Способ получения концентрата гема

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК К 37/14 51) 5 ОБРЕТЕН И ИСАНИ ПАТЕН гема. Целью изобретения является повышение концентрации гема в концентрате. Способ осуществляется расщеплением гемоглобина или геминовой пасты, содержащей глобин, дегидратирующим агентом, доведением рН до 7,5-8,0, экстракцией целевого продукта этанолом или метанолом, или пропанолом или смесью пропанола и изопропанола в равных соотношениях в О, концентрации 40-70% по объему при рН 8,010,7 или с добавлением имидазола при рН 6,5 - 8,5 при температуре от Одо - 20 С в присутствии солей хлорида, цитрата или сульи фита натрия или аммония,026 (01,04.55 (088.8)2656157, кл. С 07 6 7/О Н ЦЕ НТРАТА ЧЕНИ носитс олучен медицине концентра Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности и касается способа получения концентрата гема.Цель изобретения - повышение концентрации гема в концентрате.Согласно данному способу производят извлечение концентрата гема из смеси гема с кровяным веществом, получаемой при расщеплении гемоглобина, при этом концентрат гема отделяют от глобина таким оЬразом, что концентрат гема превращается.в растворенную форму, в то время как остальное вещество находится в нерастворенной форме,П р и м е р 1, Взятую из организма кровь с добавкой в нее цитрата натрия в качестве коагулянта разделяют путем центрифугирования, в результате чего получают плазму и раствор красных кровяных клеток, К жидкому раствору красных кровяных клеток доСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМИ ГКНТ СССР(76) Пол Геран Сиге(57) Изобретение окасается способа Ж 166057 бавляют хлорид натрия и этанол в таком количестве, чтобы получилось 2,2 г смеси красных кровяных клеток, содержащей 0,34 г белка, 0,16 г хлорида натрия, 0,26 г 100%- ного этанола, 1,44 г воды и растворимые вещества, присутствующие в крови. Белок, главным образом гемоглобин, определяется посредством осаждения этанолом. 2.2 г смеси кровяных клеток содержат 11,1 мг гемина, что определено методом по пиридину,Смесь 4 мл 96%-ного (по объему) этанола и 0,8 мл 1 М НС при температуре - 8 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -5 С, После этого введения величина рН составляет 3.1 и температура составляет -5 С. В смесь вводят 3 мл ледяной воды и 1,8 мл 0,5 М й)аОН в 70%-ном (по объему) этаноле при одновременном перемешивании и охлаждении; температура смеси составляет -5 С, и величинарН составляет 7,5, По прошествии 5 мин в смесь вводят 10 мл 960 -ного (по объему) этанола, 10 мл 70 -ного (по объему) этанола, 1 мл 1 М глицина в водном растворе и 2,2мл 0,5 М КаОН, при одновременном пере мешивании и охлаждении. После этогосмесь содержит 67% (по объему) этанола, величина рН составляет 10,3 и температура ее -50 С. Смесь центрифугируют при 3000 9 в течение 5 мин, в результате чего получают 10 всплывший слой красного цвета и коричне, вато-красную пасту. Всплывший слой со держит 0,18 мг гема/мл (61,5 содержания гема от содержания его в исходном матери, але), 15Данную пасту в третий раз обрабатывают так, как указано выше, в результате чего достигается содержание гема 0,06 мг/мл (5,4% содержания гема от содержания в исходном материале), Общий выход концент рата гема составляет 78,60 . Данная паста имеет коричневый цвет и вес ее в сухом состоянии составляет 0,27 г (выход белка 79 50 )П р и м е р 2. Осуществляя процесс 25таким же образом, как в примере 1, величину рН понижают до 3,1, после этого доводят величину рН до 7,5, Смесь экстрагируют таким же образом, как и в примере 1, но вводя одновременно 1 мл 2 М имидазола в 70%- 30 ном (по объему) этаноле. Величину рН доводят до 8,4, Повторяют операцию еще двукратно. Всплывшие на поверхность слои содержат соответственно 79, 12 и 4% гема от содержания его в исходном материале, 35 Общий выход концентрата гема составляет 95%. Данная паста имеет светло-коричневый цвет и содержит 85 белка от содержания в исходном материале,.П р и м е р 3, Смесь 2 мл воды и 0,7 мл 40соляной кислоты (1 М) при температуре 1 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -8 С. После этого величину рН доводят до 3,2 и температуру 45 доводят до -5 С. Затем в эту смесь вводят 4 мл 967 ь-ного (по объему) этанола, 10 мл 70%-ного (по объему) этанола, 1 мл 1 М глицина в виде водного раствора, 1 мл 2 молярного имидазола в 700 -ном (по объе му) этаноле и 1,5 мл 0,5 малярного МаОН в 700 -ном (по объему) этаноле, рН 8,0 при одновременном перемешивании и охлаждении; температуру смеси поддерживаюто5 С, содержание этанола составляет 55примерно 56 об,0 . Смесь центрифугируют по прошествии 5 мин, как и в примере 1, и получают. всплывший слой, содержащий 590 гема от исходного материала, и коричневую пасту. Пасту экстрагируют двукратно 10 мм 70%-ного (по объему) этанола каждый раз при величине рН 8,0 и получают всплывшие слои, содержащие соответственно 18 и 80 гема от содержания в исходном материале, Общий выход концентрата гема 850 , Паста имеет коричневый цвет и содержание белка составляет 72 от содержания в исходном материале.П р и м е р 4. Смесь 3 мл 960 -ного (по объему) этанола и 0,35 мл 0,5 М ИаОН в 70%-ном (по объему) этаноле при -10 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -10 С, После этого величина рН составляет 10,2 и температура составляет -10 С. К данному раствору добавляют смесь 2 мл ледяной воды, 3 мл 50-ного (по объему) этанола и 0,15 мл 1 М НС при -10 С. Величина рН смеси составляет 7,5 и температура -10 С, К этому раствору добавляют смесь 5 мл 960 -ного (по объему) этанола, 5 мл 70 -ного (по объему) этанола и 2 мл 0,5 М ИаОН в 70 -ном (по объему) этаноле при -10 С. Величина рН полученной смеси составляет 10,3, температура -10 С,содержание этанола примерно 640/О (по объему), По прошествии 5 мин смесь центрифугируют, как и в примере 1, и получаЮт всплывший слой с содержанием гема 46% от содержания в исходном материале и темно-коричневую пасту. Пасту два раза экстрагируют 10-ю мл 65%-ного (по объему) этанола, каждый раз при величине рН 10,3 и при -10 С, и получаются всплывшие слои, содержащие соответственно 14 и 7% гема от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 67 , Получаемая паста коричневого цвета и имеет содержание белка 71% от содержания в исходном материале.П р и м е р 5. Осуществляя процесс таким же образом, как и в примере 4, величину рН смеси кровяных клеток повышают до 10,2 и температуру поддерживают 0 С. В этот раствор вводят смесь 3 мл 50%-ного (по объему) этанола и 0,2 мл 1 М НС при 0 С.Величина рН смеси составляет 8,2 и температура составляет 0 С. Затем в этот раствор вводят смесь 5 мл 96 -ного(по обьему) этанола и 10 мл 70%-ного (по объему) этанола при 0 С, Величина рН получаемой смеси составляет 8,2, температура составляет 0 С и содержание этанола составляет 660(по объему), По прошествии 5 мин смесь центрифугируют, как и в примере 1. Получают всплывший слой с содержанием 52% гема от его содержания в исходном материале и темно-коричневую пасту, Пасту два раза экстрагируют 10-ю мл 650 -ного (по объему) этанола и 0,2 мл имидазола в 700 -ном (поаобъему) этаноле, каждый раз при величине рН 8,2 и при 0 С, и получаются всплывшие слои с содержанием гема соответственно 28 и 120 от его содержания в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 92 , Получаемая паста имеет коричневый цвет и содержит 850 белка от исходного материала.П р и м е р б, Смесь,1 мл воды и 0,8 мл 0,5 М ИаОН при 10 С вводят по каплям при одновременном перемешивании в 2,2 гсмеси кровяных клеток при температуре 10 С. После этого величина рН составляет 11,0 и температура 10 С. В получаемый раствор вводят 4 мл 96%-ного (по объему) этанола, 1 мл 2 М имидазола в 70 -ном (по объему) этаноле, 1 мл 30 -ного цитрата натрия в виде водного раствора и 0,5 мл 1 М НО, Величина рН полученной смеси составляет 7,5 и температура 10 С. После этого вводят в смесь 3 мл 960 -ного(по объему) этанола и 10 мл 70%-ного (по обьему) этанола. Величина рН смеси составляет 7,5, температура составляет 10 С, и содержание этанола составляет примерно 64% (по объему). По прошествии 5 мин смесь центрифугируют, как и в примере 1, и получают всплывший слой с содержанием 53 гема от содержания его в исходном материале и темно-коричневую пасту. Пасту экстрагируют два раза 10 мл 65 -ного (по обьему) этанола и 0,1 мл 2 М имидазола в 70%-ном (по объему) этаноле, каждый раз при величине рН 7,5 и при 10 С, и голучаются всплывшие слои, содержащие соответственно 26 и 13% гема от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 920 . Паста имеет коричневый цвет и содержит 74 белка от содержания его в исходном материале,П р и м е р 7. Смесь 5,5 мл 96%-ного (по объему) этанола и 1,0 мл 1-малярной НС при температуре -18"С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в смесь 2,2 г смеси кровяных клеток, 0,1 мл 1 М глицина в виде водного. раствора, 0,1 мл 2 М имидазола в 70 -ном (по объему) этаноле и 2 мл 50 -ного (по объему) этанола при -18 С, Госле этого величина рН составляет 3,0 и температура- -18 С. В полученный раствор вводят 3 мл 40 ъ -ного сульфата аммония в виде водного раствора при одновременном перемешивании и охлаждении. По прошествии 5 мин в раствор вводят смесь 10 мл 96 -ного (по объему) этанола, 20 мл 70 ного (по обьему) этанола и 4 мл 0,5 М чаОН в 70 -ном (по объему) эта ноле и ри -18 С, и ри одновременном перемешивании и охлаждении, После этого величина рН составляет 7,5 и темпе 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ратура -18 С, содержание этанола примерно бд-ь (по обьему), Смесь центрифугируют так, как в примере 1. Полученную пасту экстрагируют два раза 20 мл 70,-ного (по обьему) этанола, 0,1 мл 1 М глицина в виде водного раствора и 0,1 мл 2 М имидазола в 70%-ном (по объему) зтаноле каждый раз при величине рН 7,5 и при -18 С. Содержание гема во всплывшем слое составляет соответственно 69, 14 и 5 от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 88 , Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и имеет содержание белка 81% от содержания его в исходном материале.П р и м е р 8. Смесь В мл 96-ного (по объему) этанола и 0,8 мл 1 М НС при -5 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -5 С. После этого величина рН составляет 3,1 и температура -5 С, В данную смесь вводят 0,8 мл 0,2 М йаО Н в 50%-ном (по объему) этаноле и 10 мл 50 -ного (по объему) этанола, после чего величина рН смеси составляет 3,5 и температура -5 С. Смесь центрифугируют при 9000 д в течение 5 мин, после чего получаются желтый всплывший слой и черная паста. Из всплывшего слоя после ввода в него 8 мл воды пои величине рН 7,5 осаждается серый белок, содержащий 0,21 г сухого вещества, Гемовую пасту черного цвета перемешивают со смесью 30 мл 70%-ного (по обьему) этанола, 0,5 мл 1 М глицина в виде водного раствора, 0,5 мл 2 М имидазола в 700 -ном (по объему) этаноле и 2,5 мл 0,5 М ИаОН в 70 -ном (по объему) этаноле, Величина рН смЕси составляет 8,6, температура -5 С и содержание этанола примерно 70(по объему). Смесь центрифугируют при 3000 д втечение 5 мин и получают всплывший слой с содержанием гема 72 от его содержания в исходном материале и коричневую пасту. Пасту экстрагируют два раза 30 мл 7070-ного (по обьему) этанола и 0,1 мл 2 М имидазола в 70%-ном (по объему) этаноле, каждый раз при вели ине рН 8,6 и прио-5 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 19 и 8% отсодержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 99%. Получаемая паста имеет зеленовато-коричневый цвет и содержит 0,1 г сухой массы, Общий выход белка 910 ,П р и м е р 9, а, Осуществляя процесс так, как в примере 8, происходит отделение черной гемовой пасты при использовании в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток, Пасту смешивают с 30 мл 50%-ного (па обьему) этанолэ и величину рН20 25 вой пасты при использовании в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток, Пасту смешивают с 30 мл 40 -ного (по объему) этанола и величину рН доводят до 10,7 посредством 0,5 М МаОН в 70 -ном (по объему) этаноле, Температура составляет -4 С и содержание этанола примерно 40(по объему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 71 от содержания его в исходном материале и коричневую 30 пасту. Эту пасту экстрагируют два раза 30 мл 40 -ного (по объему) этанола, каждый раз при величине рН 10,7 и при -4 С, и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 7,2 и 4,8 от содержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 83 . Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержит 0,08 г сухой массы, Общий выход белка 85;4,35 40 П р и м е р 10. Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 60-ного 45(по объему) этанола, 0,2 мл 2 М имидазола в 70-ном (по объему) этаноле и 1 мл 40 -ного (по весу) сульфата аммония в виде водного раствора, Величину рН доводят до 6,8 посредством 0,5 М ИаОН в 70-ном (по 50 объему) этаноле. Температура составляет 25 С, и содержание этанола примерно 60; (по объему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 63 от содержания его 55 в исходном материале, и коричневато-красную пасту. Пасту два раза зкстрагируют 60 ф -ным (по объему) этанолом, имидазолом и сульфатом аммония в указанных количествах, каждый раз при величине рН равной 6,8 доводят до 8,5 посредством 0,5 М йаОН в 707 ь-ном (по объему) этаноле при -1 С, Содержание этанола составляет примерно 50 (по объему). Смесь центрифугируют так, как в примере 8 и получают всплывший 5 слой, в котором содержаниегема составляет 33 от содержания его в исходном материале, и темно-коричневую пасту. Эту пасту экстрагируют три раза 30 мл 50 -ного (по объему) этанола, каждый раз при величине 10 рН 9,0 и при -1 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 24, 13 и 9 от содержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 79. Данная паста имеет корич невый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,1 г. Общий выход белка 91 ,б, Осуществляя процесс так, как в. примере 8, происходит отделение черной гемои при температуре 25 С и получаются всплывшие слои с содержанием гема соответственно 14 и 8 от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 85 , Получаемая паста имеет коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,07 г, Общий выход белка 83 .П р и м е р 11, Осуществляя процесс так, как описано в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 30 мл 96 -ного (по объему) этанола и 0,2 мл 1 М глицина в виде водного раствора. Величину рН доводят до 10,4 посредством 0,5 М йаОН в 70 -ном (по объему) этаноле. Температура составляет -20 С, содержание этанола примерно 90 (по обьему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 61 от содержания его в исходном материале, и темно-коричневую пасту, Пасту экстрагируют два раза 90-ным (по обьему) этанолом и глицином в укаэанных количествах, каждый раз при величине рН 10,4 и при -20 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 20 и 9 фот содержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 90. Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,1 г. Общий выход белка 91 .П р и м е р 12, Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 гсмеси кровяных клеток, Эту пасту перемешивают со смесью 30 мл 40 -ного (по обьему) этанола и 0,2 мл 2 М имидазола в 70 -ном(по объему) этаноле. Величину рН доводят до 7,0 посредством 0,5 М МаОН в 70 -ном (по объему) этаноле, Температура составляет -5 С и содержание этанола в смеси примерно 42(по объему). Данную смесь центрифугируют, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 58 от содержания его в исходном материале, и темно-красную пасту. Эту пасту экстрагируют два раза 70 -ным (по обьему) этанолом и имидазолом в указанных количествах, каждый раз при величине рН 7ои при -5 С и получают всплывшие слои, содержащие соответственно 26 и 5;4 гема от содержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 89 , Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,1 г. Общий выход белка 91 .П р и м е р 13. Осуществляя процесс так,как в примере 8, выделяют черную гемовую45 50 пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток, Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 707 ь-ного (по объему) метанола и 0,2 мл 2 М имидазола в 70 О-ном (по объему) этаноле. Величину рН доводят до 8,5 посредством 0,5 М йаОН в 70-ном (по объему) этаноле, Температура составляет -5 С, содержание метанола примерно 60, (по объему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой, содержащий 67 оь гема от содержания его в исходном материале, и коричневато-красную пасту. Пасту экстрагируют два раза 70;-ным (по объему) этанолом и имидазолом в указанных количествах каждый раз при величине рН 8,5 и при температуре -5 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 18 и 7 от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 92 о, Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержит 0,1 г сухой массы. Общий выход белка 91 о,П р и м е р 14. Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 700-ного (по объему) пропанола и 0,2 мл 2 М имидазола в 70;ь-ном (по объему) этаноле. Величину рН доводят до 8,0 посредством 0,5 М йаОН в 70 О-ном (по объему) этаноле. Температура составляет -5 С, содержание пропанола примерно 60; (по обьему), Смесь центрифугируют, как описано в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием ббо гема от содержания его в исходном материале и коричневато-красную пасту. Пасту экстрагируют два раза 70 О-ным (по объему) пропанолом и имидазолом в указанных количествах каждый раз при величине рН 8,0 и при температуре -5 С, получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 16 и 9; от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 91 О. Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,1 г. Общий выход белка 91 . П р и м е р 15. Осуществляя процесс так как описано в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 70 О-ного (по объему) изопропанола, 0,2 мл 1 М глицина и 0,2 мл 2 М имидазола в 70- ном (по обьему) этаноле, Величину рН смеси доводят до 7,5 посредством 0,5 М ИаОН в 70;-ном (по объему) этаноле, Температура составляет -10 С, содержание изопропано 10 15 20 25 30 35 40 ла составляет примерно 60", (по объему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 69 ф, от содержания его в исходном материале и коричневато-красную пасту, Пасту экстрагируют два раза 70;ъ-ным (по объему) изопропанолом глицином и имидазолом в указанных количествах каждый раз при величине рН 7,5 и при температуре- -10 С и получают всплывшиеслои с содержанием гема соответственно 17 и 9 О от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 95;4, Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,1 г. Общий выход белка 91.П р и м е р 16. Смесь б мл 96%-ного (по объему) этанола и 1 мл 1 М НО при -8 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,7 г крови при 0,5 С, После этого величина рН составляет 3,0 и температура -5 С, Затем в эту смесь вводят 2 мл 40 О-ного сульфата аммония в виде водного раствора и смесь 20 мл 70 О- ного (по объему) этанола, 0,2 мл 1 М глицина в виде водного раствора и 0,2 мл 2 М имидазола в 70 оь-ном (по объему) этаноле приОС при одновременном перемешивании и охлаждении. Величину рН доводят до 8,0 посредством 0,5 М КаОН в 70 О-ном (по объему) этаноле, Температура составляет -8 С и содержание этанола примерно 65 О (по обьему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой, содержащий 66; гема от содержания его в исходном материале и коричневато-красную пасту. Эту пасту экстрагируют два раза 70 О-ным (по объему) этанолом, сульфатом аммония и имидазолом вуказанных количествах, каждый раз при величине рН 8,0 и при -8 С и получают вспльвшие слои с содержанием гема соответственно 16 и 7; от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 89, Данная паста после промывки ее 50;-ным (по объему) этанолом имеет серовато-коричневый цвет и общий выход белка 85 О,П р и м е р 17, Используя в качестве исходного материала 22 г смеси кровяных клеток, выделяют емовую пасту, в результате экстракции которой при величине рН 10,4, при -5" С и с использованием 707 О-ного (по объему) этанола получают первый экстракционный раствор в количестве 199 мл с концентрацией гема 0,38 мг/мл, что соответствует содержанию гема 68.1от содержания его в исходном материале, второй экстракционный раствор в количестве 121 мл с концентрацией гема 0.17 мг/мл, что соответствует содержанию гама 18,6% от1660573 Составитель С.МельниковаРедактор М,Недолуженко Техред М,Моргентал Корректор И,Муска Заказ 1858 Тираж 456 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 содержания его в исходном материале, и третий экстракционный раствор в количестве 118 мл с концентрацией гема 0,08 мг/мл, что соответствует содержанию гема 8,50 ь от содержания его в исходном материале. Экстракционные растворы соединяют и подкисляют до величины рН 5,1, используя 87 мл 0,1 М НС, при -5 С. Образующийся в результате этого черный хлопьевидный осадок отделяется путем центрифугироеания при 3000 9, весовое количество этого осадка составляет 4,5 г. Эту пасту промывают три раза в 15 мл ледяной воды (в каждой промывке), суспензируют в 15 мл ледяной воды, доводят величину рН до 8,2 посредством 3 мл 0,2 М МаОН, замораживают и высушивают при температуре ниже 0 С. В результате получается 265 мг черного порошка с содержанием гема 360. Общий выход концентрата гемэ составляет 86 Д.Результаты анализа продукта,0: С 46,17; Н 5,30; О 10,53; Р 2,8; Ре 3,57; К 9,6; К 35 и йа 4,1.П р и м е р 18. В результате экстракции гемовой пасты, выделенной из 50 г смеси кровяных клеток, при величине рН 8,2, при температуре+1 С и с использованием 600 ьного (по объему) этанола и 4 мл 2 М имидазола в 70;-ном (по объему) этаноле получают первый экстракционный раствор в количестве 494 мл с концентрацией гема 0,32 мг/мл, что соответствует содержанию гема 62,8% от его содержания в исходном материале, второй экстракционный раствор в количестве 467 мл с концентрацией гема 0,11 мг/мл, что соответствует содержанию гема 20,40 от е 1.о содержания в исходном материале, и третий экстракционный раствор в количестве 479 мл с концентрацией гема 0,06 мг/мл, что соответствует содержанию гема 11,40 от его содержания в исходном материале. Экстракционные растворы соединяют и подкисляют до величины рН 4,0, используя 240 мл 0,1 М НО, при температуре 1 С, Образуемый осадок отделяют, как указано выше, количество этого осадка составляет 8,5 г, Пасту промывают три разав ледяной воде, каждый раз по 25 мл, суспенэируют в 25 мл ледяной воды, величинурН доводят до 8,5 и суспензию заморажива 5 ют и высушивают при температуре ниже0 С. В результате получается 510 мг черногопорошкообраэного продукта с содержанием гема 42. Общий выход концентрата гема составляет 85%.10 П р и м е р 19. Осуществляя процесс так,как в примере 18, получают один экстракционный раствор, Последний отдельно подкисляют до величины рН 4,0 и полученныйчерный осадок отделяют, промывают и вы 15 сушивают при температуре ниже О С тэк,как описано в примере 18. Полученный таким образом концентрат гема содержит55 гема.Согласно предложенному способу, по 20 лучают концентрат гема, содержащий гем вколичестве не менее 40 вес,0. Этот концентрат гема предназначен для использованияв качестве фармацевтического средствапротив анемии, а также в качестве обога 25 щенного железом средства в пищевых продуктах, Продукт, полученный по известномуспособу, содержит примерно 10 вес.0 гема.Формула изобретенияСпособ получения концентрата гема пу 30 тем расщепления гемоглобина зритроцитовв присутствии дегидратирующего агента иразделения гема и глобина, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышенияконцентрации гема в целевом продукте, до 35 полнительно используют геминовую пасту,содержащую глобин, при этом после расщепления рН сначала доводят до 7,5-8,0, эзатем целевой продукт экстрагируют этанолом или метанолом, или пропанолом, или40 смесью пропанола и изопропанола в равных соотношениях в концентрации 40-90об,0 при рН 8,0-10,7 или с добавлениемимидазола при рН 6,5-8,5 при температуре(О) (-20) С и в присутствии солей хлорида,45 цитратэ или сульфата натрия или аммония,