Способ получения 7-замещенных 9 -метоксимитозана

(21) 3753304/23-04 .(62) 3607001/23-04 . (22) 21.06,84 (23) 03.06.83 (31) 385149 (32) 04.06,82 (33) 03 (46) 15.09.86. Бюл. У 34 (71) Рристоль-Иейерз Компани (О (72) Долатрай Иоханлал Виас (СА), ;си Канеко (ЛР) и Терренс Вильям ле (СА) (53) 547,759.3.07(088.8) (56) Р, Авег. СЬеа, Бос., 84, 3185-87 (1962) . (54) (57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕННЯ 7- ЩЕННЫХ 90 -ИЕТОКСИИИТОЗАНА общей Формулы 1. сн,ос-ъи.,Снуппа общей Формй 1,Н 31 где В, - водород или В(СИз)1В - водород, СН,ь или группыобщих Формул и узой- ЯСн 1СН) В - метил или.В вместе с Вз и атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидин или пилеридин,отличающийся тем, что на раствор метомицина С в органическом растворителе, таком как диметнлФормамид, действуют 1,0-1,5 молярньвю количеством гидрида натрия с последующей обработкой образоваваейся анюонной Формы метомицина С злектроФильным реагентом, выбранньм из иминоэФира, галометилениминийгалогенида или имнногалогенидной солилуче йию именноиа обсн ос-ъйснзФ-Н Я мсин щих леду 0 ОЪЩ 2СНз-ЪН 0,5 И расттилениминий хл5 добавления похлорида (12,5вору 915 мгхлороформа,и п ор И,М-диметил орида получают каплям 1,51 г ммоль) при 0 С 2,5 ммоль) ДМФ еремешивают 30 хлормепутем ксалил аствми Изобретение относится к по новых производных митозана а 7-замещенных 9 о-метоксимитоза щей формулы,где А - группа формулы где К, - водород или -Ю(СБ); К - водород, СНили группы общих Формул К - метил или К вместе с К и атомом азота, к которому они нрисое" динены, образуют пирролидин или пиперидин, обладающих противоопухоле-, вой активностью.Целью изобретения является поиск новых соединений митомицинового ряда; обладающих высокой противоопухолевой активностью, а также используемых в качестве промежуточных продуктов втезе других соединений, обладаюэтой активностью.Изобретеиие иллюстрируется с ющими примерами.П р и м е р А. К раствору 1 мМ изопропилформи мидат гидрохлорида в 2 мл диметилфбрмамида (ДМФ) медленно добавляют 2,1 мМдиизопропил этиламина при ОС в атмосфере азота. К полученному раствору по каплям добавляют-триметилсилилзтип хлорформат при О С,1258327 2Полученный чистый раствор обозначаютраствором А,В. Раствор 1 ммоль мнтомицина Св 5 мл ДМФ добавляют к суспенэии5 1,5 ммоль гидрида натрия в 3 мл ДМФ.Раствор перемешивают при комнатнойтемпературе в течение 20 мин и охлаждают дс (-40)-(-50) С перед добавлением вышеприготовленного раствора А,оРаствор выдерживают при -40 С в течение 1 ч, затем ему дают нагретьсядо комнатной температуры, после чегоа течение -6-18 ч разводят хлористымметиленом и фильтруют. Твердый остаток полученный после выпариванияфильтрата, хроматографируют на сили-.кагеле с выделением амидино-защищенного соединения, .укаэанного в названии примера.С. Амидино-защитную группу предыдущего промежуточного соединенияудаляют с получением неэамещенногоамидинового соединения, укаэанного вназвании примера.Пример 2,А. К раствору 1 мИ изопропилформимидат гидрохлорида в 2 мп ДИФ медленно добавляют 21 мИ диизопронил зтиламина в атмосфере азота при О С.о К полученному раствору нри 0 С добав .ляют метилиодид, Полученный раствор обозначают как раствор В.В. Используя вместо раствора А раствор В, повторяют пример 1 В с получением соединения, указанного в названии примера.Пример 3..ИН гий4 3при комнатной температуре. Отдельно раствор 334 мг (1 ммоль) митомицина С в 5 мл ДМФ добавляют к суспензии 36 мг (1,5 ммоль) гидрида натрия в 3 мл ДИФ, Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают до (-40)-(-50) С., после чего добавляют описанный раствор И,й-диметилхлорметилениминий хлорида (3 мл, 1,5 ммоль). После 10 мин перемешивания при -40 С к раствору добавляют 18 мг (О, 75 ммоль) гидрида натрия. Раствор выдерживаютопри -40 С в течение 1 ч и затем разводят хлористым метиленом и Фильтру-. ют. Остаток, полученный после выпаривания Фильтрата, подвергают тон" кослойной хроматографии на силика" геле (10% СН ОН в СН С 1 в качестве элюента).Экстракция основной зеленой полосы дает 78 мг (43% по отношению к возвращенному митомицину С) аморфного твердого вещества. Зкстракция Фиолетовой полосы дает 150 мг митомицина С.П р и м е р 4. 7(1-Метил-(Н)" -пиридинилиден)-аминоа-метокси- митоэан 1 0 гОСОНг0 СН,К смеси 242 мг (0,725 ммоль) митоиицииа С и 43,5 мг (1,81 ммоль) гидркда натрия добавляют 4 мп ДМФ, После 15 мин перемешивания при ком ; иатиой температуре добавляют.370 м (1,45 ммоль) 2-хлор-метилпиридин иодида. Раствор перемешивают 1,5 ч разводят этилацетатом (Ес ОАс) и Фильтруют. Остаток, полученный после выпаривания Фильтрата, хроматографируют ТСХ на силикагеле, используя 5%-ный метанол в хлористом метилене в качестве злюента, Второстепенный продукт (12 мг) представляет собой соединение ХХХ. Основной продукт (75 мг) очищает ТСХ на силикагеле, используя .10%-ный метанол в хлористом метилене, с получением 6 мг (2%) соединения, указанного в названии примера. 1258327 4П р и м е р 5, 7-ЦМетиламинометилен)-аминор-метоксймитоэан 12 мг (0,5 ммоль) гидрида натрия в атмосфере азота добавляют к раствору 167 мг (0,5 ммоль) митомицина С в 2 мл гексаметилфосфорамидаК раствору добавляют 19 мг (0,25 ммоль) К-метилформимидоил хловида, перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и затем добавляют 6 мг (0,25 ммоль) гидрида натрия и 9,5 мг (О, 13 ммоль) И-метилФормамидоил хлорида. После 6-12 ч неремеаивания раствор разводят этилацетатом и Фильтруют. Выпаривание растворителя с последующей хроматографической очисткой остатка дает соединение, указанное в яазваяии примера.П р и и е р 6. 7-(1-Пирролидинилметилен)-амияор-метоксимнтоэан Ю 0 .-ОСОКИН НгЗосн 0,5 М раствор пирролидинил хлорметилениминий хлорида получают добавлением по каплям 3,17 г (25 ммоль) оксалилхлорида при 0 С к растворуо2,48 г (25 ммоль) 1-Формилпирролидена в 50 мл хлороформа с последующим перемешиванием при комяатяой темпера туре в течение 30 мин, Отдельно к раствору 334 мг (1 ммоль) митомицина .С в 3 мл 1-Формилпирролидена в атмосфере азота добавляют 24 мг (1 ммоль) гидрида натрия. После 20 мин перемешивания при комнатной температуре раствор охлаждают до (-40)-(-50) С и добавляют 1 мл (0,5 ммоль) полученного выше раствора иминиевой соли. У этой смеси до" бавляют по очереди с интервалами по 10 мин каждый 12 иг (0,5 ммоль) гид рида натрия, 0,5 мл (0,25 ммоль) раствора иминиевой соли, 6 мг (0,25 ммоль) гидрида натрия, 0,25 мл5 1258327 б (0,125 ммоль) раствора иминиевой со". алюминием. Колонку элюируют сначала ли, 3 мг (О, 125 ммоль) гидрида нат- хлористым метиленом, а затем рия н О, 125 мл (0,063 ммоль) раство%-ньню (об/об) метанолом в хлористом ра иминиевой соли, После 30 мин метилене. Получают зеленую фракцию,оперемешивания при -30 С смесь нагре- состоящую из целевого продукта, ковают до комнатной температуры, Затем торый далее очищают хроматографией ее разводят этилацетатом и неоргани- на алюмичии с использованием хлорисческую соль отфильтровывают. Остаток, того метилена, содержащего 10% полученный после выпаривания раство- (об/об) метанола, выход 20 мг (5%), рителя, хроматографируют с помощью 10 Найдено, % С 52,68; Н 6,21; тонкослойной хроматографии на силика- Я 18, 15геле, используя 10%-ный метанол в Со НЯО, 1-1/4 ЕО хлористом метилене. Экстракция зеле- Вычислено, %: С 53,03; Н 6,34; ной полосы дает 120 мг (15% выход) Я 18,55соединения, указанного в названии 1 П р и и е р 9. 7- (1,3-Диметил-. примера. тетрагидропиримидинилиден)1 -аминоИ р и и е р 77-Я-Иетил-Я-(ме- -9 д-метоксимитоэан. тйламино)-метил -амино-метокси- митозан 0 ЮН 2 ОСНторяют пример 5, заме С 9 р-метокси"7-(Я-мет ном в том же молекуля амин о) ом кол ми ест 8, 7-(1,3-Диметил- ен)-9 д,-метоксимитозан эолинилид 3 МН0,34 г (1 ммоль) митомицина С растворяют в 5 мл 1 3-диметилУ45 -имидазолидона н к раствору добавляют О, 1 г гидрида натрия (50% в масле, 208 ммоль) при комнатной температуре. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин и затем5 О охлаждают на ледяной солевой ваннеодо -15 С. При этой температуре смесь выдерживают 10 мин, а затеи к ней добавляют 0,65 г (2 ммоль) 2-хлор,3-диметил,5-дигидро-(ЗН)-имидаэолиминий хлорида. После этого смесь сно 3 а выдерживают при -15 С в течеоние 1 ч и затем разводят этилацетатом.и хроматографируют на колонке с Гидрид натрия (50%-ная дисперсияв масле) в количестве 200 мг (4,2 ммоль) добавляют в атмосфереазота к раствору 680 мг (2 ммоль)митомицина в 8 мп 1,3-диметил,4,5,6-тетрагидро (1 Н, ЗН)-2-ниримидииана, Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают до -25 С. Затем к ней дообавляют 0,73 г (4 ммоль) 2-хлор,3- -диметил,3,4,5-тетрагидропиримидиний хлорида после чего смесь вцпероживаят при -25 С в течение 3 ч. Затем ее разводят этилацетатом и 2 ил метанола и без дальнейшей обработки наносят на хроиатографическую колонку с сухим алюминием и элюируют сначала хлористым метиленом, а затем%-ной (об/об) смесью метанол/хлористый метилен с получением целевого продукта 0,35 г (39,5%) т. нл.138-140 С.Найдено, %: С 54,78; Н 6, 18;Я 18,21СН.,Я,О,. Н,ОВычислено, %: С 54,65; Н 6,33; Я 18,21П р и м е р 10, 7-(Тетраметилдиаминометилен)-аминоа-метоксими- тоэан12 о сносюн ормети емммоль ма,-Форворув 3 илазотааяе лениииний добавлени оксалилхлсодержаще иилпиперид 334 мг (1 1-Фориилп добавляют дисперсия 96 мг (2 пер.ем/ СНт)К оснСн ьЯ Я 425 мг (1,42 ммоль) иитомицина Сперемешивают с 507-ной дисперсией вмасле гидрида натрия (85,3 мг) и ксмеси добавляют 4 мл дииетилформамида, перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона.в течение10 мин и затем охлаждают до -35 С. Добавляют 289 мг (2,13 ммоль) тетраиетилхлорформаиидиний хлорида и оставляют нагреваться до 5 С в течение 2 ч, Затем к смеси добавляют наколотый сухой лед для остановки реакции и растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на колонке с алюминием (100 г), используя 33-ный (об/об) метанол в хлористом метилене в качестве элюента, Это вещество далее очищает ТСХ на алюминии (57.-ный (об/об) метанол в хлористом метилене) с получением двух Фракций весои 17 мг и 76 иг, Вторую Фракцию кристаллизуют из смеси ацетон - эфир с получением целевого продукта, т.пл. 193-195 С, выход 123.Найдено, Х; С 54,92; Н 6,53; Я 19,29СН,Н,ОВычислено, Х: С 55,54; Н 6,53; К 19,43П р и м е р 11. 7-(1 Пиперидинилметилен)-амикоц-метоксимитозан аствор пиперидинилхлхлорида получают пупо капляи 380 мг (рида н 6 мл хлорофоо 0,34 г (3 миоль)ина. Отдельно к расммоль) иитоиицина Сперидина в атмосфергндрид натрия (50 в масле) в количествимоль). После 15 мин 58327 8шивания при комнатной температурераствор охлаждают до -25 С и добавляеют 4 мл (2 имоль) раствора имнииевой соли, приготовленного, как описано выше. Реакционную смесь выдержиовают при -25 С в течение 1 ч и затемохлаждают добавлением сухого льда.После добавления метанола ( ип)полученную смесь абсорбируют нейтраль ньм алюиинием, который затем наносятна колонку с алюминием (30 г). Колонку элюируют сначала хлористым иетиленом, а затем - 3 Х-ным (об/об) метано"лои в хлористом иетилене с получением 15 360 мг (843) соединения, укаэанномоз названии примера, т.пл. 68-70 С.Найдено, 7,: С 55,57; Н 6,21;0 15,91СН, Н,О, 1-1/4 Н,О20 Вычислено, Х; С 55,80; Н 6,58;Й 15,49Противоопухолевая активность по., отношению к РИцгтпе Лейкемии.В таблице представлены результаты 25 лабораторных исследований на СцГ,мышах-самках, которым внутрибрюшинноимплантировали опухолевый прививочный материал, содержащий 10 асцитных клеток Ршпгнье лейкемии,и которым вводили различные дозы тестируемого соединения указанной формулы 1 или иитомицина С. Группа извести мышей получала одну дозу сое"1динения в 1-й день после заражения.35В каждую серию экспериментов включали группу из 10 мышей, которым вво-дили Физиологический раствор. Груп"пы, обработанные митомицинои С,представляли собой положительныйконтроль. В каждой группе мышей втечение 30 дн отмечали время выживания в днях и регистрировали числовыживших особей, Мышей взвешивалиперед введением прапарата и повторно - на 6-й день. Изменение веса было принято в качестве меры токсичности. вещества. В эксперииент бралимышей весом 20 г каждая, а потерювеса до 2 г не считали чрезмерной, 50Результаты выражали в процентах от-,ношения Т/С (сгеасеИсопйто 1)., которое представляет собой отношениевремени вьвкивания группы, обработанной препаратом, ко времени вьзкиванияконтрольной группы, обработаннойФизиологическим растворои, котороебыто принято эа 1003. Животные, коггорым вводили физиологический раствор, обычно погибали не позднее 9Подавление РИог 1 пе Лейкемии Соединение Иаксимальный эффект, 7 Иинимальноэффективнаядоза Среднееизменениевеса мг/кг 150(144) 267(267) 206(263) 119(313) 6,4(4,8) 3,2(4,8) 3,2(4,8) 3,2(3,2)-1,6-2,3 -2, 3-1, 7 -1, 7-1, 7 +2, 2+2, 2 -2,8+О,б 10 3,2 331(319) 25, б (3, 2) П р и м е ч а н н е: Цифры в круглых скобках представляютсобой значения, полученные прн введениимйтомицина С в качестве положительногоконтроля. 9 12583 го дня. Таким образом может быть вычислена относительная активность соединений по изобретению в сравнении .с митомнцином С. Иинимальным эффектом считали 127. Т/С. Иинимально эфпо примеруТ/С Доза Предлагаемые соединения исследовалн на противоопухолевую активность, заражая мышей В 16 меланомой корич-, невой. Эксперименты проводилн на 0 И мьвах, которым внутрибрвшинно инокулировали опухолевый имплантант на протяжении 60 дн. Для каждой группы иэ 10 мышей определяли время выживания. У контрольных животных,40 инокулированных так же, как опытные животные и:инъецированные. растворителем беэ препарата, время выживания составляло 21 дн. Для определения45 максимально и минимально эффективных доз каждого соединения испольэовали соотношение Т/С (7). За минимально эффективную принимали такую дозу, которая вызывала 1257 Т/С эффект, Для каждой дозы опытным животным50 внутрйбрюшинно вводили тестируемое соединение на 1,5 и 9-й день Среднее изменение веса в день, отмечен ное при максимально и минимально эффективных дозах, использовали в качестве меры токсичности. Потеря веса в 2 г для мыши весом 20 г не .считалась чрезмерной. 27 1 Офективной является доза, вызывающаяминимальный эффект (1253 Т/С). Кроме того, в таблице дано среднеезначение веса на мышь при максималь-.но и.минимально эффективных дозах. Соединения по примерам 10 и 9 исследовалн на противоонухолевую актив-, ность по отношению к В 16 Ицг 1 ве меланоме при подкожном введении опухолевого иналаитанта и внутривенном введении препарата. График введения препарата и время выживания (исследования проводилн 40 дн) определяли по известной методике. На 12-й день измеряли изменение веса, Иаксимально эффективная доза соединения 1 мг/кг вызывала эффект 1563 (Т/С) и прирост веса 1,5 г. В груп" пах по б животных при этой дозе выживали 3 мыши в течение всех 40 дн, Инннмально эффективная доза состави" ла 0,25 мг/кг прн которой на 12-й день изменение веса равнялось 1,0 г, Для соединения примера 9 максимально эффективная доза составила 8 мг/кг прн эффекте 1771 Т/С и изменении веса 0,6, минимально эффективная доза - 4 мг/кг при изменении веса 0,8. В этом же эксперименте максимально эффективная доза митомнцина С составляет 3 мг/кг при эффекте 1952 Т/С и изменении веса 0,5, минимально эфСоставитель И.БочароваТехред М,ХоданичКорректор А Обруцар Редактор М.Келемеш Тирах 379 ПодписноеВНИИПИ Государственного комигета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Заказ 5043/60 Производственно-полиграфическое предприятие, г.Уагород, ул.Проектная, 4 11 12 э 8327 2фективную дозу митомицина С не опре- противоопуколеввю активность, выявделяли. ленную в экспериментах на зивотнык,Таким образом, данные подтверкда- а такке поникенную токсичность в ют для полученных соединений высокую сравнении с митомицином С