Способ определения алкалоидов изохинолинового ряда в мачке желтом

Союз СоветскихСоциалистическихреспублик Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК . АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ьььь 943565(5)М. Кл. С 01 й 31/08 Ъеудерстееииый комитет СССР по аелеи изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Ордена Ленина институт биохимии им. А. Н. Бахаи 1-ый Московский ордена Ленина и орденаТрудовогоКрасного Знамени медицинский институт им. И, М: Сеченова(5 ьь) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКАЛОИДОВИЗОХИНОЛИНОВОГО РЯДА В МАЧКЕЖЕЛТОМ 1Изобретение относится к медицине,в частности к исследованию и анализубиологически активных природных соединений, применяемых.; в качестве лекарственных средств, а именно к количественному определению алкалоидовв мацке желтом.ЪуИзвестен способ определения алкалоидов изохинолинового ряда путемэкстракции их из растительного материала хлороформом с последующей тонкослойной хроматографией экстрактав системе растворителей бензол-мета-нол, взятых в соотношении 80;20 11,Йедостаток способа - неселективност ь.Наиболее близким по техническойсущности и достигаемым результатамявляется способ определения алкалоидов изохинолинового ряда в мачкежелтом путем экстракции алкагюидовпетролейным эфиром, разделения экстракта методом тонкослойной хроматографии в смеси растворителей хлоро 2форм - метанол - 253 аммиак, взятыхв соотношении 22,5-2,5-0,1 с последующим проявлением пластинки реактивом Драгендорфа и спектоофотометрированием 2 1.5 Недостатком способа является егонеселективность.Цель изобретения - повышение селективности способа.Указанная цель достигается тем,цто в способе определения алкалоидовизохинолинового ряда в мачке желтомпутем экстракции экстрагентом, тонкослойной хроматографии экстракта всмеси органических растворителей с 15последующим проявлением пластинкии спектрофотометрироваььием, в качест"ве экстрагента используют смесь этанола, хлороформа и 253 аммиака, взятых в соотношении (0,5-1):(1-3):3 9 ч 356 ,и проявление пластинки ведут в парахиода с последующим опрыскиваниемее раствором тиосульфата натрия.Отличительная особенность способасостоит в том, что в качестве экстрагента используют смесь этанола, хлороформа и 253-ного аммиака, взятыхв соотношении (0,5-1):(1-3,0):(0,080,611), в качестве смеси органическихрастворителей используют смесь бензо ола, ацетона и метанола, взятых в соотношенйи (8,6-911):(1-3):(О Д)проявление пластинки ведут в парахиода с последующим опрыскиванием еераСтвором тиосульфата натрия, 15П р и м е р. 1,0 г (точная навеска) воздушно"сухого измельченного(0,1 мм) растительного материала экстрагируют 25 мл смеси этанола - хлороФорма - 253 аммиака в соотношении1:1:0,1 в течение 16 ц при настраивании. Полученный экстракт отфильтровывают и замеряют его объем. К фильтрату прибавляют 10 мл 10-ного раствора уксусной кислоты, Из образовавшейся двухфазной системы этанол и хлороформ отгоняют под вакуумом на водяной бане, Полученный горячий водно-кислыйраствор разбавляют 10 мл воды и охлаждают. После охлаждения кислый раст-, вор отфильтровывают при отсасваниичерез стеклянный Фильтр Ю Ч, Образующийся осадок промывают 5 мл воды.Водно-кислый фильтрат многократно экстрагируют хлороформом (20 мл х 11)35 при подщелачивании 253-ным аммиаком(рН 9) до полноты извле цения, которую контролируют по реакции с реактивом Драгендора, Хлороформенные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия40 и хлороформом отгоняют досуха. Сухой остаток количественно растворяют в 1 мл этанола.Для приготовления пластинок 13 х х 18 см используют 6,0 г силикагеля, 0,3 г гипса и 1 ч мл 0,5 н. КОН. Для45 проведения разделения пластинку делят на 4 равные полоски. На каждую из трех полосок наносят штрихом 0,1 мл этанольного раствора суммы алкалоидов,Ф 5 4Четвертая полоска служит в качествехолостого, опыта. Хроматографическоеразделение проводят восходящим спосо.бом в системе бензол - ацетон - метанол в соотношении 9;2:1. После прохождения растворителя пластинку сушат на воздухе и проявляют в течениене более 3-х мин в парах иода. Послетого, как пятна алкалоидов отмечены,пластинку опрыскивают 104-ным воднымраствором тиосульфата натрия и высушивают на воздухе. Отмеченные зонысиликагеля с алкалоидами согласно ихй, соскабливают, тщательно растирают на кальке и алкалоиды элюируют10 мл этанола, насыщенного тиосульФатом натрия, в тецение 30 мин привстряхивании,Измеряют оптическую плотностьэлюатов, полученных после фильтрования через стеклянный Фильтр 8 11 приотсасывании и доведенных до 10 мл,на СфА при 280 нм - для глауцина,изоболдина и таликмидина, 289 нмдля прототипа и норхелидонина, 285 нмдля синоакутина и аллокриптопина,265 нм - для коридина и 272 нмдля оксоглауцина, хелеритрина и сангвинарина против контроля, в качествекоторого используют элюат с контрольной полоски силикагеля, взятый науровне пятен определяемых алкалоидов.Содержание алкалоидов в элюатах расчитывают по калибровочным графикам.В табл. 1 приведено влияние соотношений этанола, хлороформа и 253 ного аммиака в экстрагенте на извлечение глауцина из травы мачка желтого,Как видно из табл. 1, наибольшаяполнота экстрагирования алкалоидовиз растительного материала наблюдается при соотношениях этанол - хлороФорм - 253 аммиак в следующих пределах (О 5-1):(1-3):(0,08-0,64) .В табл, 2 приведены значения алкалоидов мачка желтого при разделенииих тонкослойной хроматографией.8 табл. 3 приведены значения алкалоидов мацка желтого при разделенииих тонкослойной хроматографией.943565 6Таблица 1 21,93 25,90 25,92 25,94 25,94 24,87 19,84 19,65 19,5221,86. 25,90 1:2:0,16 25,92 1:2:0,32 1:2:0)4 1:2:1,38 25)90 25,90 17,36 Таблица 2 Смесиорганических растворителее й Алкалоиды Изоболдин Оксоглауцин Аллокриптонин Глауцин Известный способ943565 Таблица 3 Смеси ,органических раст- ворителей Алкалоиды 1 Желеритрии Сан гвинарин Коридин Хелидонин 0,85 0,98 0,62 О 90 0 98 0,62 0,95 0,90 0,85 О 48 0,90 0,70 0,88 0,96 0,52 0,93 0,66 0,78 0,86 0,33 0,40 0,80 0,70 Ч 1 0,94 0,64 0,85 0,96 Ч 11е и м е ч а н и е. 1 бензол-ацетон-метанол (9:2:1)111 (9:2:0,8)11(8,6:2:1) П р Формула изобретения Составитель С. ХованскаяРедактор Т. Парфенова Техред Е.Харитончик Корректор Г, Огар Заказ 5096/48 Тираж 887 Подписное8 НИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужг.род ул. Проектная,Способ определения алкалоидов изо,хинолинового ряда в мацке желтом путем экстракции алкалоидов из растительного материала экстрагентом, тон кослойной хроматографии экстракта в смеси органических растворителей с последующим проявлением пластинки и спектрофотометрированием, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью 40 повышения селективности способа, в качестве экстрагента используют смесь этанола, хлороформа и 254-ного аммиака, взятых в соотношении (0,5-1); й (1-3):(0,08"0,64), в качестве сме- ю 5 си органических растворителей используют смесь бензола, ацетона и метанола, взятых в соотношении (8,6-9,4):(1-3):(0,8-1), и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раствором тиосульфата натрия. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Хроматография в тонких слоях.Под ред, Э. Нталь М "Мир", 1965,,с. 280-304.2, Маслова Г. А. Методика количественного определения глауцина в траве.Фармация. 1974, У 4, 68 (прототип).