Способ иммуноэлектроосмофореза

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1714511 6 01 й 33/561 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН В Бюл. М 7 авказский итут фитоп ин, И.И.Со научно-исследоваатологиислов и И,С.Канев 24, 1092-1094.ЛЕКТРООСМОФО 8,8)64, 201.ММУНО ие отно етоду к тся к иммунологии,. ичественного имму. Площадь в шенными преципитаемого участка ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕ(57) И зоб ретев частности к Изобретение относится к иммунологии, в частности к методу количественного иммуноэлектрофореза, и может найти применение при изучении количественных изменений специфических антигенов,Цель изобретения - количественное определение антигена способом встречного электроиммуноосмофореза при использовании поливалентных сывороток,Способ осуществляется следующим образом.Проводят анализ антигена методом встречного иммуноэлектроосмофореза, окрашивают образующиеся преципитаты Кумасси й,Для определения количества антигена иммунофореграмму подвергают стандартной обработке (сушка, окраска, промывка), затем вырезают участок фореграммы с окраоэлектрофореза, и может быть использовао для изучения количественных изменений нтигенов, Цель изобретения - количестенное определение антигена способом стречного электроиммуноосмофореза. Для существления способа проводят анализ нтигена методом встречного иммуноэлектофореза и после окрашивания пластины ыреэают участки геля с окрашенным преципитатом, элюируют их 0,1%-ным раствоом додецилсульфата натрия в 0,1 М цетатном буфере, рН 5,0, с последующим фотометрированием элюата. 2 табл. где А - расстояние между центрами лунок,мм;В - диаметр лунки+.4 мм (2 мм с каждой.стороны лунки), мм,Перед вырезанием сухой гель смачивают дистиллированной водой. Вырезанныйучасток фореграммы с окрашенным преципитатом.элюируют 0,2 М ацетатным буфером, рН 5,0; содеожащим 0,1%-ныйдодецилсульфат (ДДС) Ма, при 50 С в тече-;ние 1 ч.Экстракт фотометрируют при 565 нм, авычисление проводят исходя из.соотношения оптических плотностей растворов ана1714511 Таблица 1 лизируемого образца и наиболее близкого по окраске контрольного образца с известным содержанием антигена.П р и м е р 1. Навеску (1 г) листьев пшеницы, зараженных ржавчинным грибом, растирают в 0,1 М трис-глициновом буфере, рН 8,6, содержащем 0,1 аскаорбата натрия (5 мл). Экстракт центрифугируют при б тыс, о и сгущают криодиализом до 1/10 исходного объема. 0,05 мл надосадочной жидкости наносят в верхние лунки фореграммы. Размеры фореграммы определяются размером стекол, на которые нанесен гель.Шесть лунок на фореграмме содержат определяемый антиген в известных концентрациях. В нижние лунки вносят антисыворотку с титром 1:128. Электрофорез проводят при напряжении 10 В/см и силе тока 1,5 мА/см, Участок фореграммы с окрашенными преципитатами вырезают, как описано. Окраску элюируют 3 мл 0,2 М Каацетатного буфера, рН 5,0, содержащего 0,1; ДДС йа, втечение 1 ч при 50 С. После замеров оптической плотности при 565 нм подбирают образец с известным содержанием антигена, оптическая плотность которого наиболее близка оптической плотности анализируемого образца. Далее из соотношения этих оптических плотностей определяют концентрацию ржавчинных антигенов в анализируемом образце и проводят пересчет на 1 г сырого веса.В каждом образце грибные антигены определялись параллельно и методом ракетного электрофореза по Лоуреллу,В табл. 1 представлены результаты сравнения определения грибных антигенов в листьях пшеницы методом ракетного алектрофореза и количественного электроосмофореза.Как видно из табл.1, при определениигрибного белка методом ракетного электро 5 иммунофореза по Лореллу с использованием паливалентной сыворотки, реагирующейс множественными антигенами гриба, получаются резко (в 3-4 раза) заниженные результаты по сравнению с теми, которые дает10 предлагаемый способ, предусматривающийфотометрирование красителя, связанногокомплексом антиген - антитело.П р.и м е р 2. К экстракту здоровыхлистьев пшеницы добавляют определенный15 объем гомогената из уредоспор стеблевойржавчины с известным содержанием белка ипроводят определение антигена в экстрактеметодом количественного электрофореза.Результаты определения приведены в20 табл.2,Как видно из табл,2, предлагаемый способ отличается хорошей чувствительностьюи точностью в достаточно широком диапазоне концентрации,25 Формула изобретения Способ иммуноэлектроосмофореза,включающий иммунопреципитацию с по мощью встречного иммуноэлектрофореза,окраску образующихся преципитатов, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью количественного определения антигена, после завершения иммуноэлектроосмофореза 35 вырезают участки геля с окрашенным преципитатом, элюируют их 0,1-ным раствором додецилсульфата натрия в 0,1 М ацетатном буфере рН 5,0 с последующим фотометрированием элюата.401714511 Таблица 2 Составитель И.БашкаевТекред М.Моргентал . Корректор О,К эктор О.Юрковецк Заказ 689 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открыти113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5 и ГКНТ ССС оизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101