Способ выделения ферментов

ОЛИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских Социалистических Республик615,6, ФРГ 157.7, ФРГ етень28 Комитет по делам аобретеиий и открытий при Совете Министров СССР,Х 1.197 та опубликования описан Авторыизобретения Иностранцы Клаус Бауер, Вильтррид КаЯльфред Яренс и тккарт (Федеративная РеспубликаИностранная фирвфарбенфаорикен Ване (Федеративная Республика Отто Вагне уфманн, ЗрИрионГермании) уенбуш,аявитель АГерманин) С 110 СОЬ ВЫДЕЛЕ им обра 20 й 1 - 30%, одят 40 - ена, пред- доститКе 40%, же В раствор фе лучше 1 - 10%,60%-ный водны почтительно пол иия его концент лательно 18 - 3 Образующийсрмента, содержащи 1.-аспарагиназы, вв раствор полиалкил иэтиленгликоля, до ации в растворе 15 - %.осадок отделяюг ен грифу Зависимый от патентаЙзобретение относится к ферментной промышленностив частности к способу выделения ферментов, например 1,-аспарагиназы.Известны различные способы выделения ферментных препаратов. Например, .-аснарагиназу выделяют из культуральной жидкости, полученной при выращивании микроорганизмов, путем введения в нее многоатомных спиртов с последующим добавлением органического растворителя. 10 Предлагается в качестве много атомных спиртов использовать полиалкилены с молекулярным весом не более 10000, предпочтительно 1000 - 5000, в таком количестве, чтобы концентрация полиалкилена в растворе сос тавляла 40 - 60%, В качестве полиалкилсна можно применять полинропилен- или полиэтиленгликоль.Способ осуществляется следующ ированием, и в полученный фугат вновь вводяг нолиалкилен. Эту операцию повгоряюг несколько раз. Осадки сооирают н удаляют из них нолиалки;ен, растворяя их в воде и удаляя нерастворимые компоненты.Из раствора, освобожденного от нолиалкилена, осаждаог-аспарагиназу, вводя в него органический растворнгель, например избыток ацетона, диизонроннловый эфир.Из растворенного осадка нолиэтиленгликоль можно удалить пугем диалнза и выделить ферменг, выморажнвая не поддающиеся диализу компоненты,Кроме того, осадок можно высушить, а затем извлечь 10 лиалкиленгликоль, В частности НОлиэтиленгликоль с помощью ацетона или друтих растворите чейЦелесообразно весь процесс выделенияферментов производить прн температуре 0 - 40-С и любых значениях рН, предпочтительно 4,0 - 1 0,0.Пример 1. 1000 лг, раствора, полученного из 50 г сырой 1,-аснарагиназы с активностью 112 ео 1,г, охлаждают до 3 С и смешивают с 500 л.г 50%-ного раствора полиэтиленгликоля. Осадок выделяют ценгрифугированием.3153 оч 5 Таблица 2 Активность из расчета на сырую исходную аспарагиназу, 9, Активность,ед/мгВыход, г10 Таблица 1 1,381 0,362 0,155 1,000 15 790 1930 640 180 38 24 3 6 Активность из расчета на исходную сырую аспарагиназу, о,Активность,ед/мгС оста в и тель Н. Сел и верстова Техред 3. Н, Тараненкб Редактор Т. Г. Шарганова Заказ 3252118 Изд. М 1324 Тираж 473 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по дедам изобретений и открытий прн Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 Пз оставшегося раствора с помощью 100 мл 50 оо-ного раствора полиэтиленгликоля осаждшот дополнительное количество продукта и выделяют его, Фугат снова смешивают с 100 мл раствора полиэтиленгликоля и вызывают новое осаждение. Операцию осаждения раствором полпэтиленгликоля повторяют до 3 - 4 раз. Достигнутые степень чистоты и выход 1-аспарагиназы для четырех фракций приведены в табл. 1. Пр имер 2. 100 г сырой аспарагиназы с активностью 103 едмг растворя 1 от в 2 л воды и осветляют при центрифугировании. Доводя рН раствора до 8,5 с помощью 1 Х КОН и фракционируют, используя раствор полиэтиленгликоля, как в примере 1, Полученные вторую и третью фракции объединяют. Выход 12 г нли из расчета на исходную активность 887 о от теории. Получают 1.-аспарагиназу с активностью 765 едмг.П р и м е р 3. 5,0 г полученной путем фракционирования с помощью ацетона предварительно очищенной Е.-аспарагиназы с активностью 576 ед/лг растворяют в 100 мл воды и фракционируют несколько раз, используя раствор полиэтиленгликоля, как описано з примере 1.5 В табл. 2 представлены полученные для четырех фр акций результаты,1. Способ выделения ферментов, например20 1.-аспарагиназы, из культуральной жидкости,полученной при выращивании микроорганизмов, путем введения в нее многоатомныхспиртов с последующим добавлением органического растворителя, отличающийся тем, что в ка 25 честве многоатомных спиртов используют полиалкилены с молекулярным весом не более10000, предпочтительно между 1000 и 5000,добавляемые в виде 40 - 607 о-ного водногораствора,30 2, Способ по п, 1, отличающийся тем, что вкачестве пол иалкилена используют полипропиленгликоль,3. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтов качестве полиалкилена используют поли.35 этиленгликоль.