Способ определения кардиотонической активности соединений

ОЮЗ СОВЕТСКИХ ОЦИАЛИСТИЧЕСК 074 РЕСПУБЛИК ш 1 1 М 33/1 о У л Р Г д (ч ъ 11 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ н 1 ИБЛМОТЕЫ24тельский инстиням химическ ут по х сое. А. Исаева Баум арма - 14. чук В. В. -,1984,6,с ДИО- ЕДИогии, овреОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КА ТОНИЧЕСКОЛ АКТИВНОСТИ С НЕНИИ(57) Изобретение относится к фармак Цель изобретения - упрощение и од менное повышение точности способа, Полоски папиллярной мышцы выдерживают в камере 10 - 15 мин, проводят низкочастотную стимуляцию и переходят на стимуляцию полосок с частотой 0,2 - 0,3 Гц. Каждую из полосок обрабатывают одним из испытуемых веществ. Контрольную полоску подвергают действию эталонного препарата. Сравнительную оценку кардиотонического действия делают на основании сопоставления максимального положительного инотропного эффекта и времени его достижения под влиянием испытуемых и эталонного соединений на фрагменты папиллярной мышцы. На фрагменте папиллярной мышцы можно протестировать 10 - 20 химических соединений.3 табл,5 10 15 20 25 30 35 40 45 Изобретение относится к медицине, фармакологии, а именно к способам поиска новых высокоэффективных кардиотропных лекарственных препаратов, и может быть использовано для прогнозирования эффективности новых перспективных химических соединений до прохождения ими многоэтапных исследований.Целью изобретения является упрощение и одновременное повышение точности определения кардиотонической активности химических соединений за счет использования в качестве тест-объекта полоски папиллярной мышцы человека, взятой во время операции по поводу протезирования митрального клапана.Способ осуществляется следующим образом.Использукт полоски папиллярной мышцы патологически измененного митрального клапана, удаляемого во время операции по поводу его протезирования. Полоски выдерживают без стимуляции в камере в течение 10 - 15 мин, затем проводят низкочастотную стимуляцию до появления полноценных вызванных сократительных ответов, далее переходят на стимуляцию полосок с частотой 0,2 - 0,3 Гц до достижения стационарной ам плитуды сокращения. После подготовки фрагментов миокарда к эксперименту каждую из полосок обрабатывают одним из испытуем ых веществ. Контрольную полоску подвергают действию эталонного препарата (из класса сердечных гликозидов), Сравнительную оценку предполагаемого кардиотонического действия делают на основании сопоставления максимального положительного инотропного эффекта и времени его достижения под влиянием испытуемых и эталонного соединений на фрагменты папиллярной мышцы 5 - 10 кардиохирургических больных.Предлагаемый способ основан на высокой корреляции (коэффициент корреляции 0,7) между приростом амплитуды сокращений фрагмента миокарда из папиллярных мышц кардиохирургических больных в ответ на действие некоторых сердечных гликозидов (строфантин, дигоксин, коргликон) и увеличением минутного объема сердца этих пациентов в дооперационном периоде под влиянием терапевтических доз соответствующих лекарственных препаратов,Пример, Работоспособность способа иллюстрируется на примере сравнения кардиотонической эффективности 2-х широко применяемых лекарственных препаратов - стро. фантина К и дигоксина, С этой целью сопоставляли их максимальный положительный инотропный эффект на папиллярных мышцах 5 больных. Полученный результат верифицировали по известным данным о действии строфантина и дигоксина на сократимость сердца кардиохирургических больных.Больной К., 31 г., ревматический митральный стеноз 1 У степени, тромбоз левого предсердия и ушка правого предсердия, кальциноз митрального клапана 1 Ъ степени, мерцательная аритмия, нарушение кровообращения 11 Б степени. Болен 4 года. За последнее время состояние резко ухудшилось, появилась одышка, сердцебиение, общая сла бость, увеличилась печень. Была назначена операция: тромбоэктомия из левого предсердия и ушка правого предсердия, протезирование митрального клапана с аппаратом искусственного кровообращения.Удаленный во время операции паталогически измененный клапан доставили в течение 3-х мин к экспериментальной установке. Из кусочка папиллярной мышцы вырезали 3 полоски весом 23; 24,5; 24 мг и длиной 4, 5,4 мм соответственно. Диаметр каждой полоски не превышал 1 мм. Каждую из полосок помещали в камеру из плексигласа объемом 0,5 см. Полоски миокарда постоянно перфузировали физиологическим раствором следующего состава, мм: ЧаС 132; КС 4,5; МаНСО, 11; ЯаНгРОч 2 НгО 0.61 МдС 1 г 6 НгО 0 251 СаС 1, 2 Н,О 2,16; глюкоза 11; рН 7,5; температура 28 С.Раствор барбатировали карбогеном 95 Я Ог+ 54 СОг. Полоски миокарда стимулировали с помощью электростимулятора через 2 массивных серебряных электрода, расположенных вдоль всей длины камеры. После закрепления полосок одними концами с помощью лигатур к штокам механоэлектрических датчи ков (м еханотроны типа 6 МХ 1 С), а другими - к вмонтированным в дно камер крючкам, полоски миокарда растягивали примерно на з от исходной длины,Далее полоски сердечной мышцы выдерживали в условиях бездеятельности, и затем делали попытки через каждые 2 - 3 мин, получить вызванные сократительные ответы редкими одиночными стимулами (табл. 1).1320744 Таблица 1 Реакция на низкочастотную стимуляцию полосок13 Продолжит ельность покоя,(мин) Нет ответа Нет ответа Нет ответа Сократительный ответСократительный ответ Сократительный ответ Сокр атительный ответ 10 То же То же То же Характер сокращений полосок Частота стимуляции, Гц г Стационарная 0,1 Стационарная амплитуда со- кращений Прогрессирующеепадение амплитуды сокращений амплитуда сокращений отсутствует Стационарная 0,2 Стационарнаяамплитуда сокращенийСтационарная То же амплитуда сокращенийСтационарная 0,3 Стационарная амплитуда сокращений в течение 60 мин амплитуда сокра -щений в течение 60 мин амплитудасокращений втечение 60 мин О,ч Медленное возрастание амплиМедленное возАльтерация амплитуды сокращений растание амплитуды сокращений в течение 30 мин туды сокращений в течение30 мин Как следует из табл. 1, через 15 мин покоя удалось зарегистрировать полноценные вызванные сокращения во всех 3-х полосках. большие интервалы покоя нецелесообразны ввиду неоправданного увеличения продолжительности эксперимента.Далее проводили подбор частоты раздражения фрагментов миокарда, при которой наблюдалось установление стационарной амплитуды сокращений. В рассмятриваемом примере оптимальная частота составила 0,3 Гц (табл. 2). После установления стационарной амплитуды сокращений во всех полосках к каждой из них добавляли по одному соединению из группы сердечных гликозидов в равных концентрациях (4 10г/мл). В данном эксперименте применяли строфантин К, дигок син и коргликон.Как следует из табл. 3 ( 1) максимальный положительный инотропный эффект тестируемых веществ на миокарде больного К. распределился в ряд следующим образом: строфантин К) дигоксин коргликон.30 Значительное превосходство кардиотонического действия строфантина над дигоксином было обнаружено при тестировании этих лекарственных препаратов на папиллярных мышцах еще 4-х больных (табл. 3).Таблица 21320744 Таблица 3 Прирост Максимальная Исходная ампЛекарственные препаратыамплитудасокращенийпри действиивещества, мг литуда сокращений, мг амплитудысокращений,7. 237 1738 ДигоксинСтрафантин 5289 340 1203 3222 107 3011 Дигоксин 4897 168 2915 Строфантин 3816 2236 Дигоксин 2288 4476 50 Строфантин 9326 6357 47 Дигоксин 4183 117 1920 Строфанти 2821 21 2327 Дигоксин 4773 43 3343 Строфантин формула изобретения Обнаруженные различия в эффективности действия строфантина и дигоксина полностью согласуются с хорошо известным фактом из клинической практики лечения кардиохирургических больных. Использование предлагаемого способа оценки эффективности потенциально кардиотонических соединений обеспечивает возмож ность делать заключение о кардиотоничес кой эффективности испытуемого вещества на сердце человека уже на первом этапе доклинических исследований.Предлагаемый способ позволяет априори распределять новые перспективные физиологически активные вещества, предназна ченные для комплексных подробных испытаний, в ряд по степени приоритетности в плане доклинических и клинических испытаний.Благодаря использованию в предлагаемом изобретении фрагмента миокарда человека в качестве тест-объекта значительно возрастает достоверность получаемых данных, ибо применяемых до настоящего времени экспериментальные модели сердечной недостаточности на животных несовершенны 55 и не позволяют имитировать всю совокупность патологических процессов, протекаемых в миокарде больного. Кроме того, на фрагменте папиллярной мышцы, полученной во время кардиохирургической операции от больного, благодаря небольшим размерам применяемых. в эксперименте полосок миокарда можно одновременно протестировать 10 - 20 химических соединений, Для статистически достоверного вывода об относительной эффективности тестируемых потенциальных кардиотоников достаточно выполнение 5 - 10 экспериментов на папиллярных мышцах соответствующего числа больных. Способ определения кардиотонической активности соединений путем выделения фрагмента миокарда, помещения его в камеру, перфузируемую физиологическим раствором, электростимуляции фрагмента миокарда, регистрации и сравнения изменения установившейся амплитуды вызванных сокращений фрагмента миокарда под влиянием испытуемого и эталонного химического . соединений, отличающийся тем, что, с целью упрощения и одновременного повышения точности, во время операции по поводу протезирования митрального клапана выделяют полоски папиллярной мышцы сердца, выдерживают в камере в течение 10 - 15 мин затем проводят низкочастотную стимуля1320744 Составитель Н. ГуляеваРедактор Н. Слободяник Техред И. Верес Корректор А. ИльинЗаказ 2654/48 Тираж 776 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфицеское предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 цию до появления полноценных вызванных сократительных ответов, после этого стимулируют полоски с частотой 0,2 - 0,3 Гц, а сравнение амплитуды сокращений в присутствии испытуемых соединений проводят после достижения ее стационарной величины.