Способ определения бергаптена

СОЮЗ СОВЕТСКИХсйьвиумаснРЕСПУБЛИК 04 С 01 И 21/ ГОС ПО ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЕЛЬСТВ ОМУ С К АВТ 3 ь АРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРЛАМ ИЗОБ ЕТЕКИй И ОТКРТИй(71) Курский государственный медицинский институт(56) Медицинская промьппленность СССР 1965, В 4, с. 44-48.Генкина Г.Л. Методы анализа фуро" кумаринов. - Химико-Фармацевтический журнал, 1981, У 11, с.108-113.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕРГАПТЕНА (57) Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно кспособу определения лекарственногопрепарата - бергаптена. Цель изобретения - повышение чувствительности иселективности способа. Анализ ведут обработкой раствора анализируемой про"бы в спирта раствором хлорамина Б вэтаноле, концентрированной солянойкислотой и гидроокисьв аммония споследукзцим нагреванием на кипящейводяной бане и измерением флуоресцелции полученного раствора. Чувствительность способа 0,005 мкг/мп.3 табл. е1231443 5 1 О 15 20 25 ЗО Флуоресценция до обработкиреактивами ФлуоресСоединения ценция после об работкиреактивами Бергаптен Кумарин Изобретение относится к фармацевтической химии, а именно к способам определения бергаптена-метокси7-фурокумарина, и может быть применено для качественного и количественного анализа этого соединения в различных объектах для фармацевтических исследований,Целью изобретения является повышение чувствительности и селективности способа,П р и м е р 1, Качественное определение бергаптена.К 1-2 мг субстанции бергаптенаили порошка мелкоизмельченных таблеток прибавляют 6,5 мл 96%-ного этилового спирта и встряхивают до растворения препарата. Прибавляют 0,2 мл47-ного раствора хлорамина Б в этаноле и 0,5 мл концентрированной соляной кислоты, перемешивают и через5 мин прибавляют 2,8 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония, В ультрафиолетовом свете со светофильтромУФСили УФСнаблюдают яркую зеленую флуоресценцию,Время определения 6-7 мин,Данныеофлуоресценции бергаптенаи родственныхсоединений представлены в табл,1.П р и м е р 2. Количественное определение бергаптена в субстанции.0,01 г (точная навеска) субстанции бергаптена помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в 80-90 мл967-ного этилового спирта, доводятдо метки объем полученного раствора,К 0,5 мл данного раствора (аликвотная часть) прибавляют в пробирке6 мл 96%-ного этилового спирта,0,2 ил4%-ного раствора хлорамина Б в этаноле и 0,5 мл концентрированной соляной кислоты, перемешивают. Через5 мин прибавляют 2,8 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония и перемешивают, Нагревают пробирку с раствором на кипящей водяной бане до 100 Си быстро охлаждают, Измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартномус содержанием бергаптена 1 мкг/мл.По ка 5 Олибровочному графикуопределяют содержание бергаптенав пробе. Результатыопределения представлены в табл, 2.,П р и м е р 3. Количественное определение бергаптена в таблетках"Псоберана" по 0,01 г.О, 118 г (точная навеска) мелкоизмельченных таблеток помещают в мерную колбу на 100 м;, и растворяют в 80-90 мл 967.-ного этилового спирта, довести до метки объем полученного раствора, 1 мл полученного растворананосят на приготовленную хроматографическую пластину с тонким закрепленным слоем силикагеля марки ЕС5/40, чехословацкого производстваи хроматографируют восходящим методом в системе растворителей гексанэтилацетат (3;1), Зону бергаптена,отмеченную в УФ-свете по величинеКГ (равной 0,58) или по отношению кстандарту, .количественно переносятв пробирку и элюируют 6,5 мл 967.этилового спирта, Жидкость после элюирования сливают с осадка, а к полученному раствору прибавляют 0,2 мл 4%раствора хлорамина Б в этаноле и0,5 мл концентрированной соляной кислоты, перемешивают. Через 5 мин прибавляют 2,8 мл 25% раствора гидроокиси аммония, перемешивают. Нагреваютпробирку с раствором до 100 С ибыстро охлаждают. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному ссодержанием бергаптена 4 мкг/мл. Покалибровочному графику определяютсодержание бергаптена в исследуемом образце. Содержание бергаптена в 1 таблетке колеблется от 0,0035 до0,0045 г, что составляет около 407 отсуммы двух фурокумаринов, содержащихсяв таблетке.Результатыопределения бергаптена в таблеткахПсоберана"по 0,01 г представлены в табл,3.По,цобной реакции не дают и не мешают определению близкие по структуре соединения;кумарин, ксантотоксин,виснадин, неодикумарин, фепромарон, синкумар,зоокумарин,что былодоказано на образцахданных соединений. Данные о флуоресценцииродственных бергаптену соединений представленыв табл,1.Чувствительность способа 0,005 мкг/мл, что в 400 раз выше ранее известного (2 мкг/мл).Таблица 1 Слабая го- Яркая зелубая леная Нет Нет3 1231443Продолжение табл, 1 КсантотокСлабая зе- э Слабая син зеленая леная Таблица 3 Нет Нет Виснадин 1 О Взято на анализсубстанции, г Неодикумарин Найдено бергаптена, г тт тт тт тт тт тт ФепромаронСинкумар 15 0,01 0,0098 0,0096 0,0098 0,0099 0,0095 тт тт ЗоокумаринГерниарин 0,01 тт Голубая 0,01 20 6-Метилкумарин 0,01 тт Нет 0,01 0,01 0,0097 25 Результаты определения бергаптенав таблетках "Псоберана" по 0,01 гпредставлены в табл.2.Та блица 2 0,01 0,0097 0,0098 0,0099 0,0095 0,01 30 Навеска иэмель- Найдено бергапченных таблеток, г тена, г 0,01 0,01 35 0,1183 О, 1184 О, 1182 ВНИИПИ Заказ 2559/49 Тираж 778 Подписное Произв.-полигр, пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 О, 1184 О, 1183 0,1184 О, 1189 О, 1184 О, 1184 О, 1183 0,0036 0,0037 0,0039 0,0049 0,0042 0,0044 0,0040 0,0037 0,0045 0,0039 4Содержание бергаптена в таблетках различной серии при одинаковой навеске, взятой на анализ, колеблется от 0,0035 до 0,0045 г в расчете на одну таблетку. Результаты количественного определения бергаптена в субстанции приведены в табл.3. Содержание бергаптена в субстанции колеблется от 0,0095 до 0,0099 г.40 Формула изобретения Способ определения бергаптена, включающий обработку химическим реагентом и фотометрирствание, о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повьппения чувствительности и селективности определения, раствор анализируемой пробы в спирте последовательно обрабатывают раствором хлорамина Б в этаноле, концентрированной соляной кислотой и гидроокисью аммония с последующим нагреванием на кипящей водяной бане и измерением флуоресценции полученного раствора.