“способ получения гидроокиси ангидро-4-карбамоил-5-окси 1рибофуранозилимидазола (брединина)

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПА 1 ЕНУУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(32 т Гооударственньй хамите Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий) Дата опубликования описания 05.08,77 Иностранц 2) Авторы изобретени Мицуо Хайнс еиуо Мацуда аки Та Иесиза кудзи Андо,дзино, МинетИностранная фирмаойо Иозо Кабусики Кайся(71 Заявител 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРООКИСИ АНГИДР 0.4.-."КАРБОМОИЛ-ОКСИ- РИБОФУ РАН ОЗ ИЛИ МИДА ЗОосфап ;нсле нятьсн влыив т л 1.нл слс ообмен. :орбции ой кис. елочнои иод нае 1)аыи 1 де серошка.к раств вато. белого лоро Этот порош честве воды дгтя кагелем и полу сушат под вакууор нзт в неболыиом коли. ния через колонку с силитивные фракции, которые рошок растворянгг в воде, азным сероводородом для хелатируняцих металлов. О оявз ают акмом. Пгазооб затем насыщаютыделения (осДальнейшую о жде ния) истку о угцествлянтг растворением Изобретение относится к области медицины.В извеспюй специальной и патентной литерату. ре прототипа способа получения гидроокиси ангидро - 4 карбамоил. 5. окси - 1- рибофуранозилимидазола не обнаружено.Целью изобретения является получение гидро- окиси ангидро . 4 - карбамоил . 5 - окси - 1- рибофуранозилимидаэола.Это достигается тем, что культуру Ецреп(с(111- тип Вге 1 ейапипт (чйй 1."5734 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, и выделяют целевой продукт из фильтрата культурной жидкос. ти известными приемами.В качестве микроорганизма - продуцента брединина исиольэунл Еореп(с(11 агп Вге 1 ед(апцпт, в качестве среды - обычную питательную для выращивания микроорганизмов среду, в качестве источника углерода - глюкозу, сахарозу, лактозу, маль. тозу, крахмал, декстрин, мелассу, глицерин, в ка. цестве источника азота - кукурузную замочную жидкость, спорошкованные соевые бобы, сиорошкованные семена хлопчатника, пшеничную клейковину, пелтон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт 1 тииголиэат казеина, аммонийные соли, нитратыг.и. Исиользунтг минерачытые соли: ф магния, кальция, калия, натрия, цинка,(двух- или трехваленгного) марганца. Температура выращивания может изме интервале 26-30 С, Продолжительность к ции зависит от условий и составляет 4070 ч Способ получения брелинина осуисествля дующим образом. Доводят рН фильтрата культуральной 1 О Евреи(с(111 огп Вге 1 едапигп МЯЯ(.-5734 д пропускают через сильно щелочную анион ную смолу в гидроксидной форме для аб брединина. Элюируюг 2% ной водной уксуст лотой и элюент обрабатыванл сильно щ 15 анионообменной смолой, элюат уиаривают куумом, в остатке иолучанл масло, которо ляюг добавлением метанола и ацетона в винеочищенного порошкообразного брединина в бу. ферном растворе О,1 моля пиридина-уксусиой ки лоты и пропускают полученный раствор через колонку с сефадексом ДЕАЕ А - 25. Брединин гере. кристалиизовываюг иэ активного элюата с добавлением метанола, получают его в виде белых кристаллов.П р и и е р 1. 100 мл среды, содержащей, вес.%: 2 глюкозы, 10 картофельного экстракта, 0,5 измеиьченного семени хлопчатника, 0,5 КНаРОа и 0,25 МоЯО, 7 Н, О, вносят в 500 мл колбу, стерили.зуют 15 мии при 120 С. Среду инокулируют спорами Еоревс шгп Вге 1 ейапие ИВВ 1. - 5734 (РЕВМР Хф 104), выращивают в качалке с 300 об,мии ири 26" С. Через 48 час культуральную среду иерео ят в 20 мл подобной жс среды в 30 лоферменгсое и выращивают ири 26 С, при перемешиваии (3 ОО об/мин) и аэрировании (20 и/мин) в течеиис 49 ас.Г 1 олу 1,нну и культуральиую среду переносят в 200 л заранее простерилизованной среды (рН - 6,5), годернищей, вес.%: 2 глюкозы, 1 пелтона, 1 замочной кукурузной жидкости, 0,2 Ка НР 0.0,1 М 980 а"7 НаО и О, иротивовспенивающего средства в :(Юл фермеитере, и выращиванл ири 26 С, прииере мешица нии (350 об/мин) и аэрации (200 л/л 1 ии) в течение 55 час. 11 олучают культураль. ный бульон (рН 5,91, солерзащий 50 мкг/мл брелшгина. Доволнт р 1 до 9,0 добавлением 50% ного водного раствора едкого патра и фильтруют, получанл 70 л прозрачисчо фильграта. Фильтрат про. пуска нт через колонку, содержащую 20 л амберли. та ВА - 4 1;о скоростьк подачи 300 мл/мин с цсльк абсорбции вещества и промываюг 50 мл воды. Элкиоваиие осуществляют 2%-ной водной уксусной кислогой и фракционирукл (виват) на5 л фракции.Активные фракции Р 7-9 собирают, доводят рН до 9,6 цобавлеиием 50%ного водного раствора едкого патра, затем пропускают через 4 л абмерлита, промывают водой, злюируюг 2%.ной водной уксусной кислотой и получают фракции ио 500 мл. Активные фракции Р 13 - 18 собиракл, уиарчвают пол вакуумом, получают 200 мл маслянистого остатка. Остаток перемецивают с 400 мл метанола и 200 мл ацетона и осаждают фугованисм при 3000 об/мин в течение 1 О мин. Преципитат промывают ацетоном. сушат иол вакуумом и получают 50 г неочищенного брединина (10% чистоты) в виде серовато белого порошка.П р и м е р 2. Полученный в примере 1 порошок наочдцениого брединина растворяют в небольшом количестве воды, сусиендируютв смеси растворителей и загружают в колонку с 500 мл силикагеля и смесью растворителей н.бутанола: уксусной кисло ты: воды (10: 1:2), после чего проявляют той же смесью растворителей, Элюент фракционнруюг на фракции ио ОО мл. Активные фракции (Мф 5 - 7 фиолетовойкраски) собиракг, сушат иод вакуумом, получани 14,3 г темно-сине-фиолетового 5741624пороцтка (26% чистоты), Порошок растворяют в 100 мп воды и насыщают сероводородом для выделения хелатирующих металлов в виде их сульфи.дов. Высушенный материал растворяют в 10 мл буферного раствора 0,1 моля пиридина-уксусной кислоты (рН 6,0) и пропускают через колонку, загруженную 400 мп сефадекса ДЕ АЕ А, с тел же буферным раствором. Элюат фракциоиируюг иа фракции по 10 мл, активные фракции У 70 35, 1 О собирают, сушат иод вакуумом, получают 1,8 гбелого порошка (90% чистоты) .При перекрисиллизации из метанола(горячего) получаю 1 1,1 г крис.таллического брединина (100% чистоты) .Физико- химические свойства брединина.15 Элементарный анализ:С 4170% Н 5 06% М 16 21%, О 34,03%, Мол.в: найдено -265 (тнтрованием); теорег- чески - 259,22С 9 Н 1 зчзОаоТочка плавления выше 200 ( ири разложениибуреет),Оптическое вращение- 35" (с =- 0,8; Н; ОУФ - спектр поглощения (в Н;0)ц.смаке: 245 ммкм, Есм = 250Р/оХмакс 279 ммкм, Е, ,=- 580Цветные реакции.Положительные: на хлорное железо, реакциюМолиша, перманганат калия, 11 аули и Эрлиха.Отрицательные: на реакцию Тоенса, Феинга.Драгендорфа, 1 ейлон-Сл 1 ита, на изаин, реакцинСакагучи и реакцию с нингидрином.Легко растворим в воде, Слабо рясвоим вметаноле. Трудно растворим в згаиоле. 1 ерас 1 ворнм в ходовых органических рас 1 ворителял. рКа;З 5 слабокислый (рКа 6,75).Не инактивируется ири рН 2-9, ии (О с. атечение 30 мин.Биологические свойства брелнищ.Острая токсичность:, г/кг Онурябркавон40 на мышах). Брединин ие оказывает ашибакгсрального действия, ио оказывает слабое ингибирунщее действие на Кандида арбикаис. Слабое иммуио.депрессивное действие набиюлакл ири введениибрединина в тот же день или в .ый лень (на45 следующий) после инъекции ОВВС. Гри введениибрединица на второй день отмечают наибольшееиммунодепрессивиое лействие и слабое депрессияное действие наблюдаот в 3 лень. Брединин обладает большим иммунодепрессивным действием. Ои50 не оказывает ивибируюиего действия иа размио.жение вируса герпеса иросто 1 о, в ируса поли о, в и Ру.са гемоаглютинацин (Японского), но ингиби руевирус вакциниа. Брединин оказывает слабос иро.тивоопухолевое лействие на асцитный тумор Эрии 55 ха и лейкемию- 1210 у мышей. Формула иэооретенияСпособ получения гидроокиси антеро . 460 -карбамоил - 5. окси. 1 - рибофураиозилими 1.Корректор А Кравченко Редактор А. Бер 2412/47 Тираж 541 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изооретеннй и открытий 113035, Москва, Ж, Раушскаа наб д. 4/5Заказ Филиал ППП "Патенг", г. Ужгород, ул. Проектнаа, 4 ла, о т л н ч а ю щ и й с я тем, что культуру Ецреъ а 11 цп ВгеФедапца й 1 ВВ 1. - 5734 выращивают в азробных условиях на среде, содержацей источники углерода, азота и минеральные солии выделяютцелевой продукт из фильтрата культуральной жид.кости известными приемами.