Всесоюзная; оатейтно-тнхшезнаи;

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ Я И Я 303778 Соаз Советских Социалистических РеспубликК йАТЕИТУ ависимый от патента М д 7/02 837/23-4.Х.1969 ( 1 аявлено Р 1803782.6, ФРГ Р 1920045.4, ФРГ Билл ете;ь16 8.Х.1968,9,1 Ч,1969,1 риорит Катхитет па поле ивобретеиий и аткрц при Совете Ыииист СССРДК 547.964.4.05(088.8) ии Опубликовано 13 Л.19 Дата опубл,отап л оппсанпл 28 Л 1.19 Авторыизобретения Иностранцы ед Аренс, Эрих Роберт Бирлинг внал Республик енб оха лаус Бауер,ттер ккарт Ирион, Ал Отто Вагнеанин Иностпа Фарбенфабр деративнал Реаявите НИЯ ЧАСТИЧНО ДЕЗАМИНИРОВАННО .-АСПАРАГИНАЗЪ Б П 2 Изобретениеферментов и пченил новых,тичпо дезамицтор ые могутНоиые соедис.тики по сравнезамп.Деза минировлотой является ы асти химии способ полуературе часрагиназ, ков медицине.характерис- -зспарапшаотноситсяредставляетеописанныхированныхайти примения имеютнию с обыч к облсобойв лит1.-аспанениетучшиеьми 1 истой кис реакцией. ание пептидов аз широко известно Предлагаемый способ дезаминирования 1.- аспарагиназы в литературе не описан и заклю:ается в том, что 1.-аспарагиназу в растворителе подвергают реакции обменного разложения с азотистой кислотой или соединениями, образуощимч азотисгую кислоту, обычно в присутствии растворимого в воде нуклеофильного акцептора. В качестве соединений, образующих азотистую кислоту, наиболее применимы нитриты щелочных и щело:ноземельных металлов, изоамилнитрит и окислы азота. Реакцию проводят в присутствич воды при рН предпочтительно около 5. Возможно добавление в реакционную среду органических растворителей. Лучше всего работать в области температур от 0 до 5 С. Степень дезаминирования легко регулировать посредством выбора температуры реакции, причем последнюю обычно заканчивают, доляя мочевину или устанавлив7 Пример 1. 10 г 1.-аспарагиназы (степень5 чистоты около 180 ед/лг субстанции) раствори:от и 70 л т волы, лооаиллют 500 лг нптрвта натрия и охлаждают до 0 С. После охлаждения рибавллю; 1. уксусную кислоту ло р 1-1 равного 5 и смесь перемешивают приблизи тельно 12 час при 0 С. При интенсивном вспениванип вследствие начинающегося образования азота рекомендуется добавлять в реакционную смесь несколько капель трибутилфосфата. Для фракционированного осажде ппл смешанного с мочевиной раствора в реакционную смесь добавляют 40 об. % водного раствора полиэтиленгликоля (мол. вес 1550), состоящего из 50 вес. ч. полиэтиленгликоля и 50 вес, ч. воды, размешивают ЗО мин, Образо вавшийся осадок отделяют на охладительнойцентрифуге. раствор выбрасывают, Полученный осадок диспергируют в ледяном ацетоне и после цетрифугированил сушат в вакууме при температуре около 25 С. Обычно доста тоо вал сха, созлаиаемого издоструЙхасосом, при необходимости можо использовать масляньй насос. Полученная частично лезаминированная 1.-аспарагнназа содержит еще 90% первоначального аминного азота. ЗО Выход 80 - 90 аЬ от теории.90 70 70 Составители И. ГудковаТскрсд А. А, 1(амышникова 1(оррскторы: А. Николаеваи В, Петрова Редактор Т. Г, Шарганова Заказ 1777/10 Изд. Уо 733 Тираж 473 ПодписноеЦНИИПИ 1;о.лнтс 1 а по дслаги изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д. 4,5 Типография, пр. Сапунова, 2 Аналогично получают частично дезаминированные соединения, приведенные в таблице. Сравнимые результаты можно получить, если реакцию обменного разложения проводить в присутствии растворителя.Выход 80 - 90% от теории.П ример 2. 10 г 1.-аспарагиназы (степень чистоты около 180 ед/лг субстанции) растворяют приблизительно в 100 ял воды, добавляют 1 г нитрита натрия, 1 г ацетата натрия и 500 гнг салнцнловой кислоты, охлаждают раствор до 4 С и после охлаждения устанав,швают с номощгно 1 Х уксусной кислоты рН 4,8, Смесь выдерживают приблизительно 14 - 16 час при 4 С. Затем в раствор добавляют 1 г мочевины, нагревают его до комнатной температуры и после этого проводят фракционированное осаждение реакционной смеси, добавляя 40 об. % водного раствора полиэтиленгликоля (мол. вес, 1550), состоящего из 50 вес. ч. полиэтиленгликоля и 50 вес. ч. воды, 5 После 30 мин стояния осадок отделяют наохладительной центрифуге, диспергируют в ледяном ацетоне и снова центрифугируют, остаток высушивают в вакууме при комнатной температуре.10 Выход 80 - 90/в от теории.Пример 3. Поступают, как в примере 1,только вместо салициловой кислоты добавляют 100 лг фенола.П р и м е р 4. Поступают, как в примере 1, 15 но вместо салициловой кислоты добавляют300 мг сульфонсалициловой кислоты,Предмет изобретения1. Способ получения частично дезаминиро 20 ванной 1.-аспарагиназы, отличающийся тем,что 1.-аспарагиназу подвергают реакции обменного разложения с азотистой кислотой илис соединениями, образующими азотистую кислоту,25 2, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтореакцию проводят в присутствии растворимого в воде нуклеофильного акцептора.