Од и

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 367724 Союз Советских Социалистических РеспубликфЪ Зависимое от авт. свидетельства-Заявлено 07.И 1.1971 ( 1679024/28-13)с присоединением заявки-ПриоритетОпубликовано 15 Х.1973. Бюллетень21Дата опубликования описания 20.И 1.1973 М, Кл, С 12 Ь 3,14 С 12 Ь 1/08Комитет по деламбретений и открытий УДК 663.13(088.8 н Совете Министров СССРАвторы зобретенж И. Козл а, Т. Е. Попо а, В. А, Рыбакова, Ои И. С. Бекреневвательский институтвеществ И. Великославинска Заявитель Всесоюзн оси нтеза белковых на чно-иссл СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ МИ РГАНИЗМО Изобретен вация микр на питатель Известен низ мов, па среде, соде нефти, в и стимулятор По предл сифицируетие относится к оорганизмов, н ой среде.способ выращив пример дрожжей, ржащей углеводо рисутствии минер а роста,агаемому способу способам выращиа пример дрожжей,ния микрооргана питательной одные фракции альных солей и ицтецивароцес ся и выход биомас лич 10ся.Это достигается тем, что в качестве стимулятора роста используют микробный жцр.Микробцый жир вводят в питательную средув количестве преимущественно равном 0,05 - 10,5% от объема питательной среды,Микробпый жир является побочным продуктом, получающимся при производстве кормовых дрожжей как из очищенных жидких парафинов, так и из нефтяных дисти,ллятов, Его 2выделяют при экстрактивной очистке биомассы дрожжей, полученной на углеводородах,растворителями (например, гексаном). Микробный жир содержит витамины и другиеценные физиологически активные вещества, 2значительно улучшающие условия роста дрожжей. В его состав входят фосфолипиды (10 -30%), триглицериды (22 - 40%), моцоглицериды и диглицериды (3 - 11%), стерины (3 -7%), свободные жирные кислоты (4 - 28%), 3 2стериновые эфиры и воск (7 - 18%), а также эргостерин (0,06 - 0,19%).В состав экстракта получающегося пр очистке дрожжей, помимо микробного жира, входит 15 - 30% остаточных углеводородов.Внесение микробного жира в культуральцую среду в количестве 0,05 - 0,5 об. % интенсифицирует процесс размножения дрожжеи и потребления ими и-алкацов в присутствии углеводородсодержащего нефтяного сырья, цо це обеспечивает заметного прироста биомассы в отсутствии нефтяных дистиллятов.Микроорганизмы, например дрожх(и, выращивают ца средах с 12 - 20% высокопарафиццстых нефтяных дистиллятов, содержащих 40 - 45% и-алкинов, При столь высоком содержании углеводородов в среде (5 - 8% в пере счете на и-алканы) дополнительное их внесение с микробным жиром це может оказать влияния на развитие дрожжей.Культивирование дрожжей осуществляют в условиях периодических и непрерывных опытов.Периодические опыты проводят в стерильных условиях в среде, содерх(ащей в достаточ ном количестве и-алканы (5 - 8%) и минеральные компоненты питательных сред для обеспечения максимального накопления био. массы применяемой культурой микроорганизма. При добавлении к культуральной среде12 микробного жира в количестве 0,05 - 0,5 об, %к общему объему среды выход дроккей увеличивается на 48 - 65,4% по сравнению с ко:тролем,Культивирование микроорганизмов непрерывным способом ведут в ферментерах приперемешивании и аэрации среды в нестерильных условиях в водной питателыой среде снефтяными дистиллятами, Водная питательная среда состоит из раствора солей, содержащих ионы аммония, фосфата калия и магии:в количествах, оптимальных для развития цс.пользуемого штамма микроорганизма. Микроэлементы в среду можно не добавлять.Культивирование микроорганизмов осуществляют при перемешиванци среды в условияхаэрации. Температуру процесса поддержцвьиот32 - 34 С, рН, равное 4 - 5, регулируют путемдобавления раствора аммиака или едкого патра, В ферментеры непрерывно подают углеводородную фракцию и водную питательнуюсреду и отбирают дрокжевую суспецзцю. Коэффициент разбавления среды измснгцот от0,07 до 0,5 час-.Установлено, что добавление к культурал; -ной среде микробного жира увеличцваст выходбиомассы дрожжей ца 40 - 45% по сраиенцюс контролем. При этом улучшд:отся технологические параметры процесса: производитель.ность фермецтера, вХод дрожкец с 1 т здтраченцого нефтяного сырья, Улучшается так)ке и состав биомяссы, сумма Оел(оных и жи.ровых веществ в котором составляет 68,478,3% (при добавлении жирд).Результаты показывают, что добавлениесреду микробного ж;ра, полученного прцочистке биомассы дроккеГ растворителями,приводит к значительному увелцчени 10 производительности фермептера.В контрольном вариднте опыта произи)дцтельность фермецтера составляет 5,8 кг с1 т 1 час среды, а при добавлении 0,5% жирак протоку достигает 8 кг с 1 т,час среды, Выход дрожжей с 1 т нефтяного дцстцллята вконтроле составляет 240 кг, а при добавлешиэкстракта достигает 336 кг. Выход суммы белк 0 вых и Жировых веществ увеличивается68,4% на сухую биомассу в контроле до 78,1%прц добавлении липидноуглеводородного экстракта.П р ц м е р 1. Периодическое выращиваниедрожжей Сспс 1 с 1 а оц 111 егп)опс 11 Нпроводят в конических колоах цд 500 лл, содержащих 50 мл среды следуОнего состава:Сернокцслый аммоций, г 6Фосфорцокцслый однозамещецный калий, г 2,4Сернокцслый магний, г 0,9Хлористы кальций, г 0,15Вода, л до 1Нефтяной дистиллят (фракцця 240 - 360 С из нефтиСтавропольского месторождения, содержащеи 42%н-алканов, %1,990,6370,321 Микробный жир (к об-. емусреды), % 0,25Инок 1 слятом служит оиохасса дрожжец, полученная на среде того же состава ц внесенная в количестве 0,6 1 г/,1 в пересчете на с;хое вещество.Дрожки юльтивцруот в стерцльых услогиях в течение 40 час на кругогой качалке(240 об(лНн) црц 32 С. Во время всего перцо 10 да ицкубдциц р 11 среды подперкивают науровне 4,0 - 4,5 введением стерильного раствора Ха 011.БиомСс, дрокже ОтделяОт От среды центрифугированием в присутствии неионогенного15 ПАВ из расчета 0,1% активного вещества кобъему среды. Отделенную от культуральцойсреды биомассу промываот от остатков ПАВцентрифугированцем с подогретой до 40 С водой. Г 1 рцрост биомассы прц:)том в пересчеге20 ца сухое вещество составляет 11,9 г ца 1 кгсреды.В контролиОм Оп 1.те прц тех же;словцяхкультигцровация прирост биомассы ссставляст 6,7 г сухого ве;цествд ца 1 кг среды, т. е.25 прирост биомассы прц внесении 0,25% микрооцого кира увеличивается ца 77,6 оо по сравценцО с контролем,П р и м е р 2. Одностадийцое непрерывцое культивирование дроюкей Сап(1 с 1 а с 130 еггпопс 1-1-542 проводят в ферментере саэраццей и перемешиваццем в среде с нефтяным дистиллятом, содержащим 42% и-парафинов.Состав питательной среды:1 ефтяцой дистцллятл 150Сульфат аммония, г 12,74Ортофосфорцая кислота(70% ), лл40 Хлористый калий, гСерцокцслый магний, гСер цокцслое закцсцое келезог 4Серцокислыц марганецг 8Сернокислый цццк, г 8Сернокцслдя медь, г 0,8Вода, л до 1Мцкробь жцр, ияделеццьй при экстрактцвной очистке гексдном дрожжей, полу С 50 ных цд средах, содержащих и-алканы и сво.бодный ог растворителя, добавляют в количестве 0,5% к протоку. В его состав входит80% биолцпцдов ц 20% углеводородов. Контрольный вариант опыта ведут при тех ке ца 55 раметрдх процесса, цо мцкробный жцр в среду це вносят.Процесс ведут прц рН среды 4,0 - 4,2, прц31 - 32 С, уделыОм расходе воздуха 60 об/часи коэффициенте разбавления 0,2 час - , Про 60 песе контролируют через каждые 2 час поконцентрации дрОжжсй в 1)еръентере, рН,температуре, остаточному содержанию азотаи фосфора в среде.Дроюкевую суспензцю из фермецтера по.65 дают в сборник, в котором происходит рас367724 Составитель Г. Субботина Техред Л. Грачева Корректор А. Царькова Редактор Р. Киселева Заказ 2028/ Изд,532 Тираж 467 ПодписноеЦ 1 И 1 Комитета но делам изобретешш и открытий при Совете Министров СССРМосква, )К, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 слоение суспензии на два слоя: верхний (бомасса дрсжжсй в нефтяном дистилляте) и никний (водный). К верхнему слою добавляют раствор неионогснного ПАВ (технический сульфоурсП) нз расчета 0,1% активного вешестг,з:. обьсму слоя, Смесь перемешивают и разделяот на сепараторе с 5000 об/мин. Нефтяно д стнллят собирают в сборник. Дрожж И,слс сепарации сушат на распьл 1- тельной сшилке п)и 10 оС.Произтднтсльн, сть ферментсра при добавлении к среде 0,5% микробного жира составляет 8 кг с 1 т/нас среды, а в контроле - 5,5 кг с 1 т/час среды. Следовательно, при добавлении микробного жира производительность аппарата возрастает на 44 о/о, Выход биомассы дрожжен в контроле составляет 230,9 кг, а прн добавлении жира 333,3 кг. Содержание суммы белковых и жировых веществ в контроле составляет 62,5 о/о на сухую биомассу, а при добавлении микробного жира увеличивается до 66,9%.5Предмет изобретения1. Способ выращивания микроорганизхов,например дрожжеи, на питательносреде, содержащей углеводородные фракции нефти, в 10 присутствии минеральных солей н стимулятора роста, отлчатщйс тем, что, с целью интенсификации процесса н увеличения выхода биомассы, в качестве стимулятора роста использ 1 От микрооньЙ жир.15 2. Способ по п. 1, от.чаоир/с тем, чтомикробный жнр вводя в и;татсльнуо среду в количестве, преимуществево раьном 0,05 - 0,5 о/1 от объема питательной среды.