Способ определения эндотоксикоза при хирургических операциях

(19) (11) 55 6 01 й 33/68 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЪТИПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТОРСКОМУ ИДЕТЕЛЬС(71) Уральский институт усовершенствования врачей и Институт биофизики СО АНСССР(56) Габриэлян Н.И., Левицкий Э.Р., Дмитриев А,А. и др. Скрининговый метод определения средних молекул в биологическихжидкостях, М 1985, с. 18 - 19.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИКОЗА ПРИ ХИРУРГИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЯХ(57) Изобретение относится к медицине иможет быть использовано для контроля динамики и прогнозирования состояния больИзобретение относится к медицине и Может быть использовано для контроля динамики и прогнозирования состояния больного при тяжелых хирургических эндотоксикозах (разлитой гнойный перитонит, панкреонекроз и др,).Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа,В реакционную смесь, содержащую НАДН:ФМН-оксидоредуктазу, люциферазу и их субстраты в насыщающих кон центраци ях, добавляют анализируемую биологиче- скую жидкость с . измерением интенсивнОсти свечения.до (11) и после (12) добавления исследуемого субстрата, О динамике заболевания судят по изменению величины 12/1 по сравнению с нормой.Способ осуществляется следующим об-ных при тяжелых хирургических эндотоксикозах, Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа за счет того, что в среду в качестве тестирующего вещества добавляют смесь НАДН;ФМН-оксиредуктазы люциферазы и их субстратов в насыщающих концентрациях, далее вносят исследуемую сыворотку йрови больного. При этом на хемилюминометре определяют уровень свечения смеси до и после внесения сыровотки 11 и 12 соответственно, рассчитывают величину отношения 2/11 и при значении этого показателя более 48% относител ь но нормы оп редел я ют эндотокси коз. Способ позволяет повысить точность определения, т,к, исследуются микрообьемы сыворотки крови. Время анализа не более 2 мин. В работе используют лиофильно высушенный частично очищенный препарат ферментов, .содержащий 0,07, единиц активности НАДН:ФМН-оксидоред 1 У 1 ктазы, люциферазу с активностью 14,6 10 квант с и 0,71 мг белка, Активность НАДН;ФМН- оксидоредуктазы оп ределяют спектрофотометрически, за единицу активности принимают активность 1 мг.фермента, окисляющего 1 мкг НАДН в минуту,Перед измерениями приготавливают следующие реактивы.Лиофильно высушенный препарат люциферазы разводят в 1.0 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 6,8.0,00254-ный раствор тетрадеканаля в 0,1 М фосфатном буфере рН 6,8.Раствор НАДН (4 10 М).Раствор ФМН (5,4 ф 10 М).Измерения проводят на хемилюминометре ХЛМ 1 Цпри 25 С следующим образом,В кювету хемилюминометра помещают50 мкл 0,0025%-ного раствора тетрадеканаля, 50 мкл ФМН (5,4 10 М), 20 мкл препарата НАДН:ФМН-оксидоредуктазы илюциферазы, 2 мл 0,1 М фосфатного буфера,рН 6,8, 200 мкл (4 10 М), После достиженияпостоянного уровня свечения 1 = 15000мп,/с добавляют 40 мкл анализируемой биологической жидкости (сыворотки крови,лимфы и т.п.). При этом интенсивность свечения изменяется до величины , Рассчитывают величину отношения 2/1 (%).Аналогичным образом измеряют биолюминесценцию биологических жидкостей тогоже больного в процессе лечения,. Для сывороток крови доноров показатель 2/1 был 46 + 1,94%, для лимфы и экссудата брюшной полости этот показательнеопределим в связи с невозможностью за бора этих сред у здоровых людей.П р и м е р 1, Больной Ч 28 лет, поступил через 18 ч от начала заболевания с жалобами на интенсивные боли в животе.Состояние удовлетворительное, При осмотре выявлена резкая болезненность и легкоенапряжение мышц в правой половине живота. В крови умеренный лейкоцитоз, анализымочи без патологии, Тест на.токсичностьсыворотки крови описанным способом составил 53,6% (токсикоз имеется), В связи стем, что клинически не представлялось возможным исключить деструктивный процессв брюшной полости, больному выполненадиагностическая лапороскопия, при этом было подтверждено наличие эндотоксикоза.П р им е р 2. Больной Л.,40 лет, поступил через 10 дней после перелома костейтаза, повреждения прямой кишки, массивной забрюшинной флегмоны, сепсиса, Произведено вскрытие забрюшин нойфлегмоны, удалено до 600 мл густого гноя сгнилостным запахом. На следующий деньсостояние больного очень тяжелое: энцефалопатия, явление дыхательной недостаточности, высокая температура, по дренажамиз забрюшинного пространства - обильноегнойное отделяемое. В крови анемия, гипопротеинемия, высокий лейкоцитоз с выраженным нейтрофильно-ядерным сдвигом,Кровь больного исследовали описаннымспособом, Величина 2/1 была равна156,6% (тяжелый токсикоз), В ближайшиедни сохранялась клиника тяжелого эндотоксикоза. Многократные исследования тестана токсичность сыворотки крови предлагаемым способом показывали его очень высокий уровень 15 Х 3 - 170%.10 15 20 25 30 50 55 35 40 П р и м е р 3, Больная П., 83 года, поступила и оперирована по поводу разлитого гнойного перитонита на почве перфорации тонкой кишки. Сразу после операции состояние больной тяжелое: тахикардия, тахипноэ, в крови выраженный лейкоцитоз со значительным сдвигом формулы влево, по дренажам из брюшной полости гнойное отделяемое. Тест на токсичность сыворотки крови описанным способом составил 193,3% (тяжелый, токсикоз). В результате проводимой интенсивной терапии отмечена положительная динамика. На 5-й день после операции состояние больной оценено как средней тяжести. Тест на токсичность сыворотки крови предлагаемым способом составил 98% (токсикоз средней степени тяжести), что полностью коррелировало с клиническими и лабораторными данными,Во всех приведенных примерах при использовании способа-прототипа не удалось установить наличие эндотоксикоза (все исследуемые показатели соответствовали норме). Таким образом, способ прост в выполнении, характеризуется повышенной точностью, время анализа сокращено в 10-100 раз, анализ не зависит от введения или наличия в сосудистом русле лекарственных препаратов. Полученные данные коррелируют с состоянием больного и могут быть использованы для объективизации течения болезни, что наиболее важно для больных с тяжелыми хирургическими токсикозами, часто находящихся в терминальном состоянии.Способ позволяет в ранние сроки послеоперационного периода прогнозировать состояние больного и возможные тяжелые осложнения. Вовремя принятые профилактические меры способствуют повышению эффективности лечения больных, что выражается в снижении количества летальных исходов и уменьшении материальных. затрат, связанных с длительным пребыванием больных с постоперационными осложнениями на излечении, Способ не травматичен для больного, требует минимальных количеств крови (10 - 40 мкл), методически прост и позволяет проводить серийный анализ на серийно выпускаемых приборах и реактивах,Формула изобретенияСпособ определения эндотоксикоза при хирургических операциях путем помещения сыворотки крови больного в среду с тестирующим веществом и сравнения величины физических показаний среды до и после добавления крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и повышения1714512 10 20 30 Составитель И, ЕмельяненкоРедактор О, Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор С. Шевкун Заказ 690 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патен", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 точности способа, в качестве тестирующего вещества используют смесь НАДН;ФМН- оксиредуктазы, люциферазы и их субстра- тов в насыщающих концентрациях, определяют на хемолюминометре уровень свечения до и после добавления в смесь сыворотки крови больного, рассчитывают величину отношения второго показателя к первому и при повышении этого значения более 48 ф 4 относительно нормы определя ют эндотоксикоз.