Способ приготовления монослоя эритроцитов

(51 Ю 2 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСА ЗОБРЕТИДЕТЕЛЬСТВУ 4)(57) СПОСОБОЯ ЭРИТРОЦИТОВй обработки твя агентом, связт л и ч а ю щс целью упрощеничения плотностиности, в качествта используют фи(46) 30.09.85 (72) Д.Ю. Пла (71) Пермский цинский инсти (53) 611-018, (56) Потаинев 1983, 6, 61-6Розстр Н.М.1979, 43, 283Кеппес 1 у 3.1971, 20, 253 ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОНО- путем предваритель" ердофазного носитеывающим эритроциты, и й с ятем, что, я способа и увелимонослоя и стабилье связывающего агентогемагглютинин.118240 Составитель М,ПозникТехред А. Кикемезей Редактор А.Ленина Корректор В,Синицкая Заказ 6098/42 Тираж 896 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к иммуно-. логии и биофизике, и может быть. Использовано в методах иммунологических исследований и для изучения 5 рецепторных функций биологических мембран.Целью изобретения является упрощение,способа и увеличение плотности монослоя и стабильности. 10Монослой эритроцитов готовят путем предварительной обработки твердофазного носителя фитогемагглю. тинина (ФГА), который физически сорбируют на его поверхности,. При 15 контакте сорбированного ФГА с взвесью эритроцитов происходит связывание эритроцитов в монослой на поверхности твердофазного носите. ля. ФГА формирует монослой за счет 20 комплементарного взаимодействия с высокой степенью средства, что увеличивает плотность монослоя . и его стабильность.П р и м е р. В лунки дакриловых 25 микрокамер микродозатором вносят по 12 мкл 0,5 мг/мл ФГА на забу- ференном фосфатами.О, 15 М растворе натрия хлорида с 0,027, азидом натрия, рН 7,2-7,4 (ЗФР-ИаИ 5). После 1 ч 30 экспозиции при комнатной температуре микрокамеры отмывают от несвязавшегося со стенками лунок ФГА трехкратно сплошньпчи заливками ЗФР без азида натрия.350,25 мл плотного осадка эритроцитов отмывают центрифугированием при 1000 об/мин по 10 мин в пяти объемах (по 12 мл) ЗФР. Из конечного осадка готовят 2;0,5 и 0,17 .взвеси эритроцитов в ЗФР, Готовые взвеси отмытых эритроцитов в объеме 20 мкм вносят в лунки отмытых микрокамер с сорбированным ФГА либо производят сплошную заливку микро- камер 10 мл взвесей. Микрокамеры инкубируют в горизонтальном положеонии при 37 С либо при комнатной 1 2температуре 30 или 60 мин. Несвязавшиеся эритроциты отмывают сплошными заливками 4-5 порций ЗФР по10 мп и качатепьными движениями камер в горизонтальной плоскости, ЗФР,удерживающийся в лунках при вертикальном положении микрокамер за счетсил поверхностного натяжения, удаляют однократным стряхиванием микрокамер в перевернутом положении. Плотность монослоев оценивают под световым микроскопом при увеличении 160. Эритроциты выстилают плоское дно и наклонные стенки лунок сплошным монослоем. Участки разрежения отсутствуют, После седиментации 27 взвесей эритроцитов в течение 30 и 60 мин и 0,5 Е взвесей в течение 60 мин в монослоенаблюдают плотно упакованные эритроциты тетра, пента, и гексаэдрической формы . и эритроциты, фиксированныеминимумом своей поверхности и располагающиеся в монослое в виде вертикально стоящих дисков, что в поле зрения проявляется в наличии палочкообразных и гантелеобразных структур. В целом внешний вид монослоя вследствие его большой плотности напоминает картину "булыжной мостовой", что не характерно для монослоев, получаемых при помощи органических поликатионов.Монослои, получаемые согласно предлагаемому способу, стабильны (морфологическая однородность, отсутствие зон спонтанного гемолиза) при хранении под ЗФР без консерванота при 4 С в течение минимум трех суток, в то время как в прототипе сроки сохранности монослоев ограничены одними сутками. Сам способ более доступен и прост в осуществлении, Вместо мало доступных и дорогих импортных препаратов поликатионов используют коммерческий препарат ФГА, выпускаемый серийно отечественной промышленностью.