Способ обнаружения противохолерных антител в сыворотке крови

ОП ИСАНИЕ И ЗОБРЕТЕ Н И Я 40 О 618 Союз Советских Социалистических РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ельстваявцсимое от авт. Свпд дявлсцо ОЗ.Х 11;1970 (Ю 527097/31 Ч.Кл, С 12 с 1/00С) 01 П 33/16 и -присоединением здя асударственный комитетСовета Министров СССРпо делам изоаретенийи открытий иоритет -юллстсць4.Х,197 6,8,097,5;616. 932 (088.8) цубликоваю исация 8 Х.1974 та опубликования Авторызобрстсция Гивецталь и 3,ольева Заявител СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ПРО АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ ОХОЛ ЕРНЫХВИ Изооретецие относится к медицине.Известны ссрологические методы исследования при диагностике холеры, т. е. ооцдружеие спсцифичсскцх иротивохолерцых ацтите. В сыворотке крови ца основании реакции агГлОтицации.Цель изооретсция - ускорение и упрощение процесса обнаружения противохолериых антител в сыворотке крови.Это достигается тем, что взвесь индикаторного штамма холерного вибриона смешивают с исследуемой сывороткой и результат учитывают при помощи фазово-контрастной микроскопии по ооразовдишо конгломератов. Прих 1 ер.А. Агаровую культуру, выдержанную в течениеО - 24 час, индикаторного штамма эмульгируют в 1%-пог центонной воде или в физиологическом рСтворе поваренной соли, густота взвеси 2 - 3 л 1,у)д, микробных тел В 1 .ц.г ио оптическому стандарту.Ь. Готовят коцтрольиый препарат, для чего цд хорошо обезжиренное предметное стекло больцюй б)яктериологц еской истлей цаюсят каплю вз 1;еси индикаторного штамма, цакрывгцот покровцым стеклом и рассматривают в с 1)азово-контрастном микроскопе с объективов 40 х, наблюдают характерную морфологию и подвижность холерного вибриона,В. На другое предметное стекло большойпетлей наносят каплю испытуемой сыворотки,взятуО зтОЙ жс истлец к)ил 0 ВзГаси ццдик 1 торного штамма смспшвдют с кя)лей сыворот 5 ки, накрывают цокровиым стеклом и рассматривают также, кяк и коцтрольцьи препарат.При наличии в исггытуехОй сыворотке специфических антител наблюдают склеивание ииммобилизацию вибрионов (время цаблюде 1 О ция кяждОГО препарата От нескольких секунддо 3 - 5 .)ин).Оценку интенсивности реакции производятследующим образом:четыре крестя- к цдчялу про 15 смотра препарата почти все ггц)риоцы склееныВ коа 1 пяктцье кОПГ 10 мер)ты. В течсцие нескольких секунд а 10 жцо цдблоддть б)есгОрялочцые колеоательцыс илц вращательные движецця Отделы)ых кг)ПГлоаердтов, 11 здтс) Пол 20 ну 0 цсцодвцжцость их",три креста (+ -,-+) - коцгломсраты Оорязк)тся с некоторой зяде 1)жкОЙ (1 - 2 л 1 н), цотакие же компактные, кяк ц в случае четырсхкрестовой оцсцкц;25 двд крестя- ооразовяцце рьхлыхц мецъци 1 х ПО размеру коиГлоа 1 срдтов ца про.тяжеции 2 - 4,ин после соединения сыворотки с культурой, конгломераты и отдельные осо.би микробов могут оставаться подвижными в30 течение 3 - 4 тгн.400618 Предмет изобретения Составитель С, ШеневаТекред 3, Тараненко Корректор Т. Хворова Редактор Ю. Агапова Заказ 7619 Изд. ЪЪ 203 Тираж 467 Подписное ЦИИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делагя изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская цаб., д. 4/5Загорская типография 3один крее"г (+) - медленное (1 - 5 иин) образование небольших рыхлых подвижных конгломератог; часть образовавшихся конгломератов распадается на изолированные виорионы, другие вибрионы снова склеиваются вебольшие рыхлые конгломераты; имеется много подвижных микробов.Г. Неразведенные сыворотки, давшие положительную реакцию (образование конгломератов) следует раститровать так, чтобы получить разведение 1:10, 1:20, 1:40, 1:80 Для этого готовят дополнительно для каждойположительной сыворотки ряд из 4 пробирок; в первую пробирку ряда вносят 0,9 мл 1%-ной пептонной воды или физиологического раствора, в остальные по 0,5 мл; в первую пробирку добавляют 0,1 лл соответствующей сыворотки и затем переносят последовательно из одной пробирки в другую по 0,5 я.г. С каждым из полученных разведений сыворотки поступают так жс, как указано в пункте В.Д, Как положительную реакцию в том или ином разведении учитывают лишь реакции, оцениваемые не ниже, чем на дга креста .Е. Определение титра специфических антител в сыворотке производится по наибольшему разведению сыворотки, вызвавшему феномен склеивания вибрионов, оцениваемому не ниже чем на 2 креста, При этом следует иметь в виду, что разведение сыворотки в ряду проонрок соответствует удвоенное окончателыгос разведение сыворотки на стекле (петля разведения сыворотки плюс петля взвеси вибриона). Та ким образом, реакцию на стекле с неразведенной сывороткой оценивают как реакцию в разведении 1:2, с сывороткой 1:10 - как реакцию в разведении 1:20 и т. д,1 О Ж, Диагностическое значение имеет резкоположительная реакция (на 3 - 4 креста) в разведении 1:2. (одно-двухкрестовая реакция в этом разведении может носить неспецпфпческий характер), Более активные сыворотки (с 15 высокими титрами специфических антител) дают положительные реакции (не ниже, чем на два креста) в разведениях 1:20 - 1:320. Такие реакции, как правило, совпадают с высокими титрами агглютининов или вибрациоцндных 20 антител. Способ обнаружения противохолерных анти тел в сыворотке крови, основанный на взаимодействии антигена с антителом, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, взвесь индикаторного штамма холерного вибриона смешивают с исследуемой сыво- ЗО роткой и результат учитывают при помощи фазово-контрастной микроскопии по образованшо конгломератов.