Способ получения 7l-or -эстрадиолов

Взамен ранее изданного ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских СоциалистическихРеспублик р 11677666 ф 1 с с.(31) Р 2535997. 1 Государственный комитет СССР но делам изобретений н открытий(71) Заявитель Иностранная фирма Шеринг АГ ФРГ-С 4 -ацил,льная, циклоили тетраильная груподород, -С 2-алк ентильна идропира мым с то 17 Изобретение относится к способу получения новых фармакологически активных 7-замещеьных эстрадиолов общей формулы 1 па; 20Н,1 и В - одинаковые или различные водород, С,1-Сацильная или тетрагидропиранильная группа.Цель изобретения - расширение ассортимента стероидных соединений,обладающих биологической активностью,Цель достигается предлагае пособом, заключающимся в том, ч с(этинилэстрадиол общей формулы где В имеет указанное значение, ферментируют грибковой культурой семейства аЬядЫа огсй 1 Жя, аярегд 111 ця 1 цсЬцепя 1 я, ВМгорця п 1 дг 1 сапя, ре 111 сц 1 аг 1 а Г 11 авепояа, КЫ горць огуга 1, Ю 1 горця Еагапепя 1 я, ЙЙ 1 горця соЬцц, ВЬ 1 горця я 1 о 1 оп 1 Еег или Й 1 р 1 о - Ыа паеа 1 епя 1 я в концентрации 50- 500 мг субстрата ча 1 л питательной среды при 25 -35 С и в зависимости от необходимого значения Й,1, Я 2, Р в конечном продукте этерифицируют одну или несколько гидрокснльных групп до простых эфиров, предпочтительно, с помощью циклопентилгалогенида в присутствии основания или днгидрапираном и/или до сложных эфиров с помощью, предпочтительно, ангид677666 ридов или хлорангидридов кислот вприсутствии катализаторов, целевыейрбдукты"выделяют и очищают известными методами.П р и м е р 1. Микробиологическое7 с.-гидроксилирование,Колбу Эрленмейера емкостью 2 л,содержащую 500 мл стерилизованногов течение 30 мин при 120 С в автооклаве питательного раствора содержащего, В: глюкоза 3; Согп з 1 еер 1;ИаИОЗ 0,2; КН 2 РО, 0,1", К 2 НР 0,4 0,2,М 9 ЯО 4 0,05; ГеЯО, 0,002, и КС 1 0,05,засевают лиофильной культурой Шр 1 оЙ 1 а паг.а 1 епз 1 з (АТСС 9055) и встряхивают 72 ч при 30 С на ротационномоаппарате для встряхивания. Этой предварительной культурой затемзасевают ферментер емкостью 20 л, которыйзаполнен 15 л стерилизованной при12 1 О С и давлении 1, 1 атм, Среды тогожесостава,.что и предварительнаякультура.При добавке силикона ЯН в качестве противовспенивателя герминируютпри 29 С, при аэрации 10 л/мин, давлении 0,7 атм и перемешивании25220 об/мин в течение 24 ч 1 л,бульонакультуры при стерильных условияхпереносят в 14 л стерилизованнойкак и выше питательной среды такогожесостава и выращивают при таких жеусловиях. Спустя 12 ч добавляют сте Орильно профильтрованный раствор из3 г этинилэстрадиола в 100 мл дйметилсульфоксида,За протеканием превращения следят: "путем анализа с помощью тонкослойной 35хроматографии метилизобутилкетоновыхэкстрактов проб ферментера. Послеполного превращения (45 ч времениконтактирования) содержимое ферментерадвукратно перемешивают с метилизобутилкетоном, беря каждый раз по10 л, и экстракт выпаривают в вакууме при температуре бани 50 С.Остаток для удаления противовспенивателя растворяют в метаноле. Си;яиконовое масло отделяют в делительной воронке, затем раствор фильтруютчерез складчатый фильтр и снова выпаривают досуха. Остающийся сырой:продукт теперь растворяют в хлористом метилене и для очистки хроматограграфируют через колонку с силикагелем с помощью градиента растворителей метиленхлорид/ацетон. Послекристаллизации из уксусного эфирачистый 17 Ы.-этинил,3,5/10/-эстратриен,7 С 6, 17-триол белого цвета плавится при 234-235"С (разложение) . С, Н О (мол вес 312,4) .П р и м е р 2. 500 мг 170(. -этинил,3,5/10/-эстратриен,7 , що17-триола растворяют в 10 мл пиридина, добавляют 0,5 МГацетфайТЙу(рйдаи перемешивают в течение 20 минприохлаждении льдом. Затем раствор примешивают в 100 мл охлажденной 8-ной 4серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральной реакции. После высушивания перекристаллизуют из смеси эфир/гексан и получают чистый 3-ацетокси(-этинил,3,5/10/" эстратриенс, 17-диол с т.пл,133- 135 С, 17-этинил,3,5/10/-эстратриен,7 с, 17 Ъ-триола с т.пл.230- 232 оС,П р и м е р 3. Раствор 100 мг 17 с -этинил,3,5/10/-эстратриен, 7 с, 17-триола в 5 мл уксусного эфира при комнатной температуре смешивают последовательно с 1 мп уксус" ного ангидрида и 1 каплей хлорной кислоты (70 Ъ-ной) . Спустя 3 мин добавляют 1 каплю пиридина, промывают насыщенным раствором хлористого натрия, высушивают и выпаривают, Получают 78 мг 3,7 с, 17 3 -триацетокси Ц;этинил,3,5-/10/-эстратриена в виде аморфного вещества.УФ-спектр (метанол) ." Я:,у=9760; Е 2=541; Е 267715; б 27,696.П р и м е р 4. К раствору 150 мг 17 1 -этинил,3,5/10/-эстратриен,74 17 -триола в 3 мл пиридина добавляют 1 мл уксусного ангидрида и оставляют на 16 ч при комнатной температуре. Композицию при добавке циклогексана или СС 14 выпаривают досуха. Остаток растворяют в уксусном эфире и промывают водой. После высушивания и выпаривания получают 120 мл сырого продукта, который очищают с помощью тонкослойной хроматографии. Получают 110 мг 3,7 о( -диацетоксис( "этинил,3,5/10/-эстратриен-ола, т.пл, 165-166 ОС.П р и м е р 5. 200 мг 17 о.-этинил, 3,5/10/-эстратриен,7 17) -триола растворяют в 3 мл метанола и 1 мл циклопентилбромида при нагревании, затем добавляют 200 мг карбоната калия,и кицятят "в течение 12 ч в атмосфере азота. После этого смесь вносят в уксуснокислую ледяную воду и экстрагируют хлористым метиленом. Органическую фазу промывают до нейтральной реакции, сушат и выпаривают. Сырой продукт (150 мг) очищают с помощью тонкослойной .хроматографии, получают 100 мг 17,К - этинил-З-циклопентилойси,3,5/10/- эстратриено, 17 Р -диола. Т.пл.126- 128 С.1 П р и м е р б. Раствор 350 мг 1 И- этинил-З-циклопентилокси,3,5/10/- эстратриенс(., 17 -диола в 5 мл уксусного эфира смешивают с 1 мл уксусного ангидрида и 1 каплей хЛорной кислоты (70-ной) и перемешивают 3 мин при комнатной температуре. Затем добавляют 0,5 мл пиридина, промывают .насыщенным раствором хлористого натрия, высушивают и выпаривают, Получают 310 мг 7 о(., 17( -диацетокси сС-этинил-З-циклопентилокси,3,П р и м е р 9. К раствору из450 мг 3-ацетоксио:этинил,3,5/10/-эстратриенос, 17 -диолав 30 мл абсолютного бензола при комнатной температуре добавляют 7 млтриэтиламина и при интенсивном пере"мешивании 1,4 мл хлорангидрида изопропилсульфокислоты и перемешивают 4048 ч при комнатной темпераТуре. Затем смесь выливают на лед и экстрагируют вещество эфиром. Эфирную фазу промывают, высушивают и выпари-вают и сырой продукт очищают с по 45мощью градиентной хроматографии.,Получают 250 мг 17 о(-этинил-ацетоксио-изопропилсульфонилокси,3,5/10/-эстратриен/ -ола,П р и м е р 10Раствор 350 мг17 с 1.-этинил,3,5/10/-эстратриен 3,7 оС 17 -триола в 35 мл абсолютного бензола смешивают с 5 мл триэтиламина при комнатной температуре,при интенсивном перемешивании, и с2 мл хлорангидрида изопропилсульфоксилоты. Оставляют перемешиватьсяпри комнатной температуре в течение38 ч, затем выливают на лед и экстрагируют эфиром. Эфирную фазу промывают водбй, высушивают и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощьюградиентной хроматографии, получают 125 мг 17 о.-этинил,7 а -бисизопропилсульфонилокси,3,5/10/эстратриенР -ола,55 5/10/-эстратриена в виде аморфного вещества. Уф-спектр (метанол);2 =9060) гнуу ,=1460 у8 У 1920 У Е 88=1770.П Р и м е р 7. 500 мл 17-этинил-.1,3,5/10/-эстратриен,7 о, 17 /3 в 5триола растворяют в 10 мл пиридина,добавляют 1 мл ангидрида маслянойкислоты и перемешивают 60 мин прикомнатной температуре. Затем раствор примешивают в 100 мл охлажден Оной 8-ной серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральнойреакции. После высушивания перекристаллизуют из смеси эфир/гексан и получают чистый 3-бутилоксивэтинил,3,5/10/-эстратриено,1517 -диол с т.пл. 130 - 131 С.П р и м е р 8. 500 мг 17.-этинил,3,5/10/-эстратриен,7 оС,17-триола растворяют в 10 мп пиридина, добавляют 3 мл масляного ангидрида и перемешивают 72 ч при комнатной температуре. Затем растворпримешивают в 100 мл охлажденнойс о84-ной серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральной реакции. Для дальнейшей очистки продуктхроматографируют через колонну с силикагелем и перекристаллизуют изсмеси эфир/гексан. Чистый 37 о -дибутирилоксис -этинил,3,5/10/- 30эстратриен -ол плавится при132,5-133 С. П р и м е р 11, а) Раствор 350 мг3,7 о -диацетоксио -этинил,3,5/10/-эстратриен-ола в 20 млабсолютного бензола смешивают с20 мг и/толуолсульфокислоты и 1 млдигидропирана. Перемешивают в течение ночи при комнатной температуре,разбавляют эфиром, промывают до нейтральной реакции раствором бикарбоната натрий и водой и выпаривают.Получают 300 мг 3,7 с -диацетокси 17 оэтинил/ -тетрагидропиранилокси,3,5/10/- эстратриена,б) 250 мг 3,7,. -диацетоксиа этинил/ -тетрагидропиранилокси 1,3,5/10/-эстратриена растворяют в10 мл метанола, добавляют раствор200 мг карбоната калия в 2 мл водыи кипятят в атмосфере азота 1,5 ч.Затем смесь выливают в ледяную водуи органическое вещество экстрагируют эфиром. После промывки водой, вы-.сушивания и выпаривания получают180 мг 17 о.-этинил) -тетрагидро"пиранилокси,3,5/10/-эстратриен 3,7 Ы -этинил.в) К расТвору из 230 мг 17 Е-эти-,нил)" -тетрагидропиранилокси,3,5/10/-эстратриен,7 оС-диола в5 мл пиридина при охлаждении льдоми в атмосфере азота добавляют 0,5 мпметансульфокислоты и перемешиваютв течение 38 ч примерно при 4 С ватмосфере азота. Затем все выливаютв ледяную воду, отфильтровывают осадок и растворяют его в, хлористом метилене, После промывки водой, высушивания и выпаривания получают 200 мг17 о-этинил,7 Ы бис-мезилокси тетрагидропиранилокси,3,5/10/эстратриена в виде сырого. продукта,который без последующей очистки применяется далее.П р и м е р 12. Раствор 200 мг17 о.-этинил,7 о. - бис-мезилокси тетрагидропиранилокси,3,5/10/эстратриена в 5 мл метанола смешивают с 500 мг щавелевой кислоты, растворенными в 2 мл воды и кипятят1/2 ч. Затем смесь вносят в ледянуюводу и органическое вещество эстрагируют хлористым метиленом, Послепромывки водой, высушивания и выпаривания получают 17 о-этинил,7 о-бисмезилокси,3,5/10/-эстратриен,9 -ол.П р и м е р 13. 3 г этинилэстрадиод инкубируют аналогично примеру 1аЬяЫ 1 а огсМдея /АТСС 8990/аярегд 111 ця 1 цсйц- /СВЯ/епя 1 яВЙ 1 горця п 1 Чг 1 сапя /АТСС 62260/Ре 111 сц 1 аг 1 а Ы 1 атпеп-"оьа /АТСС/13289/РЛ 1 горця огука 1 /АТСС 4858/кп 1 яорця Еагапепя 1 я /АТСС 8998/Ю 1 орця соЛцц /АТСС 8998/илийй 1 горця яо 1 оп 1 Ьег /АТСС 10404/677666 где В, имеет указанные значения, ферментируют грибковой культурой родааЬя 1 с 11 а огсйЫ 1 я, аярегс 111 ця 1 цспцепя 1 я, Вп 1 яорця п 1 цг 1 сапя, ре 111 сц 1 аг 1 а Р 11 авеп 1 ога,ВЫ.горця огуга 1,ВМгорця 1 саапеп 55, Вй 1 яорця соЬзц,ВМкорця яго 1 оп 1 йег или 61 р 1 ой 1 а пага 1 епя 1 я в концентрации 50-500 мгсубстрата на 1 л питательной средыпри 25-35 С и,в зависимости от необходимого значения ВВ,и В 9 в конечномпродукте этерифицируют одну или несколько гидроксильных групп до простыхэфиров или до сложных эфиров споследующим выделением целевых продуктов. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что для получения простых эфиров используют циклопентилгалогенид в присутствии основания или дигидропиран в присутствии кислоты. С нСН щ и слож 25 илитали иня и отличающий,17 о-этинилэстрадиолы 11ОН П 60 18928,к 09.42992,67.424 8,. опу Приор 14.10 таток 08.08 таток азам:слоты,4 В - СС-ацил+-ацило Состав Техред дактор Л. Письман Заказ 10632/1 Подписноо комитета СССРи открытийская наб, д. 4/5 Тираж 400ВНИИПИ Государственнопо делам изобретений35, Москва, Ж, Рауш ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 и После 45 ч времени контактирования содержимое ферментера дважды обрабатывают по 10 л метилизобутилкетона и экстракт упаривают в вакууме на водяной бане при ее температуре 50 С.Остаток очищают аналогично приме ру 1 и перекристаллизовывают.Получают 17 оЕ-этинил,3,5/10/ эстратриен,7 с, 17/ -триола, который идентичен полученному в примере 1 продукту.Формула изобретения1. Способ получения 7 с-ОВ эстрадиолов общей формулы 1 ОК водород, С -С,-алкил, С 4-С-ацильная, циклопентильная или тетрагкд ,ропиранильная группа; - одинаковые или различные водород, С-С 4 ацильная или тетрагидропиранильная группа, с я тем, что, л общей формУСпособ по п. 1, о т л и ч а юс я тем, что для получениях эфиров используют ангидридыорангидриды, в присутствии каторов. Источники информации,е во внимание при экспе. 74 при В 2 икарбоновой ки .75 при Висульфокислоты Федосеева Корректор Г. Решетни