Способ получения замещенных тетралинов

(51) ИЕ ИЗО ЕТЕНИЯ П К БАТЕК ил, Ре нение ф-а где й име ине, в качестве ингюсигеназного ферментаСущность изобретеоед ф-лы мелипо Комитет Российской Федераии о патентам и товарнъФм знак(2 1) 4743682/04 (22) 18.04,90 . (48) 15.11,93 Бкж Йя (71) Пфайзер Инк(ОЗ (У 2) Джеймс Фред фэт(ОЗ); Лоренс Ше (73) Пфайзер Инк(ОЗ (86) 03 87/02734 (19 (54) СПОСОБ ПОЛУЧ ТЕТРАЛИ НОВ (57) Использование; битора фермента 5 лри лечении астмц а . ния: ерик ЭгглерЩ Энтони Мар: рман Мелвин-младщийФЭ. 1037) ЕКИЯ ЗАМЕЩЕЙНИХ2002741 10 15 лейкотриеновых 04 рецепторов в организме млекопитающих животных с целью предуп 20 к",0 в которой пунктирными линиями показаны возможные двойные связи, й представляет собой 2-пиридил, 2-хинолил, 2-пиразинил, 2- 3 хиноксалинил, 2-тиазолил, 2-бензотиаэолил, 2-оксазолил, 2-бензоксазолил, 1-алкил-имидазолил или 1-алкил-бензимидазолил, и В представляет собой оксигруппу, низший алкокси, или перфторалкил, Как и соединейия, 3 отвечающие настоящему изобретению, эти соединения ингибируют липоксигеназный Фермент и антагонизируют эффекты лейкотриена 04, и в связи с этим находят полезное применение для предупреждения 4 и лечения астмы.Изобретение й, имеющих структур 0 где й представляет значения, указанные выше.Настоящее изобретениелегко осуществимо,Реакции "восстановления" требуют вос 5 становления кетона до вторичного спирта,для чего доступны ряд реагентов избирательного действия. В случае, когда отсутствуют группы, восстанавливаемые ОАН 4(такие как карбокси- илиметоксикарбонил),0 этот реагент вполне подходит для даннойцели, С другой стороны, когда такие группыприсутствуют, в качестве, восстанавливающего реагента предпочтительным являетсяйаВН 4, 8 любом,случае гидридные восста 5 новления обычно осуществляются в инертном к реакционной смеси растворителе(таком, как тетрагидрофуран, в случаеОА 1 Н 4, метанол или комбинация метанол/тетрагидрофуран в случае МаВН 4). Влюбом случае температура не является критически важном фактором, обычно вполнеудовлетворительна температура в пределахот О до 50 С, и наиболее предпочтительна. комнатная температура. Данный этап восстановления обеспечивает возможностьполучения смеси цис- и транс-изомеров и вданном гибридном восстановлении обычнополучается этот результат. Если особенножелателен один из этих изомеров, то обычно определяются такие условия восстановпрактически касается соединениную формулу Оксисоединения формулы 1 содержат 50 два таких асимметричных атома углерода, соответствующих двум рацематам и четырем оптически активным соединениям. Один из этих рацематов является указанным выше цис-изомером, а другой - являет ся транс-изомером. Каждый иэ этих рацематов способен к разделению на пару энантиомеров через диастереоизомерные соли, как подробно разьяснено выше, Однако желательно превращение данного рацеНастоящее изобретение касается, замещенных тетралинов формулы , представленной ниже, которые. благодаря ингибированию 5-липоксигеназного фермента и 1 или . блокированию лейкотриеновых рецепторов находят полезное применение для предупреждения или лечения астмы, аритмии, псориаза, язвы, инфаркта миокарда и связанных с ними болезненных состояний у млекопитающих животных. Изобретение касается также фармацевтических композиций, способа лечения и промежуточных соединений, используемых для синтеза указанных соединений формулы ,Крефт и др., в патенте США Ь 8 4661596 описывают соединения, представляющие собой дизамещенные нафталины, дигидронафталины или тетралины, имеющие форму- лу мического спирта в соответствующие диастеперизомерные сложные эфиры или уретаны, образуемые с оптически активными кислотой или изоцианатом. Такие производные соединения с ковалентной связью обычно подвергаются различным способам разделения (например, хроматография), отличным от способов разделения диастереоизомерных солей,Предлагаемые соединения могут входить в фармацевтические композиции для ввода в организм млекопитающих животных, для ингибирования 5-;липоксигеназного Фермента . и/или блокирования реждения или лечения астмы (особенно у мужчин), артрита, псориаза, язвы желудочно-кишечного тракта или инфаркта миокарда.Соединения настоящего изобретенияполучают восстановлением соединенийструктурной Формулыпения, которые благоприятствуют образованию желаемого изомера, Так, например, восстановление МаВН 4 в присутствии хлорида цезия обычно хорошо благоприятствует образованию цис-изомера, Каталитическая 5 гидрогенизация - обычно также желательный способ восстановления, и, как правило, он осуществляется в условиях, которые несколько более жесткие,.чем описанные выше (например, более продолжительное 10 время, более высокое содержание катализатора, более высокие температура и/илидавление), .Что касается биологической активности соединений, отвечающих данному изобре тению, то известно, что арахидоновая кислота метабопизируется в организме млекопитающих животных двумя различными путями, один из которых приводит к образованию простагландинов и 20 тойбоксанов, и другой приводит к различйым окислительным продуктам, называемыерейкотриенами, которые обозначаются комбинацией буквы и цифры, например Б 4, С 4 и О 4, Первый этап данного окислихепьно го пути - это окисление арахидоноеой кислоты под воздействием 5-липоксигенаэного фермента, фермента, который обычно ингибируется соединениями , отвечающими данному изобретению, блокируя таким об разом синтез всех пейкотриенов. Он как таковой обеспечивает механизм, позволяющий испольэовать данные соединения для лечения или предупреждения астмы (когДа .ТС 4 иТО 4 являются. 35 медиаторами при воспалениях), артрита (когда .ТВ 4 является медиатором при воспалении), псориаза (когда .ТВ 4 является медиатором), язв (когдаТС 4 иТ 04 являются медиаторами), и инфаркта миокарда (когда 40 ТВ 4 является медиатором). Повышение этой ингибируащей фермент активности прояв. ляется в обычной способности данных соединений антагонизировать лейкотриен О 4 (то есть блокировать рецепторы ТО). 45 Обычно данные соединения антагонизиру. ют также пейкотриен В 4, Информацию по лейкотриенам можно получить в публикации:ВаПеу идрАпп, Яеропз Меб. С 1 ее,.с. 50 203 - 217 (1982);АктивностЬ соединений формулыв условиях "ин витро" определяется при следующем испытании, Клетки ЯВ 1;1, сохраняемые в форме монослоя, выращиваются в 55 течение 1 ипи 2 дней в тканевой культуре в минимальной основной среде (Еаце) с солью Еаг плюс 150-ной эмбриональной бычьей сыворотки, дополненной антибиотическим противогрибковым раствором(6 ВСО). Клетки один раэ промываются ИРМ,1640 (6 ВСО) и повторно суспенэируются в РМ 1640 плюсмикромолярный глютатион до клеточной плотности 1 х 10 клеток/мп 0,5 мл этой клеточной суспензии инкубируется при 30 С вместе с 0,001 мл диметоксисульфоксидного раствора лекарства в течение 10 мин. Реакция начинается при одновременном вводе 0,005 мл (14 С) - арахидоноеой кислоты в этаноле и 0,002 мл А 23187 в диметилсульфоксиде до получения конечных концентраций соответственно 5,0 и 7,6 мкмол. После инкубирования в течение 5 минпри температуре 30 С реакция прекращается при вводе 0,27 мл ацетонитрипа (уксусной кислоты (100/0,3), и данная среда осветляется путем центрифугирования. Осуществляется анализ распределения продукта путем инжекции 0,2 мл осветленного поверхностного слоя центрифугироеания в колонку жидкостной хроматографии высокого разрешения. Разделение радиоактивных продуктов осуществляется е радиальной колонке РАХСй (внутренним диаметром 5 мм, 9 Чатегз с использованием системы растворителей ацетонитрил (Н 20) уксусная кислота (0,16) с линейным ацетонитрильным градиентом от 35 до 707 ь в течение 15 мин со скоростью 1 мл/мин, Количественное определение осуществляется с использованием регистрирующего устройства радиоактивности Бертольда, снабженного встроенным интегратором и ячейкой потока обьемом 0,2 мл Омнифлер 2,4 мл/мин (ИЕМ) с колонкой для потока. Суммарные единичные дозы для каждого продукта рассчитываются как процент от общих суммарных доэ и затем сопоставляются со средними контрольными значениями. Данные результаты выражаются как процент подавления и выражаются в виде кривых зависимости от логарифма концентрации лекарства. Значения С 5 о определяются графически.Результаты приведены таблице,Проводили испытание рецептора лейкотриена 4 (.ТО ) с определением способности соединения конкурировать с радиомеченным ТО 4 для специфических точек рецептора .ТО на легочных оболочках морской свинки. В этом испытании морские свинки в возрасте 3-4 недели акклиматизировались в стандартных условиях в течение 3 дней, после чего они умерщвлялись, Конечный возраст свинок составлял 24-31 дней, Морских. свинок оглушали ударом по задней части шеи и обескровпивали путем выреза сонной артерии, Рас.рыеапи полость грудной клетки и лег 2002741кое удалили, промывали в 50 ммол буфера трис (рН=7,0) и помещали в чистый буферный раствор, 8 данной и во всех последующих операциях все ткани и буферные растворы выдерживали на льду в процессе препарирования, и все операции центрифугирования осуществляли при 4 С. Ткани бронхов и соединительные ткани извлекали иэ легких. Данную ткань взвешивали и помещали в 50 мл поликарбонатные пробирки с буферным раствором в соотношении 1 г ткани / 3 мл буферного раствора. Ткань гомогениэировалась посредством устройства Тиссумайзера Текмана при полной скорости в течение 3 с и центрифугировалась во вращающемся устройстве Яоча 11 33-34 со скоростью вращения 3250 об/мин в течение 15 мин. Поверхностный слой центрифугировался со скоростью 19000 об/мин в течение 1 О мин.Полученный спрессованный осадок снова суспензировался в буферном растворе с использованием гомогенизатора Тиссу. майзера со средней скоростью (позиция 75) в течение 10 с. Эта новая суспензия снова центрифугировалась со скоростью 19000 обмин в течение 10 мин. Образующийся осадок снова суспензировался с использованием устройства Тиссумайзера с небольшой скоростью (позиция 50) в течение 10 с в 1 мл буферного раствора на 1 Г исходной гкани. Эта конечная суспензия перемешивалась при т-ре 4 ОС с одновременным отбором аликвот в полипропиленовые пробирки и выдерживалась при -70 С, В полистирольную пробирку вводили следующие компоненты:(1) 25 мкл одного из следующих: А, Диметилсульфоксид (для определения общего связывания),В. 1 мкмол 1 ТО 4 (для определения не- специфического связывания).С. ЗО нмол - 100 мкмол соединения в диметилсульфоксиде, .(2).0,025 мл ЗН - 1.ТО 4 (с удельной активностью ЗО - 60 С 1 (ммоль) в 50 ммол буфера Трис (рН=7,0)+10 мкмол 2-цистеина (12000- 15000 ср в 0,025 мл).(3) 0,2 мл разбавленного мембранного препарата (1 мг/мл) (препарат разбавляли в 50 мкмол буферного раствора Трис+М Мд С 1 г так, чтобы в 200 мкмол белка достигалась концентрация МяС 12 1 О мкмол). Эти реакционные пробирки. инкубировались при 25 С в течение 30 мим. В каждую пробирку вводили 4 мл холодного буферного раствора Трис+10 мкмол М 9 С 1 г, Содержимое ик быстро Фильтровалось через Фильтр Батмана ОГ(С в разделительном устройст ЖЗВ=(х1 СВ)(ТВ-ЩВ),фического связывания; 20 К 1 (1 С 5 ОЯ 1+( /Кб)1,30 35 связывания в рецепторе .ТВ 4, В данном 40 5 10 ве Уеба, Фильтр трехкратнопромывали 4 мл буферного раствора Трис-Мц С 1 г.Этот фильтр переносили в сцинцилляционную ампулу, В ампулу вводили ультра- Флюоресцентную сцинцилляционную жидкость. Ампулу закрывали, подвергали завихряющему движению и подвергали детектированию в течение 3 ч. Процент специФического связывания рассчитывали с помо 4 ью следующей формулы где х=сра - отсчетов в минуту образца; НОВ-сргп-отсчетов в минуту неспециТВ=сра-отсчетов в минуту общего связывания.Процент специфического связывания представлен графически. как функция концентрации соединения, 1 Сщ является концентрацией, при которой имеет место 50 ЯЬ,К рассчитывается по следующей форму- ле где- концентрация вводимого лиганда (микроМол)=сра вода/срщ 1 мкмол, ЗН -1.ТО 4,Кб=1 мкмол (константа диссоциации).Человеческие нейтрофильные лейкоциты используются для измерения конкуренции испытываемых молекул с (ЗН)-1.Т 84 для испытании нейтрофилы отделяются от гепаринизированной человеческой периферической крови (обычно 100 мл) с использованием градиента Аурацие-Всо 1(плотностью 1,095 г/мл), цля повторного суспенэирования клеток используется уравновешенный солевой раствор Хэнка (Н В ЯЗ),. содержащий 0,1 г/100 мл альбумина бычьей сыворотки (НВЯЯ-ВЯА), Этот одноэтапный процесс Аурацца-ВсаИ дает высокочистую популяцию нейтрофил (более, чем 95. Клеточная жизнеспособность определяется по эксклюзии красителя трипанового синего (должно быть более 95;, и функциональное единство нейтрофил определяется по восстановлению нитросинего тетразолового (должно быть более, чем 85 положительных), Подвергаемые испытанию соединения растворяются в диметилсульФоксиде до концентрации 100 мкмол. Эти растворы разбавляются в 500 раэ с использованием НВ 3-ВЯА. 100 мкмол концентрацйя лекарства достигается путем ввода разбавленного образца в аликвоте (0,5 мл) в реакционную пробирку, ПриготавливаетсяЛекарства: Для обычного отбора дозой 50 мг/кг, 20 мг лекарства растворяются а 4 мл ЕЕЯ, с использованием ультразвукового воздействия в ультразвуковой ванне илй измельчения в измельчающем устройстве Теп Вгоес 1 для растворения лЕкарства, еСли ато необходимо, Если растворимость все еще остается проблемой, то лекарство испол ьзуется в Форме суспензии.Носитель для внутривенной инъекции;Солевой раствор вместе с 2,5 мг/мл бычьего5 сывороточного альбумина (ВЗА, СигмаФА 4378) и 0,05 мг/мл пропанол (Сигма ФР 0884); Ежедневно приготавливается свежая порция и выдерживается при комнатной температуре. Фактор активирования10 троибоцитов (РАЕ-); Приготавливается 10мкмол. Основной раствор путем растворения 1 мг РАЕ/Са 1 Ыоспев Ф 429460) в 0,18мл зтанола. Этот раствор выдерживаетсяпри -20 ОС и разбавляется е носителе в день15 использованйя. Концентрация используемого РАЕ регулируется таким образом, чтобы при авале дозой 0, мл/10 г тела,Умерщвлялось примерно 80 необработанных контрольных организмов, Это обычно20 составляет 0,028 г/кг (разбавление основ. ного раствора от 1 до 2034). Раствор приготавливается в стеклянных емкостях ииспользуется посредством стеклянныхшприцов для уменьшения до минимума ад 25 тезии РАЕ, Он выдерживается при комнатной температуре,Положительный онтроль: используетсяфвнидон концентрацией 25 мг/кг (аппроксимация Е 050).30 . МетсаЗа 45 мин до пньекции РАЕ мышей обрабатывают путем орального ввода лекарства в количестве 0,1 млЛО г тела. Через35-40 мин их помещают под воздействие35 обогреваещей лампы для расширения хвостовой вены для инъекции РАЕ вводится пу. тем внутривенной инъекции в количестве0,1 млйО г массы тела, и смерть обычнонаступает в течение 30 мин, редко по про 40 шествии 60 мин. Результаты выражаютсякак процент смертности, в сравнении с контрольными результатами, Ввиду того; чтоданный анализ чувствителен к эндогеннымкатехоламинам) например; защита мышей45 бета-агонистами), то для разрешения этойвозможной проблемы используется пропанол, 0 н помогает также, если мыши аклиматизируются к комнатным условиям до: испытания и комнатные шумы и температу 50 ра сохраняются умеренными и постоянными. Расстояние от нагревательной лампыдолжно устанавливаться таким, чтобы расщирение сосудов происходило без создания видимого стресСа на мышей, Голодание55 мышей должно быть исключено.Вариации:1; Время для орального:доэированияможет быть изменено;2; Внутривенный ввод дозированноголекйрства возможен за счет совместнойиньекции лекарства и РАР в том же объеме и в том же носителечто указаны выше, для совместной инъекции, РАР приготавливается в двойной концентрации от желаемой концентрации в солевом растворе вместе с ВБА и пропанолом, как указано выше, и лекарство приготавливается а двойной концентрации от желаемой концентрации в том же носителе. Оба препарата смешиваются в равных обьемах непосредственно перед иньекцией.Для использования с целью профилактики или лечения астмы, артрита, псориаза, язвы желудочно-кишечного тракта, у млекопитающих животных, в том числе человека, соединение формулы(1) дается в количестве, ингибирующем 5-липоксигеназу и/или блокирующем лейкотриеновый рецептор, составляющем примерно 0,5-50 мг/кг в день, . в виде единичной или разделенных дневных доз. Более предпочтительный дозированный предел составляет от 2 до 20 мг/кг в день, хотя в отдельных случаях по решению лечащего врача могут потребоваться дозы за указанными пределами, Предпочтительным способом введения лекарства является оральный, но в отдельных случаях предпочтителен парэнтеральный ввод, например анутримышечный, внутривенный, внутри- кожный, в тех случаях, когда впитывание лекарства при оральном вводе снижается под влиянием заболевания или когда пациент не в состоянии проглотить лекарство.Соединения, отвечающие данному изобретению, обычно вводятся в Форме Фармацевтических композиций, включающих по меньшей мере одно из соединений формулы 1, вместе с фармацевтически.пригодным носителем или разбавителем. Также композиции обычно приготавливаются общеизвестным образом с использованием твердых или жидких носителей или разбавителей, как принято для подходящего способа ввода: для орального ввода - в форме таблеток, твердых или мягких желатиновых капсул, суспензий, гранул, порошков и т.д.; и для парэнтерального ввода - в форме иньекционных растворов или суспензий и т,д.Данное изобретение иллюстрируетсянижеследующими примерами, которые, однако, не ограничивают объем изобретения.П р и м е р 1, Цис- и транс-бутил,2,3,4 тетра гидро-(2-хинолил)метоксинафтол.И раствор(0 С) 2,00 г(5,57 ммоль) конечного продукта предыдущего примера в.40 мл метанола вводят 1,26 г боргидрида натрия. Реакционная смесь перемешивается в течение 2 ч при 0 С, и затем концентрируется во вращающемся выпарном аппарате.Остаточный продукт концентрирое 8 ния растворяется в смеси простого эфира и насыщенного йаС 1. Органический слой аысушивается над сульфатом магния . ивыпаривается до образования масла, кото 5 рое очищается в колонке жидкостной хроматографии умеренного давления насиликагеле с злюированием смесью простой эфир: толуол в соотношении 1:3, и элюируются в последовательном порядке 1;0 г10 (50) элис-иаомера и 770 мг(38) транс-изомера, оба изомера кристаллизуются из смеси простой эфир/гексан.Цис-изомерТемпература плавления 78,5-80 С,15 Масс-спектр (е/е) 361 (М+), 342, 286. 143.142 и 115 Спектр ИК (СНС 1 з) 3590. 3400,1609, 1600, 1572 см 1,Спектр 1 Н - ЯМР (СОС 1 з, 300 МГц) дельта (ч/млн.): 0,89 (т., ЬГц, СНз), 1,2-1,7 (м;,20 9 Н),2,55-2,82(м., СН 2),4,53(д/ 4,0 Гц,ОН),4,73 (ОН), 5,33 (с., СН 20), 6,85 (д.д, 1-8,2 Гц,АгН), 6,98(м, 2 А Н), 7,49 (д,д., 1=8,8 Гц, АгН),7 62 (д 3=8 Гц,"АгН), 7,68 (д,д,1 8,8 Гц,АгН), 7,77 (д;, .1=8 Гц, АГН), 8,03 (д.,1=8 Гц;25 АгН) и 8,13 (д,1=8 Гц, АгН).Элементный анализС 24 Н 27 Й 02Рассчитано, %; С 79,74; Н 7,53; й 3,87,Найдено, : С 79,44; Н 7,42; й 3,81.30 Транс-и замерТ-ра плавления 70-72 ОС,Масс-спектр (в(е) 361 (М+), 286, 143, 142и 115.ИК-спектр (СНС 1 з) 3580, 3485, 1605,35 1600, 1575 см .Спектр 1 Н-ЯМР(СОС 1 з, 300 МГц) дельта-нафтол.Осуществляя процесс таким же образом, как и в примере 1, конечный продукт55 предыдущего примера (2,29 г, 7,41 ммоль)превращается в данные желаемые соединения,Цис-изомер0,96 г (42), т,пл. 101-103 С; менее полярный,2002741 14 Ингибирование фермента 5-липоксигеназы Формула изобрете СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭАМЕ ТЕТРАЛИНОВ общей ф.ормулы ОН.хинолил или 2-пиридил,бийся тем, что соединение общей ия,гдейщЕНЫ от и а20,формул где й имеет укют аосстаноал анные значения, подвергаию Составитель. В.Назина дактор Т.никольская Текред М,Моргентал Корректор; С. Лисин