде (200 мл), Добавляют диметокситолуол (41 г) и вслед за этим гидратированную и-толуолсульфокислоту (130 мг), Через 2 ч нагревания на водяной сане под вакуумом и при наличии флегмы реакция заканчивается. ТСХ в смеси метанол/хлороформ (2/25 по обьему). Раствори- тель выпаривают, Сироп растворяют в метаноле (минимальное количество), этот раствор выливают по каплям в водный раствор бикарбоната натрия (6,3 г в 320 мл воды). Полученный осадок перекристаллизовывают из этанола (21 г, т,пл, 120-121 С). В маточные растворы дают еще продукт 2. Общий выход 37 г (71,4;4),в) Введение бензильной группы, приводящее к аллил.3-ди-бенэил,6-0-бензилиден- а -Э-глюкопиранозиду (соединение 3),Соединение 2 (45 г) растворяют в без; Водном диметилформамиде (500 мл), Добавляют гидрид натрия (18 г 50%-ной дисперсии в масле). Спустя 30 мин смесь охлаждают до 0 С и добавляют па каплям бромистый бензил (52 мл), За реакцией следят с помощью ТСХ (эфир/гексан, 1/1 по объему). Затем медленно добавляют метанол (150 мл), выпаривают досуха и извлекают хлороформом, Хлороформную фазу промывают водой, сушат над сульфатом натрия, После выпаривания растворителя остаток кристаллизуют из смеси. эфир/гексан (36,5 г, т.пл. 83 - 84 С). Этот продукт слегка загрязнен примесью, мигрирующей вверх в ТСХ (эфир/гексан, 1/1 по объему),50 55 г) Удаление бензилиденовой группы,приводящее к аллил,3-ди-О-бензил- а -Оглюкопиранозиду (соединение 4),К раствору соединения 3 (56 г) в метаноле (1 л) добавляют воду (450 мл), затем гидратирова н ную и-толуолсул ьфокислоту (17 г),Спустя 2 ч при 80 С смесь оставляют охлаждаться, растворитель выпаривают и остатокрастворяют в хлороформе (1 л). Хлороформный раствор промывают водой вплоть донейтрального значения рН, затем сушат надсульфатом натрия. Таким образом получаютсироп светло-желтого цвета (48 г), которыйиспользуют для синтеза соединения 5,д) Введение трифенилметильной группы в положение 6 с последующей реакциейацетилирования положения 4, что приводитпоследовательно к аллил,3-ди-О-бензил-трифенилметил-а -О-глюкопиранозиду(соединение 5) и его 4-0-ацетилированномуаналогу (соединение 6 а),Полученное производное 4 (48 г) растворяют в пиридине (250 мл) и добавляют трифенилметилхлорид (38,5 г), Спустя 1 ч при100 С реакция заканчивается (ТСХ,эфир/гексан, 1/1 по объему). К предыдущему раствору добавляют уксусный ангидрид(200 мл), Спустя ночь реакция заканчивается(ТСХ, эфир/гексан, 1/2 по обьему). Выпаривают досуха, остаток растворяют в хлороформе (500 мл), промывают хлоооформнуюфазу 10 -ным раствором бисульфата калия,водой и высушивают над сульфатом натрия.Хлороформ выпаривают. Получают соединение ба, которое используют для получения соединения 7 а.е) Удаление трифенилметильной группы,приводящее к алл ил-0-ацетил,3-ди-О-бензил- а -О-глюкопиранозиду (соединение 7 а).Полученное производное ба растворяют в хлороформе (500 мл). В этот раствор,охлажденный до ОС при перемешивании,прикапывают раствор трехфтористого борав метаноле (20-ный, 120 мл), За реакциейследят с помощью ТСХ (толуол/ацетон,10/2 по объему). Реакционную смесь переливают в делительную воронку. Хлороформ, ную фазу промывают водой (2 х 100 мл),насыщенным раствором бикарбоната натрия, затем водой до нейтрального значения рН. После высушивания и выпариванияполученный остаток вводят в колонку с силикагелем (500 г), уравновешенным в толуоле, После элюирования большинствапримесей чистым толуолом продукт элюируют смесью толуол/ацетон (10/2 по объему),Таким образом получают 48 г соединения7 а, которое непосредственно вводят в синтез соединения 8 а, Часть соединения 7 а 10 15 20 25 ЛО 40 45 получают в чистом виде, (а )о =+11 (хло 26 о роформ). Его ИК- и ЯМР-спектры, как и элементный анализ, подтверждают структуру,ж) Окисление спиртовой первичной группы в положении 6, приводящее к аллил-0-ацетил,3-ди-О-бензил- а -О-глюкопиранозилуроновой кислоте (соединение 8 а),Раствор соединения 7 а (48 г) в ацетоне (300 мл) охлаждают до - 50 С. Затем прикапыяают раствор трехокиси хрома (30 г) в серной кислоте (3,4 М, 125 мл), Смесь оставляют стоять для повышения температуры до камнатнсй. Реакцию контролируют с помощью ТСХ (метанол/хлороформ, 1/10 по объему), По окончании реакции реакционную смесь выливают в воду(500 мл). Продукт экстрагируют хлороформом (Зх 250 мл). Хлороформную фазу промывают водой до нейтрального значения рН, сушат над сульфатом натрия и концентрируют досуха. Полученный сироп (83 г) используют для получения соединения 9 а.з) Метилирование карбоксильной группы в положении 6, приводящее к метил-(аллил- О-ацетил,3-ди-О-бензил- а -О-глюкопиранозоил)-уронату (соединение 9 а),Полученный в стадии получения соединения Оа сироп растворяют в эфире(300 мл). Затем добавляют эфирный раствор диазометана вплоть до исчезновения соединения Яа (ТСХ, эфир/гексан, 1/1 по обьему). После подкисления уксусной кислотой раствори- тели выпаривают. Полученный остаток (53 г) растворяют в горячем этаноле. Производное 9 а вькристаллизовывается при охлаждении. После перекристаллиэации получают соединение 9 а (13,4 г), т.пл. 85 - 86 С (а )о-=+12 (с=1,2, хлороФорм). Этот продукт охарактеризован ИК-, ЯМР-спектрами и элементным анализом,Из фильтрата после кристаллизации получают еще 7,6 г соединения 9 а. Общий выход соединения 9 а из соединения 2 составляет 38.и) Введение пропенильной группы в положение 1, приводящее к метил-(пропенил-0-ацетил,8-ди-О-бензил- а-О-,люкопиранозил)-уронату (соединене 10 а). Производное 9 а (4 г) растворяют в смеси этанола (119 мл) с бензолом (52 мл) и водой (17 мл), Затем добавляют диазабициклооктан (170 мг) и доводят до кипения с обратным холодильником. К кипящему раствору добавляют хлорид трис-(трифенилфосфин)- радия(550 мг). Кипение поддерживают 4 ч (ТСХ. эфир/гексан, 1/1 по объему).По окончании реакции раствор фильтруют и растворители удаляют. Остаток хроматографируют на силикагеле (150 г) в смеси этилацетат/хлороформ(1/50 по объему), Получают соединение 10 а (3,25 г, 81), которое кристаллизуют иэ этанола, ( а)о =+12 (с=1, хлороформ); т,пл. 90 С. Структура подтверждена элементным анализом и ЯМР- и ИК-спектрами.к) Удаление ацетильной гоуппы в положении 4, приводящее к метил-(проп-енил,3- ди-бенэил- а -0-глюкопиранозил)-уронату (соединение 13),Производное 10 а (350 мг) растворяют в метаноле (5 мл). Добавляют метилат натрия (0,2 мл, 2 М), После выдерживания в течение 1 ч. при комнатной температуре реакцию прекращают путем добавления смолы Ооаех 50 в Н+-форме. После фильтрации получают продукт 13, загрязненный небольшим количеством продукта, образующегося в результате а -ф -отщепления.Согласно варианту стадии д вместо реакции ацетилирования реализуют реакцию бензоилирования, которая приводит к аллил-0-бенэил,3-ди-О-бензил-0-бензоил-,0-трифенилметан- а- О-глюкопиранозиду (соединение 6 б), из которого затем удаляют трифенилметильную группу, что позволяет получить аллил-О-бензоил";- ди-бе н з ил-а-О-гл юко пи ра н озид (соеди н ениее 7 б). Эти реакции реализуются следующим образом,Получение соединений 6 б и 7 б.К пиридиновому раствору соединения 5 добавляют хлористый бензоил (1,5 экв.) и за реакцией следят с помощью ТСХ (этилацетат/бензол, 1/20 по объему), Избыток хлористого бензоила разрушают добавлением избытка метанола. После выпаривания досуха растворенный в хлороформе остаток промывают 10-ным раствором бисульфата калия, водой, сушат и концентрируют досуха, Полученный сироп используют в синтезе соединения 7 б, Этот сироп (105 г, получен из 80 г соединения 3) растворяют в хлороформе (300 мл). Добавляют и-толуолсульфокислоту (76 г моногидрата в 100 мл метанола), Спустя ночь реакция заканчивается (ТСХ, этилацетат/хлороформ, 1/20 по объему), Хлороформную фазу промывают водой до нейтрального значения рН, сушат и концентрируют досуха. Полученный сироп (98 г) хроматографируют на колонке с сипикагелем (1,2 г), элюируют хлороформом (0,6 л), затем смесью этилацетат/хлороформ ,1/20 по объему). Таким образом получают чистое производное 7 б (30 г), которое используют в стадии получения соединения 8 б,Исходя из соединения 7 б, можно окислять группу СН 2 ОН в положении 6, затемвводить метильную группу в полу:-еннуюкарбоксильную группу, получая последова 5 тельность аллил-0-бензоил,3-ди-О-бензил-а-О-глюкопиранозилуроновую кислоту(соединение 8 б) и соответствующий метиловый эфир (соединение 9 б),Эти производные получают следующим10 образом.Соединение 7 б (27 г) обрабатывают, какукаэанО для 7 а при получении Ва, Полученный по окончании обработки сироп содержит соединение 8 б, которое метилируют15 диазометаном (как для соединения 8 а), Остаток от стадии метилирования очищают насиликагеле (200 г, эфир/гексан, 1/1) и получают соединение 9 б(21 г, 77,5 Я, Его ИК- иЯМР-спектры подтверждают его структуру,20 Исходя из производного 9 б, получаютсоответствующее пропенильное производное 10 б, работая, как при получении 10 а,Производное 13 получают, исходя из10 б согласно реакции, данной для получе 25 ния 10 а.Со гласно другому варианту получают аллил 2,3-ди-О-бензил а -0-глюкопиранозилуроновуюкислоту и метил-(аллил,3-ди-О-бензилО-глюкопиранозил)уронат(соединения 11 и 12),30 Соединение 8 б (1,9 г) растворяют в метаноле(40 мл). Затем добавляют 5 н, растворгидроксида натрия в количестве, достаточном для того, чтобы иметь 1 М концентрациюгидрокс да натрия, За ходом реакции сле 3 дят с помощью ГСХ (метанол/хлороформ,1/4 по объему), Когда она заканчивается,добавляют воду (100 мл), Промывают эфиром, подкисляют и продукт экстрагируютэфиоом. Кислую эфирную фазу промывают40 водой до нейтрального значения рН, Производное 11 не выделяют, Его метилируютэфирным раствором диазометана, получаясоединение 12 (900 мг, 56,), которое затемочищают на колонке с силикагелем45 (Эфир/гексан, 1/1 по объему). (а)о =+35,2(с=1,3, хлороформ), Его ИК- и ЯМР-спектрыи данные элементного анализа подтверждают его структуру.Таким же образом производные 11 и 1250 могут быть получены из 9 а или 9 б,Соединение 13 может быть получено изсоединения 12 следующим образом.Прои."водное 12 обрабатывают комплексом родил, как указано для 9 а, Соедине 55 ния 13 получают с выходом 90. Оноохарактеризовано ИК- и ЯМР-спектрами,Более того, обработанное уксусным ангидридом (1 мл на 180 мг 9 а), оно дает соединение 10 а.5 10 15 20 25 30 дисахарида 18 40 50 Согласно другому варианту производное 13 может быть получено из 10 а или 10 б, следуя методике, приведенной для получения соединений 17 иэ 9 а или 9 б.л) Хлорацетилирование соединения 13, приводящее к соединению 14, а именно к метил-(проп-енил,3-ди-О-бенэил-0- хлорацетил-а-О-гл юкопиранозил)уронату.2,8 г соединения 13 растворяют в 30 мл пиридина (6,56 ммоль). После охлаждения до 0 С добавляют по каплям (10 мл) раствора 2 мл хлорацетилхлорида в 20 мл дихлорметана. Спустя 30 мин выпаривают досуха, остаток обрабатывают 200 мл хлороформа, промывают 100-ным раствором бикарбоната калия, затем водой, сушат и концентрируют. Полученный сироп хроматографируют на силикагеле(200 г, зтилацетат/гексан, 1/3 по объему). Таким образом получают 2,7 г (80 чистого соединения 14 в виде сиропа,ао =+2 (с=1,5; хлороформ). Элементный анализ и ЯМР-спектр подтверждают структуру соединения.м) Деблокирование аномерного угле- родэ, приводящее к соединению 15 или к метил-(2,3-ди-О-бензил-0-хлорацетил- а- О-глюкопиранозил)-уронату,2,7 г (5,3 ммоль) производного 14 растворяют в 80 мл смеси ацетон/вода (5/1 по объему). Добавляют оксид ртути (3,1 г), затем раствор хлорида ртути (3,9 г) в ацетоне (27 мл). Спустя 5 мин соли отфильтровывают. После концентрирования досуха остаток обрабатывают хлороформом. Хлороформную фазу промывают 100/,-ным раствором хлорида калия, затем водой. После выпаривания продукт кристаллиэуют из смеси зтилацетат/гексан. Получают 2 г (80;Ятвердого веществат.пл. 105 - 107 СС.;а 0 = - 4,7 (с=1; хлороформ), Элементный анализ и ЯМР-спектр подтверждают структуру вещества.н) Бромирование аномерного углерода, приводяшее к соединению 16 или к метил- (1-бром,3-ди-О-бенэил-0-хлорацетил-а- О-гл юкопираноэил)-уронату.2 г(4,30 моль) соединения 15 растворяют в 50 мл дихлорметана. Добавляют 4,8 мл (34,4 ммоль) симм-коллидина при 0 С, а затем диметиламмонийбромметиленбромид (17 ммоль).Через 4 ч смесь разбавляют 100 мл дихлорметана, затем выливают в ледяную воду, промывают ледяной водой и растворитель выпаривают. После хроматографирования на силикагеле (20 г, гексан/зтилацетат, 2/1 по объему) получают 2,06 г 900) соединения 16 в виде сиропа,ао =+82,5 (с=1,5; хлороформ), Элементный анализ и ЯМРспектр подтверждают структуру соединения.о) Получение дисахарида 18 или 3-0-ацетил, б-ан гидро-азидо-0-метил-(2,3-ди -0-бензил-0-хлора цетил-В - О-гл ю ко п и ранозил)-уронат-Р-О-глюкопиранозы.Этот синтез основан на конденсации моносахридов 16 и 17,К раствору 870 мг (3,8 ммоль) соединения 17 в дихлорметане добавляют 1 г осушителя, 0,6 г молекулярных сит 4 д в виде порошка и 0,525 г свежеприготовленного карбоната серебра, После перемешивания в течение 2 ч прикапывают при 0 С 670 мг (1,3 ммоль) соединения 16. Спустя б дней твер. дые вещества отфильтровывают. Полученный после концентрирования сироп хроматографируют на силикагеле (50 г, хлороформ/зтилацетат, 4/1 по объему), Получают дисахарид 18 в виде пены (421 мг, 50(,). а р =-17 (с=1; хлороформ), Элементный анализ подтверждает структуру, Изучение ЯМР-спектра подтверждает конфигурацию межгликозидной связи.и) Получение дисахаридов структуры 19 или 1,3,б-три-О-ацетил-азидо-0-метил- (2,3-ди-О-бе н з ил-О-хлора цети лф -О-гл ю копиранозил)-уронат-О-глюкопиранозы путем ацетолиза дисахарида,Получают дисахариды 19 ацетолизом 300 мг соединения 18 растворяют в смеси 4 мл уксусного ангидрида и 0,5 мл свежеперегнан ной трифторуксус ной кислоты. Реакционную смесь перемешивают 10 ч при 18 С, затем выпаривают досуха и выпаривают вместе с толуолом. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (15 г), Элюированием с помощью смеси дихлорметан/зтилацетат (19/1 по объему) получают 282 мг (86;) смеси аномерных ацетатов структуры 19 в виде бесцветного сиропа. Соотношение а - и р -форм, определенное Я М Р-анализом, составляет 4/1. ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру, р) Получение дисахарида 20 общей формулы 11 бромированием дисахаридов 19, Раствор 140 мг ацетатов 19 в смеси 3 мл дихлорметана и 0,3 мл зтилацетата перемешивают при 17 - 18 С в атмосфере сухого аргона в присутствии 140 мг тетрабромида титана (примерно 2 зкв.) в течение 20 ч. После охлаждения до 0 С и разбавления 30 мл дихлорметана смесь промывают ледяной водой, затем 5;-ным водным раствором бромида калия, водой и сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток хроматографируют на колонке ссиликагелем (10 г). Элюированием смесью дихлорметан/этилацетат (19/1 по объему) выделяют в порядке элюирования:бромид 20 формулы (И) (74 мг, 50) в виде бесцветного нестабильного сиропа (немедленно вводят в следующую реакцию); ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру;фракцию (28 мг, 20%), соответствующую исходному непрореагировавшему продукту;малоподвижную фракцию, соответствующую продуктам частичного 0-дебензилирования.П р и м е р 2. Синтез моносахарида 22 или бензил-б-ацетил-0-бензил-бензилоксикарбониламино-дезокси-а-О-глюкопиранозида.Суспензию бензил-О-бензил-бензилоксикарбониламино-дезокси-а-О-глюкопиранозида (произвадное 21) (987 мг, 2 мМ) в безводном 1,2-дихлорэтане (15 мл) перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 30 ч в присутствии Й-ацетиламидазола (2,5 мМ, свежеприготовленный). После охлаждения и разбавления хлорофавмом (50 мл) органическую фазу промывают ледяным раствором 1 М соляной кислоты, водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (50 г). Элюиравание смесью дихлорметан/ацетон (15/1 по объему; дает производное 22 в виде сиропа, кристаллизующегося из смеси этилацетатгексан (759 мг, 71, т,пл, 114 - 115 С; ( а)о =+88 (с=1; хлороформ).П р и м е р 3. Синтез моносахарида 33 или 3-0-бензил-О-метилидопиранураната,а) 63 г З-О-бензил,2-0-изапропилиден- О-глюкофуранозида (соединение 23) растворяют в 500 мл безводного пиридина, Добавляют 85 г трифенилметилхларида и нагревают при 80 С в течение 1 ч. Таким образом вводят тритильную защиту в положение б соединения 23 и получают соединение 24. (а о = - 34,7 (хлороформ).Структура этого соединения подтверждена ИК- и ЯМР-спектрами, элементный анализ корректный,б) Смесь охлаждают до 0 С и добавляют 45 мл хлористого бензоила. Спустя ночь разлагают Избыток реагентов добавлением 300 мл метанола, полученную смесь, выпаривают досуха и обрабатывают хлороформом, Хлароформную фазу промывают водой, высушивают над сульфатом натрия и концентрируют. Таким образам дополнительно 5 10 15 20 25 30 ЗГ:, 45 50 55 вводят бензольную группу в положение 5 иполучают соединение 25.в) Для снятия тритильной защиты полученный сироп растворяют в 400 мл хлоааформа, После добавления 100 мл 5 Мраствора и-толуолсульфокислоты в метаноле раствор оставляют на ночь при 4 С. После промывки водой органической фазыполучают 215 г смеси. Путем хроматографирования смеси на силикагеле(эфир/гексан,2/1 по объему) получают 36 г соединения26, (с)о =65,30 (хлороформ). Структура соединения 26 и утверждена ИК- и ЯМРспектрами,г) Метилиравание карбокслльнал функции в положении б соединения 26.Соединение 26(1,88 г) растворяют в ацетоне(20 мл). При - 50 С прикапывают 3,5 млраствора трехокиси хрома (13 г) в 3,5 МН 2304(29 мл), Дают температуре повышаться и выдерживаю 1 ч в этих условиях, Затемреакционную смесь выливают на лед и продукт зкстрагируют хлороформом. Послепромывки водой и высушивания выпаривают досуха, Получают соединение 27.Полученную смесь растворяют в метаноле (20 мл), затем добавляют 10 мл 1 н,раствора гидраксида натрия и оставляют наночь при комнатной температуре, Реакционную смесь затем пропускают через колонку (25 мл) са смолой Вовех 50 в Н -форме,предварительно промытой метанолом, Путем концентрирования элюата получают соединение 28.Это соединение растворяют в эфире иметилируют классическим способом с помощью диазометана. Получают после выпаривания соединение 29 (1,08 г 70,4,),(а) 0 =-27 (хлороформ). Элементный2 О.анализ соединения 29 корректный.Его структура, кроме тога, подтвержденаИК- и ЯЯР-спектрами,д) Изомеризация ОН-группы в положении 5 соединения 29.К охлажденному до -20 С растворутрифтарметансульфанатного ангидрида (0,8мл) в дихлорметане (16 мл) прикапываютраствор пиридина (0,8 мл) в дихлорметане (8мл), Затем при -10 С прикапывают 80 мгсоединения 29, растворенного в дихлорметане (8 мл). Спустя 1 ч при - 50 С реакционную смесь выливают в смесь воды со льдом(8 мл), содержащую 160 мг бикарбоната натрия. Перемешивают до разделения органической и водной фаз. Органическую фазупромывают 30;ь-ной соляной кислотой, водой, насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают, концентрируют иполучают соединение ЗО.Сироп обрабатывают диметилформамидом (10 мл). Добавляют трифторацетат натрия (1,6 г) и нагревают при 80 С в течение 3 ч. Таким образом получают соединение 31, После выпаривания обрабатывают дихлорметаном, полученный раствор промывают водой и высушивают, Остаток обрабатывают метанолом, затем растворитель спустя 1 ч выпаривают. После хроматографирования на колонке (эфир/гексан, 2/1) получают соединение 32(450 мг, 56,2%); ао = - 3 (хлороформ). Структура соединения подтверждена ИК- и ЯМР-спектрами. Элементный анализ корректен,е) Образование пиранового цикла соединения ЗЗ.Соединение 32 (200 мг) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты с водой (9/1). Спустя 15 мин растворители выпаривают. Остаток кристаллизуют из смеси этилацетат/гексан и получают 110 мг соединения 33, т.пл, 125 - 126 С,ИК-спектр (хлороформ) т, см; 3450 (ОН), 3080, 3060, 3080, (СН 2:бензил) и 1740 (СООСНз).ЯМР-спектр(д, ТМС), м.д,: 3,75(синглет, ЗН+, СООМе), 4,98 (1 Н ), 7,30(синглет, 5 Н, С 6 Н 5). а 0 =+130 (метанол).Вычислено, %: С 56,37; Н 6,08С 14 Н 1807Найдено, % С 56,17; Н 5,85,П р и м е р 4. Синтез производного 38 или З-О-бензил-0-хлор-ацетил,2-0-третбутоксиэтилиден Р - -метилидопирануроната.а) Реакция ацетилирования соединения 33, приводящая к 1,2,4-три-О-ацетил-З-О- бенз ил- а- Р - -метил идоп ирануронатам (производные 34 и 35),Раствор соединения 33 (3 г) в смеси безводного пиридина (20 мл) и уксусного ангидрида (10 мл) перемешивают при 0 С в присутствии влаги в течение 5 ч, Реакционную смесь выпаривают досуха, выпаривают с толуолом (4 х 20 мл) и высушивают под вакуумом. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (150 г), Элюирование смесью толуол/этилацетат (4/1 по объему) дает в порядке элюирования;фракцию головного соединения фура- новых производных,соединение 34 (аномер а ), сироп (170 мг, а о =-43 (с=1; хлороформ), ЯМР- спектр (СОСз) д: 6,23 (синглет, 1 Н, Н);соединение 35 (а номер Р), кристаллизующееся из смеси эфир/гексан (2,688 г, 63%), т,пл. 112 - 113 С, а о =+9 (с=1; хлороформ), ЯМР-спектр (СОСз) д: 6,08 (дублет,1 Н, Н - 1), 31,2= 1,5 Гц), 50 55 5 10 15 20 25 30 35 40 Аномеры а и Р 34 и 35 не разделяются, если осуществляют непрерывный ряд описанных синтезов, Их смесь используют непосредственно в виде сиропа для последующих реакций,б) Реакция бромирования, приводящая к соединению 36 или 2,4-ди-О-ацетил-З-О- бензил- а- -метилидопирануронилбромиду,Смесь ацетатов 34 и 35 (212 мг; 0,5 мМ) растворяют в безводном дихлорметане (5 мл) и безводном этилацетате (0,5 мл), Тетрабромид титана (250 мг, 0,7 мМ) добавляют за один раз и реакционную смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре в отсутствие влаги. После охлаждения до 0 С и разбавления дихлорметаном органическую фазу промывают ледяной водой (3 раза), высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают для получения производного 36 в виде слегка окрашенного сиропа (217 мг, 96%). ЯМР-спектр(СОС 3) д: 6,41 (синглет, 1 Н, Н - 1), Это соединение очень неустойчивое, его немедленно вводят в следующую реакцию.в) Получение ортоэфира 37 или 4-0-ацетил-З-О-бензил,2,0-трет-бутоксиэтилиденметилизопирануроната.Раствор бромида 36 (свежеприготовленный из 2,122 г, 5 ммоль смеси ацетатов 34 и 35 в безводном дихлорметане) (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере сухого аргона. Последовательно добавляют симм-коллидин (2,65 мл, 20 ммоль) и безводный трет-бутанол (3 мл, 30 ммоль) и реакционную смесь перемешивают 15 ч в этих условиях, После разбавления дихлорметаном (50 мл) органическую фазу промывают водным насыщенным раствором бикарбонатэ натрия, водой, высушива- ют над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (120 г). Элюированиесмесью гексан/этилацетат (2/1 по объему), содержащей 0,5% триэтиламина, дает соединение 37 в виде чистого сиропа (1,54 г,70% из 34 и 35)а О =-23 (с=1; хлороформ), ЯМР- спектр (СОСз) д: 5,48 (дублет, 1 Н, Н - 1),.11,2= 2,5 Гц),г) Монохлорацетилирование ортоэфира 37.Раствор ортоэфира 37 (220 мг, 0,5 мМ) в безводном метаноле (10 мл) охлаждают до -20 С при перемешивании в атмосфере сухого аргона, добавляют безводный карбонат калия (40 мг) и реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч в этих условиях, Твердые вещества отсасывают, фильтрат выпаривают и остаток обрабатывают хлороформом (50 мл). Органическую Фазу быстро промывают три раза ледяной водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток немедленно растворяют в безводном пиридине (4 мл) и безводном дихлорметане(2 мл). После охлаждения до - 20 С в атмосфере сухого аргона прикапывают раствор хлорацетилхлорида (0,1 мл, 1,24 мМ, свежеперегнанный) в безводном дихлорметане (1 мл), перемешивают 30 мин и выливают в смесь воды со льдом (100 мл). После перемешивания в течение 15 мин смесь экстрагируют хлороформом (Зх 20 мл), Органические фазы промывают ледяной водой, водным 2%-ным раствором бикарбоната натрия, водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток быстро хроматографируют на колонке с силикагелем (12 г). Элюирование смесью гексан/этилацетат (5/2 по объему), содержащей 0,2% триэтиламина, дает в порядке элюирования,насыщенное соединение 39 (15 мг, 8%, далее не используется),отоэфир 38, сироп (145 мг, 61% из 12);1 а) о О=+19 (с=1, хлороФорм), ЯМР (СВС 1 з) д; 5,45 (дублет, 1 Н, Н - ;1, 31,2=2,5 Гц); 5,24 (дублет-дублет, 1 Н, Н - 4, дз, 1=2,5 Гц; 4,5=1,5 Гц); 4,00 (синглет, 2 Н, С 1 - СН 2 - СОО - ), который используется на следующей стадии.П р и м е р 5. Синтез дисахарида 41 оащей формулы ( 1) или бензил-О-ацетил-0-бензил-бенэилоксикароониламино-дезокси-0- (2-0-ацетил)-3-О-бензил-а -1 метилидопирануронил)-а -В-глюког 1 иранозоида,а) ПОлучение дисахарида 40 или бензилб-О-ацетил-0-бензил-бензилоксикарбониламино-дезокси-0-(2 -0-ацетил)-3-0- бензил-0-хлорацетил- а.-метилидопирануронил)-а-О-глюкопиранозида,Раствор ортоэфира 38 (284 мг, О,б ммоль) и соединения 22 (214 мг., 0,4 ммоль) в безводном хлорбензоле (12 мл) нагревают при 140 С, перемешивании и легком токе сухого аргона, После медленной отгонки 10 мл растворителя в течение 30 мин прикапываат раствор перхлората 2,б-диметилпиридиния (0,006 ммоль, свежеприготовленный) в хлорбензоле (4 мл) с одновременной отгонкой растворителя (4 мл). Реакционную смесь перемешивают 1 ч с добавлением свежего растворителя (10 мл) и одновременной отгонкой таким образом, чтобы реакционный объем оставался постоянным и был равен 4 мл. После охлаждения и разбавления хлороформом органическую Фазу промыва. ют насыщенным раствором бикарбоната на" трия, водой, высушивают над сульфатом 5 10 15 20 25 30 35 40 натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силика;елем(40 г), Элюирование смесью гексан/этилацетат (4/3 по объему) дает в г 1:,рядке элюирования:продукт 22 (120 мг, 65%);дисахарид 40, кристаллизуюшийся из смеси ефиргексен г 111 мг, ЗОГк), г.пс, 1 сс С, ао =+35 (с=1; хлороформ,; ЯМР- спектр (СОС 1 З) подтверждает ожидаемую с груктуру.б) Удаление монохлсрацегильной группы,Смесь дисахарида 40 (56 мг, 0,06 ммол ь) и тиомочевины (7 мг, О 1 ммоль) в пиридине (2,5 мл) и абсолютном этаноле (0.5 мл) перемешивают при 1000 С в течение 30 мин, После охлаждения и упаривания досуха остаток обрабатывают смесью вода/хлороформ (1/1 по объему) (40 мл). Органическую фазу промывают водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (2 г), Элюирование смесью этилацетат/гексан (2/1 по объему) дает дисахарид 41 Формулы (111), кристаллизующийся из эфира (46 мг, 30%), т.пл. 146-147 С: а 1 п =44 С (с=1; хлороформ), ЯМР-спектр (СОС 1 з) подтверждают ожидаемую структуруП р и м е р б. Синтез тетрасахарида 43, а) Реакция конденсации дисахаридов Формулы (11) и (111) (совдинения 20 и 4";),Смесь 64 мг (80 мМ) свежеприготовленного бро 1 ида 20, 51 мг (60 мк/М) срединения 41 и 80 мг молекулярного сита 4 А в виде порошка в ",.5 мл безводного дихлорэтана перемешивают 0,5 ч при комнатнсй температуре в атмосфере сухого аргона, затем охлаждают до -200 С, Последовательно добавляют 20 мл (150 мкмггль) симм-коллидина и 31 мг.(120 мкмоль трифторацетата серебра. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при - 20 С, затем оставляют до повышени температуры до комнатной в течение 15 ч. После разбавления 50 мл дихлорметана твердые вещества отсасывают и фильтрат промывают водным ледяным раствором 1 М соляной кислоты, затем водой (два раза), Фильтрат высушивают над сульфатом натрия, фильгруют и выпаривают,Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (8 г, гель 230-400 меш). Элюирование смесью гексан/этилацетат(4/3 по обьему) позволяет выделить 37 мг тетрасахарида 42 (выход 39%) в виде бесцветного стекла, ( а )о=,:+ 56 О(С=О,б; хлороформ); ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру.10 15 20 25 35 40 45 50 55 Элюирование смесью этилацетат/гексан (2/1 по объему) позволяет выделить 23мг (44%) исходного продукта 41.б) Реакция О-дихлорацетилирования,Раствор 36 мг (23 мкмоль) тетрасахарида 42 в смеси 1,25 мл пиридина и 0,25 млабсолютного этанола нагревают 20 мин при100 С в присутствии 7 мг (100 мкмоль) тиомочевины, После охлаждения и выпаривания досуха остаток обрабатывают 20 млводы и экстрагируют хлороформом (5 х 5 мл).Органические фазы промывают 10%-нымводным раствором бисульфата натрия, водой,сушат над сульфатом натрия, фильтруют ивыпаривают, Остаток хроматографируют наколонке с силикагелем (3 г), Элюируя смесьюэтилацетат/гексан (3/2 по объему), получают 27 мг (80%) производного 43 в виде бесцветного стекла, а)о +61 (с=0,8;го охлороформ); ЯМР-спектр подтверждаетожидаемую структуру,П р и м е р 7. Синтез пентасахарида 50общей формулы (1),а) Осуществляют реакцию конденсациимежду тетрасахаридом 43 и моносахаридом44 общей формулы (И),Смесь 27 мг (54 мкмоль) бромида 44формулы ( Ч), 26 мг (18 мкмоль) тетрасахаоида 43 и 50 мг молекулярного сита 4 А в видепорошка в 0,8 мл дихлорэтана перемешивают 0,5 ч при комнатной температуре в атмосфере сухого аргона, затем охлаждают до- 20 С. Последовательно добавляют 16 мл(120 мкмаль) симм-коллидина и 26 мг (100мкмоль) трифторацетата серебра и реакционную смесь перемешивают 18 ч при повышении температуры до комнатной,После разбавления 50 мл дихлорметанатвердые вещества отсасывают и фильтратпромывают охлажденным 1 М водным раствором соляной кислоты, затем два раза водой. Высушивают над сульфатом натрия,фильтруют и выпаривают,Остаток храматографируют на колонкес силикагелем (5 г; гель 230-400 меш), Элюируя смесью гексан/эгилацетат(4/3 по объему), извлекают 30 мг (90 /0) пентасахарида45 в виде бесцветного стекла, а)0 =672 О о(с=1; хлороформ), ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру. В частности дляаномерных протонов глюкозаминных единиц находят сдвиги (д, ТМС) 5,36 и 5,52 мд,соответственно.б) Удаление ацетил ьн ых груп и из и роизводного 45.Раствор 28 мг пентасахаоида 45 в смеси2,5 мл 1,2-диметоксиэтана и 0,8 мл метанолаохлаждают до 0 С при перемешивании, Затем добавляют 1 М раствор гидроксида натрия по каплям в течение 10 мин,Реакционную смесь перемешивают 1 ч при ОС, затем 12 ч при комнатной температуре. Г 1 осле охлаждения да 0 С добавляют 3 мл 1 М соляной кислоты и молочного цвета смесь немедленно экстрагируют хлороформом (5 х 5 мл), Органические фазы промывают водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток раствоаяют в 2 мл метанола и обрабатывают эфирным раствором диазометана (избытком вплоть до устойчивости желтого окрашивания) в течение 0,5 ч.После выпаривания досуха остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (2 г, гель 230 - 400 меш). Элюирование смесью дихлорметан/метанол (15/1 по объему) позволяет извлечь 18 мг (72%) пентасахарида 46 в виде бесцветного стекла, а)о =+5720 о (с=1; хлороформ), Ожидаемая структура одтверждена ЯМР-спектром. в) Сульфатирование ОН-групп соединения 46,л, раствору соединения 46 (22 мг) в диметилформамиде (0,5 мл) добавляют комплекс триметиламина с 50 з (22 мг, 2,5 экв,(ОН). Реакционную смесь нагревают при 50 С примерно 14 ч. Затем добавляют снова комплекс триметиламина с 50 з (10 мг) и оставляю на 24 ч. Добавляют в реакционную смесь метанол (0,5 мл) и хлороформ (0,5 мл. Раствор вводят В верхнюю часть кОлОнчы с Сефадексом е Н, уравновешенным в смеси хлороформ/метанол (1/1 по объему). Содержащие сульфатированный продукт фракции объединяют и растворитель выпаривают. Оста 1 ок в виде стекла (30 мг) хроматографируют на силикагеле (10 г) в растворителе, состоящем из 3 ч, смеси этилац-.тат/пиридин/уксусная кислота/вода (6/2/О, 6/1 па обьему) в 2 ч. смеси этилацетат/уксусная кислота/вода (5/5/1/3 по объемуФракции, содержащие искомый продукт, обьединяют и концентрируют. После выпаривания растворителей полученный остаток растворяют в метаноле, к которому добавлена вода, затем пропускают через колонку с Ооаех 50 щх 4, в М а -форме, уравнов-;.;.еннылф в смеси метанол/вода (50/50 по обьему). Таким образом получают натриевую соль (соединение 47).г) Гидрирование соединения 47.Вышеполученный продукт растворяют в метаноле (3,7 мл), к которому добавлена вода (0,8 мл). В этот раствор добавляют катализатор (Рд/С, 6%-ный, 40 мг) и перемешивают в атмосфере водорода в течение 5 дней, После отфильтровывания катализатора УФ-спектр полученного раствора показывает полное исезновение