C12N 9/82 — аспарагиназа

Номер патента: 303778

Опубликовано: 01.01.1971

Авторы: Альфред, Иоханн, Клаус, Отто, Роберт, Федеративна, Эккарт, Эрих

МПК: C12N 9/82

Метки: всесоюзная, оатейтно-тнхшезнаи

...С. При интенсивном вспениванип вследствие начинающегося образования азота рекомендуется добавлять в реакционную смесь несколько капель трибутилфосфата. Для фракционированного осажде ппл смешанного с мочевиной раствора в реакционную смесь добавляют 40 об. % водного раствора полиэтиленгликоля (мол. вес 1550), состоящего из 50 вес. ч. полиэтиленгликоля и 50 вес, ч. воды, размешивают ЗО мин, Образо вавшийся осадок отделяют на охладительнойцентрифуге. раствор выбрасывают, Полученный осадок диспергируют в ледяном ацетоне и после цетрифугированил сушат в вакууме при температуре около 25 С. Обычно доста тоо вал сха, созлаиаемого издоструЙхасосом, при необходимости можо использовать масляньй насос. Полученная частично лезаминированная...

Номер патента: 315365

Опубликовано: 01.01.1971

Авторы: Альфред, Бильфрид, Зрнх, Иностранна, Клаус, Отто, Федеративна, Эккарт

МПК: C12N 9/82

Метки: выделения, ферментов

...можно высушить, а затем извлечь 10 лиалкиленгликоль, В частности НОлиэтиленгликоль с помощью ацетона или друтих растворите чейЦелесообразно весь процесс выделенияферментов производить прн температуре 0 - 40-С и любых значениях рН, предпочтительно 4,0 - 1 0,0.Пример 1. 1000 лг, раствора, полученного из 50 г сырой 1,-аснарагиназы с активностью 112 ео 1,г, охлаждают до 3 С и смешивают с 500 л.г 50%-ного раствора полиэтиленгликоля. Осадок выделяют ценгрифугированием.3153 оч 5 Таблица 2 Активность из расчета на сырую исходную аспарагиназу, 9, Активность,ед/мгВыход, г10 Таблица 1 1,381 0,362 0,155 1,000 15 790 1930 640 180 38 24 3 6 Активность из расчета на исходную сырую аспарагиназу, о,Активность,ед/мгС оста в и тель Н. Сел и верстова...

Номер патента: 404277

Опубликовано: 01.01.1973

Автор: Иностранна

МПК: C12N 9/82

Метки: l-аспарагиназы, выделения

...повторно суспендируют, добавляя водопроводную воду до общего объема 20 л,В полученную суспензию клеток, размешивая, вливают 80 л ацетона, добавляют 20 слР 2,5%-ного акрамина Р, отделяют выпавшие бактерии в центрифуге с,верхним отводом жидкости,и клеточную массу повторно суспендируют в водопроводной водедобавляя ее до общего объема 20 л.Для экстракции из клеток бактерий Е-аспарагиназы суспензию размешивают в течение 4,5 час при ЭОС. В течение этого времени посредством добавки 1 Х патронного щелока или 10%-ной уксусной кислоты поллерживают рН на значении 7,5 - 7,8, Затем охлаждают до 20 С.,В экстрагированную клеточную суспензию, ,размешивая, вливают 5 л 2,5%-ного акрамина Я,и отделяют в центрифуге с верхним отводом жидкости образовавшийся...

Номер патента: 406877

Опубликовано: 01.01.1973

Авторы: Аузан, Вители, Гвозд, Гривин, Яковлева

МПК: C12N 1/20, C12N 9/82

Метки: carotovora, erwinia, l-аспарагиназу, продуцирующий, штамм

...образует 1.-аспарагиназу на средах, содержащих в качестве источника азота пептон, гидролизат казенна, фосфат аммония; в качестве источника углерода - глюкозу, сахарозу, глицерин, цитрат натрия, аспарагин.П р и м е р 1. Посевной материал выращивают в течение 24 - 48 час на картофельном агаре. Состав ферментационной среды (%):Глюкоза 0,1Гидролизат казеина 0,5 Дрожжевой экстракт 0,5 КНР 04 0,3Начальное значение рН 7,7. После 18 час культивирования удельная активность 1.-аспарагиназы 7,1 Ме/мг белка, выход биомассы 1,55 г/л по сухому весу, При замене глюкозы на сахарозу удельная активность 1.-аспарагнназы составляет 6,3 Ме/мг белка, биомасса - 1,73 г/л. При замене глюкозы на 1.-аспарагпн удельная активность 1-аспарагнназы достигает 12...

Номер патента: 436085

Опубликовано: 15.07.1974

Авторы: Всесоюзный, Денисов, Максимов, Молодова, Фонд

МПК: C12N 9/82

Метки: l-аспарагиназы

...Получают раствор Е-аспарагиназы в полунасыщенном растворе сульфата аммония, очищенный от значительной части балластных белков. Для извлечения из него 1,-аспарагиназы добавляют сульфат аммония почти до полного насыщения (90 - 100%).Предложенным способом получают .-аспарагиназу с удельной активностью 15 - 25 МЕ/мг с выходом 70 - 80% подкисленного экстракта.Для определения удельной активности Е-аспарагиназы, после очистки ее нагреванием в полунасыщенном растворе сульфата аммония и осаждения ее из раствора, насыщенного той же солью, вещество предварительно очищают от примеси сульфата аммония хроматографией через гель сефадекс 6-25. ПоП р и м е р 1. 5 г ацетонового порошка Е. со 11 смешивали со 100 мл воды и нагревали при 37 С 2...

Номер патента: 537114

Опубликовано: 30.11.1976

Авторы: Дайя, Елизаровская, Жагат, Звиргзда-Звиргздиня, Клейнер, Пояркова

МПК: A61K 38/50, C12N 9/82

Метки: аспарагиназы, веществ, пирогенных, удаления

...белка растворяют в 230 мл апирогенной воды, подкисляют до рН 5,2 - 5,4, охлаждают и фракционируют раствором ПЭГ молекулярного веса 1500 как указано в примере 1. Осадок, выпадающий при концентрации ПЭГ 5 - 10/о, растворяют и центрифугируют. Получают 173 мл раствора с удельной активностью 120 МЕ/мг белка. Проводят последовательно первую, вторую и третью кристаллизации аналогично примеру 1, с той разПример 3. 20 г лиофилизированного сырца 1,-аспаратиназы с удельной активностью 82 МЕ/мг белка растворяют в 230 мл воды и фракционируют водным раствором ПЭГ молекулярного веса 1500 аналогично примеру 1. Осадок, выпадающий при концентрациями ПЭГ 5 - 10 о/растворяют и центрифугируют. Получают 197 мл раствора с удельной активностью 170 МЕ/мг...

Номер патента: 583622

Опубликовано: 05.12.1977

Авторы: Биндука, Дауварте, Жагат, Шидловска, Шпрунка

МПК: A61K 31/341, A61P 35/02, C07D 307/52 ...

Метки: активностью, амиды, аспарагиназы, обладающие, противолейкозной, фуран-3-карбоновые

...5 раз, Первую дозу вводят через 72 ч после имплантации лейкоза.2,4,5-Триметилфуран-З-карбоновый амид аспарагинаэы в пяти опытах для каждой дозы увеличивает в среднем продолжительность жизни подопытных мышей:200 МЕ/кг на 47500 МЕ/кг на 451000 МЕ/кг на 40.2,5-Диметилфуран-З-карбоновый амид аспарагиназы продлевает жизнь. мышей - опухоленосителей при этих дозах соответственно:200 МЕ/кг на 86500 МЕ/кг на 671000 МЕ/кг на 58Животные, получившие нативный фермент, имеют продлевание жизни относительно контроля:200 МЕ/кг на 30500 МЕ/кг на 301000 МЕ/кг на 38. При исследовании эффекта полученных соединений на имплантированнуюасцитную опухоль Эрлиха 2,5-диметилФуран-карбоновый амид аспарагиназыпри дозах 2000 МЕ/кг продлевал жизньв среднем на...

Номер патента: 571071

Опубликовано: 30.05.1981

Авторы: Биндука, Гайлите, Дауварте, Жагат, Сухова, Шпрунка

МПК: A61K 31/4709, A61K 38/50, A61P 35/02 ...

Метки: активностью, нитрофурилполиенхинолинаспарагиназы, обла-дающие, противолейкозной

...идентичнопримеру 1 с использованием в качестве ацилирующего агента 57 мг (1,80Х 10 М) хлорангидрида 7-хлор-4-(5-нитрофурил)-1,3-бутадиенил --хинолин-карбоновой кислоты, Лио"Филизированный препарат содержит119 м,с/мг белка или 71 м.е./мг сухого веса; имеет р о 5,30, оптимумрН 7,5, Степень ацилирования 11,5ИН 2-групп Препарат повышает выживаемость мышей на 38,П р и м е р 5. Проводят в усло 55виях, описанных в примере 1, с использованием в качестве ацилирующегоагента 23,7 мг (70 мкм) хлорангидрида7-метокси-2-(5-нитрофурил) -",52 мкм 7-аспарагиназы (184 м,е./мгбелка/конц. белка 16,2 мг/мп).Препарат после анализа стабилизируют добавлением 1 мг глицина/мгбелка.6 Ы Препарат содержит 179 м.е./мг белка, имеет р 0 5,35, степень ацилирования 7,5...

Номер патента: 782363

Опубликовано: 23.01.1982

Авторы: Березов, Лебедева, Орехович

МПК: A61K 38/50, C12N 9/82

Метки: выделения, гиназы, глутаминазы-аспара, препарата, ферментного

...из ацетонового порошкамикробной массы 0,05 М калийфосфатнымбуфером рН 6,9 - 7,0 и для удаления нуклеиновых кислот в суспензию вводят протаминсульфат. Смесь выдерживают в течение 1 ч и выпавший осадок удаляют, например; центрифугированием или фильтрованием, К супернатанту, представляющему собой раствор глутамйназы-асйарагиназы с примесями, добавляют глутамат Ха инагревают раствор в течение 15 - 30 минпри температуре 50 - 54 С. Выпавший осадок денатурированных балластных. белковудаляют центрифугированием. Супернатанткойцентрируют. Полученный целевой продукт используют для дальнейшей очистки.П р и м е р 1, Культуру Рзецйотопазацгап 11 аса ВКМвыращивают в ферментере емкостью 100 л на среде с 0,5% глутамата Ха с добавлением солей в...

Номер патента: 1713929

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Вина, Гривиня, Жук, Иганс, Лопатнев, Озолин, Савенкова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/82

Метки: l-аспарагиназы

...НИИ стан- П р и м е р 1, Посевной материал Епмиа дартизации и контроля медицинских саготочога 268 выращивают в колбах на кабиологических препаратов им. Л. А. Тарасе- чалке (220 об/мин) при 37 С в течение 18 ч вича. на среде (по 50 мл в каждой колбе) следуюКультуры хранят на мясо-пептонном 40 щего состава, мас;%:агаре (2; агара) при комнатной температу- О-галактоза 1,0 ре 18-20 С) и пересевают через каждые 3-4 Сульфат аммония 0.5 мес. Для работы используют свежепересе- Фосфорная кислота 0,35 янную 12- или 24-часовую культуру, Едкий кали 0,65Посевнойматериал выращивают в колСульфат магния 0,02 бах на среде, содержащей О-галактозу в ка- Кукурузный экстракт 0,25 честве источника углерода в количестве Вода Остальное 0.9 - 1;1...

Номер патента: 788727

Опубликовано: 20.07.1999

Авторы: Березов, Родькин, Смирнова

МПК: C12N 9/82

Метки: глутаминазы-аспарагиназы

Способ получения глутаминазы-аспарагиназы, состоящей в том, что клеточное сырье подвергаются промораживанию в трис-буфере, рН 7,2 - 7,4, при -4 - -6oC, затем разрушают растиранием с последующим отделением целевого продукта центрифугированием, отличающийся тем, что, с целью упрощения, ускорения и удешевления процесса, в качестве сырья используют семена пшеницы безостой (Triticum I), промораживание проводят в течение 2 - 4 ч 2 - 5 раз, а центрифугирование проводят при 8 - 10 тыс. об/мин при 0 oC -2oC в течение 5 - 10 мин.