Способ определения унитиола

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик пп 911255(ИЗМ.Кл з 6 01 Я 21/64 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 070382 А.А, Хабаров и В.П. Баранов7 рЧитинский государственный медицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УНИТИОЛА Изобретение относится .к аналитической химии, а именно к способамопределения унитиола.Известен способ титрометрическогоопределения .унитиола с использованием роданида аммония и иодида калия, основанный на появлении синейокраски иода с крахмалом в точкеэквивалентности (1).Наиболее близким к предложенномуявляется способ определения унитиола, заключающийся в воздействиина анализируемую пробу индикаторав щелочной среде . Этот способ основан на реакции препарата с нитропруссидом натрия в щелочной среде, в результате которой получается малиновоеокрашивание (2).Недостатком способа является невысокая чувствительность, в результате чего этот способ позволяет лишькачественно определить унитиол впробе и низкая избирательность,так как определению унитиола мешаютдругие соединения, содержащие сульФгидрильгруппы,Чувствительность известного ме, тода составляет 20 мкг/мп, чувстви"тельность предлагаемого способасоставляет 0,07 мкг/мл. 2Цель изобретения - повышениечувствительности и избирательностиспособа.Поставленная цель достигаетсятем, что в известном способе определения унитиола, заключающемся в воздействии на анализируемую пробу индикатора в щелочной среде, в качестве индикатора используют 1,2-нафто,хинон-сульфокислоты натриевую соль,а о содержании унитиола судят поинтенсивности Флуоресценции полученного при этом. раствора.ФПри этом используют слабощелоч ную среду.Спектр флуоресценции полученногораствора лежит в области 380 - 500 нмс максимумом 428 нм, спектр возбуждения Флуоресценции располагается 20 в интервале 320 - 400 нм с максимумом 361 нм, .Отличительным признаком способаявляется использование 1,2-наФтохинонсульФоната натрия в слабоще"25 лочной среде с целью,повьйениячувствительности и избирательностиспособа и последующее измерениефлуоресценцяи полученного раствора.Прн изучении оптимальных условий 30 протекания реакции выяснено, что1 )2 г,5 линейная 1 Ви. Имть интенсивностиФ 1 усрес 1 с 1 Ии о 1 ео 1 еира 11 ии препарата нежит В интервале О,)73 Г) мкг/мл. Чун ГВительность реакции,описываемой н изобретении, составляет 0,7 мкг/мл, иго позволяет протаблица Концентрация унитиола"лкг/мп Относительная интенсивность флуоресценции, % 0,01 92 18 72 12 10,0.1,0 Определение проводилось, на отечественном электронном флуориметре марки Эф-ЗМА с фипьтрами В,-1 и В,-2. Спектры определялись на флуорс.сцентном спектрофотбметре Хитачи" модель ИРГР. производства Японии.При изучении оптимальных условий "ронедения реакции на унитиол найТ а б л и и а 2 Объем реактивана 10 мп исследуемого раствора Концентрация раствора нафтохинонсульфоната, Ъ0,01 0,1 1 33 50 1 кап. 2 кап.3 кап. 4 кап,Г) 5 кап.6 кап,7 кап. 48 33 42 33 Оптимальной Концентрацией раствора 1,2-нафтохинонсульфоната натрия, является 0,1%-ный свежеприготовленный растнор по 2 капли на обработку анализируемой пробы объемом 10 ж с ко 1 пе 11 трапией О мкг/мп унитиола. Расгнор реактива готовится на тетра.боратном бферс с рН : 7,5. 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 О,00 40,0 50,0 60,0 70,0 80,0 водить ог 1 ределени 11 ре 11 а. Вта н л - карственньх формах и В биолОГи 1 еских жидкостях, ЗВВисимОсть инте 11 сиВности флуоресценции фено унитиола От концентрации препарата представлена 5 в табл1,1 2 4 3 дена оптимальная концентрация применяемого реактива - раствора 1,2- -нафтахинон- сульфокислоты натриеной 35 соли. Зависимость относительной интенсивности флуоресценции унитиола от концентрации нафтахинонсульфоната натрия представлена н табл.2. 38 60 )8 42 44 7 45 40 О Найдена зависмость И 1 те 1 Оинности флуоресценции ст рН сре"ды, создаваемой тетрабс ратнымбуферным раствором. Завис:имеем.интенсивности флуорес:енИи упи"тиола от рН с. еды пред:та В :.-.в табл.3.650 320 60 70 100 57 40 23 Оптимальным рН среды является водородный показатель, равный 7,5 для выявления максимальной флуоресценции,П р и м е р 1. Определение унитиола в 5-ном растворе. Методика определения; 1 мл 5 раствора из15)ампулы переносят в мерную колбу на 500 мл. Доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают. К 1 мп полученного раствора прилить 9 мл тетраборатного буферного раствора О с рН = 7,5 и после перемешивания 2 капли 0,1-ного раствора 1,2-нафтохинон-сульфокислоты натриевой соли, переносят раствор в кювету и . Флуориметра и замеряют интенсивность 25 флуоресценции. Содержание унитиолаустанавливают по стандартному образцу, для приготовления которого навеску порошка унитиола равную 0,05 гпереносят в мерную Колбу на 500 мп,доводят .водой до метки и перемеши-.вают до полного растворения, К 1 мпполученного раствора препаратаприливают 9 мп тетраборатного буферного раствора с рН = 7,5 и 2 капли 0,1-ного раствора 1,2-нафтохинон-сульфокислоты натриевой соли,переносят раствор в кювету и флуориметрировать одновременно с опытнымиобразцами. Результаты опредЕленияунитиола в 5-ном растворе представлены в табл. 4. Таблица 4 Метрологическиехарактеристики Найдено унитиола По .калибровочно- В 1 мл 5-ного му граФику, раствора, г/мпмк г/мл 0,050 0,048 Х = 0,0496+0,00127 10,0 9,6 Е = +0,00089035 9,8 О, 049 10,0 0,050 0,050 0,049 .О, 050 0,052 0,048 0,050 Истинное значенне определяемой величины: 10,0 А = 0,0496 +9,8 10, О 10,4 9,6 10,0 55 на том же буферном Растворе, Осторожно перемешивают, не допуская вспенивания раствора, и флуориметрируютодновременно сО стандартными образцами. Содержание унитиола в крови 60 устанавливают по калибровочному гра.фику, для построения которого к1,0 и 0,1 мп водного раствора унитиола с содержанием препарата 100 мкг/млприливают соответственно 9,0 и , 9,9 мл тетраборатного буфера с рН П р и м е р 2. Определение унитиола в кровяной сыворотке экспери-ментальных животных 5 мл артериаль" ной крови помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15 мин при 8000 об/мин. К 1.мл надосадочной жидкости приливают 9 мп тетраборатного буферного раствора с рН = 7,5и 2 капли 0,1-ного свежеприготовленного раствора 1,2-нафтохинон- -4-сульфокислоты натриевой соли 11111911255 Таблица 5 Содержание унитиола в кровичерез 1 ч после приема Путь введения Вес животно,го оличест во веденного нитиола, г/кг по калибровоч- В 1 мл крови,ному графику, мкг/млмкг/мл 5,2 52,0 0,16 1,5 Внутри-,мышечно Формула изобретения Составитель Е, Карманова Редактор А. Шандор Техред И.Надь Корректор Н. СтецЗаказ 1106/27 Тираж 883 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1 1 30 35 р Иосквар Ж 35 у Раушская наб., д. 4/5Филиал ППППатент , г. Ужгород, ул, Проектная, 4 7,5 и по 2 капли 0,1-ного растворанафтохинонсульфоната натрия в томже буфере, растворы перемешивают ифлуориметрируют вместе с Исследуемы-.ми растворами, По результатам флуоТаким образом, предлагаемое техническое решение дало возможность повысить чувствительность и избирательность определения унитиола и может быть использовано с большой эффективностью. Способ определения унитиола, заключающийся в воздействии на анализируемую пробу индикатора в шелочной среде, о тл и ч а ю ш и й с я тем, что, с целью повышения чувствириметрии строят калибровочный график.Данные по определении унитиолав сыворотке крови экспериментальных животных представлены нтабл.5,тельности и избирательности, в качестве индикатора используют 1,220 нафтохинон-сульфокислоты натриевую соль, а о содержании унитиола судят по интенсивности флуоресценцииполученного при этом раствора.Источники информации,25 принятые во внимание при экспертизе1. Гейн Л.Г. и др. Титрометрическое определение унитиола -с примесью сульфата меди.-фФармация,ф 4 с 1975 ю с. 69-70.30 2, Фармакопейная статья, ФС-73 (прототип),