Способ получения сорбента для аффинной хроматографии

(54) СПОСОБ ПОЛУ АФФИННОЙ ХРО (57) Изобретение производных цел быть использован ЧЕНИЯ СОРБЕНТАМАТОГРАФИИогносится к получеюлоэы, которые мв качестве сорбе ию гут тов олым ди 1 эОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Авторское свидетельство СССРйг 968039, кл, С 08 В 15/06, 1981,Авторское свидетельство СССР(Ф 1512974, кл. С 08 В 15/06. 1987 л. МЗОбиоорганической химии Изобретение относится к получению производных целлюлозы, которые могут быть использованы в качестве сорбентов для аффинной хроматографии, используемых в биотехнологии.Цель изобретения - повышение механической прочности сорбента.П р и м е р 1, 4,1 г свежеприготовленного Со(ОН)2 растворяют в 50 мл 25%-ного МН 40 Н, раствор добавляют к 5 г целлюлозы иэ линта хлопчатника. Через 20 ч объем смеси доводят тем же раствором аммиака до 500 мл, Раствор осветляют центрифугированием в течение 5 мин при 4000 об/мин, 50 мл полученного медно-аммиачного раствора помещают в сосуд емкостью 500 мл, куда налито 200 мл смеси хлороформ:бензол 1:9, содержащей 0,26 мас,% (0,6 мл с б,08 Ы 1669918 08 В 15/06, б 01 И 30/48 12 М 11/12 для эффинной хроматографии в биотехнологии, Изобретение позволяет повысить механическую прочность сорбентов зэ счет того, что целлюлозу осаждают иэ эмульсии 1%- ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при их обьемном соотношении соответственно 1:9, содержащей 0,13-0,26 мас.% полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, раствором уксусной Кислоты в ацетоне, Выделенный продукт обрабатывают 1,6%-ным раствором боргидрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч с последующей обработкой водным щелочным раствором, содержащим 0,01-0,05 мэс.% эпихлоргидрина и 0,01-0,04 мас,% боргидрида натрия, при нагревании Затем продукт активируют водным рэство ром периодата натрия и коныюгирую 1 с белком. 1 табл. гсм полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата.зВ сосуд опускают мешалку и эмульгируют в течение 4-5 мин при 440 об/мин. Эмульгированную целлюлозу выпускают через нижний отросток в регенерирую,ций раствор, содержащий 500 мл ацетона и 50 мл ледяной уксусной кислоты, Через 8 мин, выпавшие шарики, отделяют и промывают 10-ю обьемами воды.Пористые целлюлозные шарики фракционируют на капроновых ситах и отделяют фракции, содержащие частицы целлюлозы размером 70-200 мкм1 г (100 мл) пористых целлюлозных шариков(ПЦШ) помещают в круглодонную к бу емхостью 500 мл, снабженную обратн холодкльнихом, добавляют 100 мл пири на, содержащего 1,6 мас.% боргидридэтрия,и нагревают на водяной бане в течение 8 ч. После этого сорбент промывают на воронке Бюхнера сначала ацетоном, а затем дистиллированной водой до исчезновения следов ацетона. 51 г(100 мл) ПЦШ промывают еще раз на стеклянном фильтре дистиллированной водой, переносят в стакан, суспендируют в 70 мл дистиллированной воды и добавляют 20 мл 12 -ного раствора МаОН, 0,016 мас,10 (0,2 мл, с=1,18 г/см ) эпихлоргидрина и 0,01змас.(20 мг) МаВН 4, Стакан помещают в водяную баню и нагревают смесь до 60 С в течение 2 ч, постоянно перемешивая посредством механической мешалки, Через 2 15 ч продукт промывают дистиллированной водой до нейтрального значения рН.Затем сорбент ативируют обработкой 0,015 М раствором Ма./0 в течение 18 ч в темноте и снова промывают водой. 20Далее сорбент обрабатывают 0,1 М карбонат-бикарбонатным буферным рас 1 вором с рН 9,2 и для получения иммуносорбента добавляют предварительно отдиализованный против буфера белок (гамма-лобулин 25 лошади). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре и инкубируют 1 сут при 4 ОС. Полученный иммуносорбент промывают поочередно 0,01 М раствором НС в 0,15 М растворе йаС и затем 0,1 М 30 борно-боратным буфером с рН 8,6. Свободные альдегидные группы восстанавливают обработкой иммуносорбента 0,1 М йаВН 4 в 0,15 М ИаС 1, а затем отмывают его 0,15 М раствором чаС, Количество присоединившегося белка, отделяют по окрашиванию бромфеноловым синим.Условия получения и свойства сорбента при различных параметрах способа предс 1 авлены в таблице.Формула изобретенияСпособ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий осаждение целлюлозы из эмульсии 1 -ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении их соответственно 1:9, содержащей 0,13-0,26 мас.полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, раствором уксусной кислоты в ацетоне и обработку выделенного продукта 1,67;-ным раствором боргидрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч с последующей активацией водным раствором периодата натрия и коньюгацией с белком, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения механической прочности сорбента, перед активацией продукт обрабатывают водным щелочным раствором, содержащим 0,01-0,05 мас.эпихлоргидри. на и 0,01-0,04 мас.боргидрида натрия при нагревании, 16699180 О о ол о о Юово Ощ о о о о л в в в о о о о х о М о о о с СЧ СЧ с о о л о о о о о о о о о о о о о о о оо оо ол о о о о о о л л о о о о ЬЬЬЬЬ Ь с Ь Ь о Ю а 3 в а а О д о х х о х о х ф ь й х о л Фв ом ох о е Е 3 О4 в л о оОО СЧ СЧ в в о о ОО СЧ СЧ в в о о 00 О СЧ СЧ СЧ в л в о о оМЛ О Л СО СО СО ОЭ СО СО СО СО СО СООСО СОоЩЕвХ ЮхоСо хх хай хох уо аа р;3Оц оС 10хВфо авохо оЦоВв го цоБ йд хо юЕИ о3В О,ц о ао вю хв и х нв со ю хООо осов оохфх е юво,д эао ои о