Способ постановки реакции коагглютинации

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН А 1 Н 33/4 51 ГОС ПО ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ вский,.Г. Петий орде институ иималеи у, 1974,АРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПИЙ ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬ(54) (57) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИКОАГГЛЮТИНАЦИИ, включающий предварительную сенсибилизацию клеток стафилококка Соътап 1 специфической кисследуемому антигену сывороткойс последующим добавлением к полученному диагностикуму исследуемогоантигена, инкубированием и учетомрезультатов реакции, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощенияспособа, сенсибилизацию стафилококкапроводят сывороткой в разведении,предельном для данной реакции, проводимой на стекле, а реакцию ставятна планшетах с 0 -образным дномлунок, 11Изобретение относится к микробиологии и иммунологии, в частностик клинической микробиологии и иммунологии, и предназначается длядиагностики инфекционных болезней ивыявления специфических антигенов вэкспериментальных исследованиях.Целью изобретения является повышение чувствителььости и упрощениеспособа.Способ осуществляют следующимобразом,Используют коммерческую илиспециально приготовленную кроличьюсыворотку, специфическую к исследуемому антигену. Готовят двукратныеее разведения на фосфатно-солевомбуФере (ФСБ) рН 7,4 от 1:2 до1: 100000, 1 мл каждого разведениясыворотки смешивают с 0,9 мп 107-нойвзвеси формалинизированного стафипококка (0,53 Формальдегида, 37 С - 3 ч),прогретого (80 С - 1 ч 1 штаммаоЯйарЬ, ацгецз Соуп 1. Смесь сыворотки и стафилококка тщательноперемешивают в течение 1-2 минпри кбмнатной температуре и доводят,ФСБ до 17-ной концентрации, Конечсные разведения сыворотки в этихдиагностикумах составляют от 1;200до 1: 1000000.На обезжиренные предметные стекларасчерченные карандашом по стеклу,наносят по 1 капле диагностикума.и 1 капле тест-антигена, взятогов концентрации 1 мг/мл и далее вдесятикратных разведениях от 10до 10 Змг/мп. Смесь осторожно перемешивают покачиванием стекол в течение 2-5 мин и учитывают результат.Предельное разведение сыворотки,при котором полученный на ее основе диагностикум дает отчетливую(на 2+ и 3+) РКА на стекле, используют для приготовления диагностикума для реакции кцагглютинации напланшетах.Для этого 0,1 мл подобранногоразведения сыворотки смешивают с.0,9 мп 107-ной взвеси стафилококка,перемешивают и разводят 10,0 мл 82400 гФСБ. На полистироловые планшетыс 0 -образным Дном лунок помещаютпо 1 капле диагностикума и по 1 капле исследуемого антигена, взятогов различных разведениях от 10до 10 мг/мл.Планшеты осторожно встряхивают,инкубируют во влажной камере при37 С 2 ч, затем оставляют при комо10 наткой температуре во влажной камере на 4-18 ч. Учет результатовреакции осуществляется по 4 -крестМной системе; 4 + - равномерный"зонтик" по всему дну лунки, 315 зонтик по всему дну, в центренебольшой осадок стафилококка, 2+небольшой "зонтик" и осадок стафилококка, 1+ - маленький зонтиквокруг значительного осадка стафило 20 кокков, отрицательно - отсутствие"зонтика" при выраженном осадкестафилококков в центре лунки,надосадочная жидкость прозрачна.П р и м е р. Сравнительное определение чувствительности реакциикоагглютинации на стекле и планшетах.А. Определение растворимых антигенов легионелл. В реакции коагглютинации на планшетах и на стеклебыл испытан липополисахарид (ЛПС)рпецпюрЬхае 1 серотипа в концентрации 1 мг/мл и последующихдесятикратных разведениях до10 мг/мл. Лля приготовления диагнос 35тикума для постановки РКА на планшетах использовались кроличья сыворотка против легионелл того же штампа в конечном разведении 1=10000Результаты постановки РКА на план=40шетах и стеклах представлены в .таб-.лице. Установлено, что чувствительность РКА на планшетах значительно,на 3 порядка, выше, чем при постановке ее на стекле. При этом для45приготовления диагностикума для РКАна стекле необходимо брать конечныеразведения сыворотки не более чем1:500, для РКА на планшетах -1:10000, т.е, в 20 раз меньшие коли-чества.501182400 Определение ЛПС легионелл в реакции коагглютинацииКонечное разведениесыворотки 4 -5 -6 в диагностикуме На стекле а планшет Составитель В.Дроздовактор А.Лежнина Техред А.Кикемезей КорректорИ.Самборская Тираж 896 ПодписноНИИПИ Государственного комитета СССпо делам изобретений и открытий3035, Москва, Ж, Раушская наб.,аз 6098/4 лиал ППП "Патент",. Ужго л. Проектная,1: 5001: 10000 4 24+ 4 3 1