Устройство для выделения белков из биологических тканей

(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ВЫДЕ КОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ Т Я арный институтА. Молоканов осится к устройст огически ние про озможно торно я выде й. Цел выделе ретение от а именно к лков из био ния - ускор еспечения ам длтканеессасти о тельство СССМ 3/00, 1980,/г аю ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(57) Изо технике ления бе изобрет ния и о ЛЕН АНЕ абор1693038 10 15 20 25 30 35 40 зом менной обработки нескольких проб. Устройство содержит корпус 1, стаканы 2 с пробирками 3, установленные в пластинах 5 и 6, мешалки 7 в виде стержней 8, укрепленные посредством гибкой втулки 10 на приводных валах, подключенных через ролики 13 и обИзобретение относится к области лабораторной техники, к устройствам для выделения белков из биологических тканей и их фракций для последующего анализа состава, свойств и количества фракций белков в тканях.Целью изобретения является ускорение процесса выделения белков и обеспечение возможности одновременНой обработки нескольких проб.На фиг. 1 изображено устройство, общийвид, сбоку, на фиг. 2 - разрез А-А на фиг. 1; на фиг. 3 - разрез Б-Б на фиг. 1; на фиг,4 - узел 1 на фиг. 1; на фиг. 5 - вид В на фиг. 1.Устройство для выделения белков из биологических тканей содержит корпус 1, расположенное в корпусе 1 средство для размещения биологической ткани, состоящее из расположенных равномерно по окружности стаканов 2 с пробирками 3, внутренняя поверхность 4 которых выполнена рифленой, и двух горизонтальных пластин,5 и 6 для крепления стаканов 2, установленных с воэможностью возвратно- поступательного перемещения в вертикальной плоскости, Устройство содержит узел перемешивания, включающий мешалки 7 в виде вертикально расположенных стержней 8, каждый из которых размещен над стаканом 2 и укреплен на приводном валу 9 посредством гибкой втулки 10 для эксцентрического вращения стержней 8, Мешалки 7 подключены к приводу 11 через общий приводной шкив 12 и ролики 13 для обеспечения их одновременного вращения, Пластина 5 снабжена винтовыми зажимами 4, пластины 5 и 6 установлены на вертикальных направляющих 15,Устройство работает следующим обраОслабив винтовые зажимы 14 опускают пластины 5 и 6 со стаканами 2 в нижнее положение, Подготовленный для исследования биологический материал помещается в пробирки 3 цилиндрической формы, внутренняя поверхность 4 которых выполнена рифленой для полноты перемешивания. Пробирки 3 размещают в стаканах 2, плащий шкив 12 к приводу, После размещения образцов ткани в буферных растворах в пробирках 3 приводят в эксцентрическое вращение стержни 8, за счет чего происходит перемешивание и экстрагирование фракций белков ткани. 5 ил,стины 5 и 6 поднимают в верхнее рабочее положение и закрепляют винтовыми зажимами 14. В рабочем положении мешалки 7 должны быть погружены в исследуемый материал, находящийся в пробирках 3. Подготовленное к работе устройство помещают в холодильник и подключают к электросети. Через привод 11 шкив 12 получает вращательное движение. Каждый ведомый ролик 13 соприкасается со шкивами 12 и за счет возникающих при этом сил трения получает от него вращение. При этом получают вращательное движение мешалки 7, которые благодаря гибким эластичным втулкам 10 вращаются эксцентрично по отношению к пробиркам 3 с исследуемым материалом.Принцип выделения и разделения белков биологической ткани основан на различной их растворимости в солевых растворах различной концентрации. Саркоплазматические белки извлекаются из ткани растворами с низкой ионной силой, а миофибрильные белки - растворами с высокой ионной силой. Нерастворимый остаток ткани относится к белкам стромы. В образцах ткани определяют азотистые экстрактивные вещества и белки: саркоплазматические, миофибриллярные, соединительно-тканные. Фракционирование проводят с учетом сокращения времени экстрасирования при использовании предлагаемого устройства.Все операции проводят на льду, Ножницами предварительно измельчают мышцы на стекле, тщательно удаляя жировые прослойки и соединительную ткань, Затем на аналитических весах берут навеску и растирают с кварцевым песком.Полученный гомогенат дважды экстрагируют по 2 ч и один раз в течение 1 ч,добавляя каждый раз по 10 мл фосфатного буфера. После каждой экстракции центрифугируют по 10 мин при 2500 об/мин. Таким образом получают около 30 мл раствора,содержащего саркоплазматические белки и остаточный азот. Скорость экстракции 50об/мин. Экстракт делят на две равные части, Водной половине определяют общий азотсаркоплазматических белков и азотистых экстрактивных веществ вместе, во второй половине осаждают саркоплазматические белки равным объемом 20-ной трихлоруксусной кислоты в течение 12 ч, Осадок отфильтровывают через плотный фильтр и в полученном растворе определяют небелковый азот,Для извлечения миофибриллярных белков остаток мышечной ткани первый раз экстрагируют с 10 мл раствора Вебера (0,6 М КС,0,01 М Ма 2 СОз, 0,04 М йаНСОз, рН 9,1) в течение 20 ч, центрифугируют и сливают надосадочную жидкость.Вторую экстракцию производят с 10 мл О,б М КС с прибавлением 2 мг АТФ (0,2 мл 1;-ного АТФ) в течение 2 ч, затем центрифугируют, сливают надосадочную жидкость. Заключительную экстракцию с 10 мл раствора Вебера ведут в течение 1 ч,В объединенном тройном экстракте надосадочной жидкости определяют азот миофибриллярных белков, а в осадке - азот белков стромы,Содержание белковых фракций и азотных экстрактивных веществ определяют по количеству азота,Устройство позволяет создать однотипные условия при одновременном массовом проведении исследований при определении белков и белковых фракций в биологическом материале, проводить постоянное и тщательное перемешивание фаршеобразной массы в определенном буферном растворе. Применение устройства обеспечивает качественное фракционное разделение различных групп белков с последующим определением количества, состава и свойств белковых фракций, при этом результаты дальнейших исследований позволяют проводить сопоставительный анализ различных проб биологического материала за счет одно типности условий. Устройство также обеспечивает сокращение времени выделения и разделения белковых фракций при одновременном массовом проведении исследований.10Формула изобретенияУстройство для выделения белков из биологических тканей, содержащее корпус,расположенное в корпусе средство для раз 15 мещения биологической ткани, и узел перемешивания и гомогениэации ткани,включающий привод, о т л и ч а ю щ е е с ятем, что, с целью ускорения процесса выделения белков и обеспечения возможности20 одновременной обработки несколькихпроб, средство для размещения биологической ткани состоит из расположенныхравномерно по окружности стаканов с пробирками, внутренняя поверхность которых25 выполнена рифленой, и двух горизонтальных пластин для крепления стаканов в вертикальном положении, установленных свозможностью возвратно-поступательногоперемещения в вертикальной плоскости,30 при этом узел перемешивания содержит мешалки в виде вертикально расположенныхстержней, каждый из которых размещеннад стаканом и укреплен на приводном валупосредством. гибкой втулки для его эксцен 35. трического вращения, причем мешалки подключены к приводу через общий приводнойшкив для обеспечения их одновременноговращения, 16930381693038 д 8 Составитель Н,Осипововецкая Техред М.Моргентал КорректорО.Кундрик дакт аказ 4051 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раущская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Уж ул,Гага ина,