Способ определения белка в молоке и молочных продуктах

Ь ГОСУДАРСТВЕННЫЙ. НОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТН К АВТОРСКОМУ С(71) Омский ордена Ленина сельскохозяйственный институт им. С.М. Ки- рова(56) 1 Авторское свидетельство СССР859921, кл. 6 01 В 33/04, 1979,2. Инихов Г.С., Брио Н.П. Методы анализа молока и молочных про- дуктов. Пищевая промышленность, 1971, с. 129-131.(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКАВ МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ, предусматривающий отбор анализируемойпробы, окрашивание ее кислым красителем и измерение оптической плотности, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности, перед окрашиванием анализируемую пробу наносят на хроматографическуюбумагу и фиксируют ее нагреванием,затем отмывают краситель, не связанный с белком, и злюируют связанный с белком краситель,а определениебелка осуществляют в зависимости отоптической плотности связанного белком раствора красителя.10 Изобретение относится к молочнойпромышленности, а именно к определению белка в молоке и молочных продуктах колориметрическим методом.Известен способ определения белкав молоке и молочных продуктах по связыванию красителей, основанный наопределении оптической плотностираствора краски до и после коагуляции белков, включающий смешиваниемолока с раствором красителя, последующее отделение белково-красочного компонента и колориметрирование фильтра 1 .Недостаток данного способа заключается в невозможности применения 15.их для определения белка в молочныхпродуктах, содержащих незначительноеколичество белковых компонентов (молочная сыворотка, молочный сахар).Известен также способ определения 20белка в молоке и молочных продуктах,предусматривающий отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислымкрасителем и измерение оптическойплотности 2 .25Однако такой способ характеризуется недостаточной точностью, таккак результаты опредения белка зависят от полноты осаждения его кислым красителем. В свою очередь полнота осаждения зависит от многихфакторов:рН молока или молочного продукта, процентного содержания белковых фракций, заряда этих фракций, которые меняются в зависимости от лактации, породы скота, кормления и т.д.Оказывает влияние на полноту осаждения свойства и качество самогокрасителя и ряд других факторов. Поэтому при определении количествабелка учесть влияние всех Факторовна точность определения и сделатьсоответствующие поправки довольнотрудно,Кроме того, данный способ определения белка может быть использован 45только для молока и молочных продуктов, имеющих значительное процентное содержание белка, и .совершенноне применим для определения белкав таких молочных продуктах, как молочная сыворотка и молочный сахар,где осадить полностью сывороточныебелки практически невозможно ни одним из известных методов, тем болеекислым красителем. 55Цель изобретения - повышение точности определения.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу определения белка в молоке и молочных продуктах,предусматривающему отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислымкрасителем и изме-ение оптическойплотности, перед окрашиванием анализируе)ую пробу наносят на хроматографическую бумагу и фиксируют ее нагреванием, затем отмывают краситель, не связанный с белком, и элюируют связанный с белком краситель, а определение белка осуществляют в зависимости от оптической плотности связанного белком раствора красителя.Способ осуществляют следующим образом.Для анализа микропипеткой берут 0,3 мл средней пробы молока или какого-либо молочного продукта и наносят это количество на полоску хроматографической бумаги марки фМ, Через 1 мин после того, как исследуемый раствор впитается хроматографической бумагой, полоску этой бумаги помещают в термостат при 100- 105 С на 5 мин, В результате высоковтемпературного воздействия белки, содержащиеся в исследуемой пробе, коагулируют на волокнах хроматографической бумаги, образуя с ними прочное соединение. После этого полоску бумаги с нанесенными пробами помещают в один из известных белковых красителей на 5 мин при 20 С.оДля анализа молока и молочных продуктов, содержащих значительное количество белка (0,5 и выше), применяют краситель амидочерный 10 Б, который готовят следующим образом: в 1 л воды вносят 2,08 г динатрийфосфата (ИаНРО 4 2 НО) и 15,8 г лимонной кислоты, после их растворения вносят 0,8 г амидочерного 10 Б,Для анализа молочных продуктов с концентрацией белка ниже 0,5 и молочной сыворотки применяют краситель бромфенолблау, который получают растворением 0,2 г бромфенолблау и 1 г НдС 1 в 100 мл 2-ной СНСООН или же растворением 2 г ИН 4 С 1, 10 г калолия и 1 г бромфенолблау в 1 л дистиллированной воды, через сутки красители Фильтруют и используют, После окрашивания проводят операцию отмывки красителя, не связанного с белками. При применении красителя амидочерный 10 Б отмывку осуществляют в 7-ном растворе уксусной кислоты, а при применении бромфенолблау отмывку проводят в 2",-ном растворе уксусной кислоты. После промывки полоски хроматографической бумаги просушивают при 18-20 С и хранят в темном месте до проведения колориметрирования. Если же колориметрирование проводят сразу после промывки, то окрашенные пятна белка вырезают и для элюирования связанной белком краски помещают в 1-ный раствор ИаОН, Элюирование осуществляют в пробирках на 20 мл в течение 5- 7 мин до полного осветления кружков хроматографической бумаги, на ко1064194 Показатели Метод Уди(прототип) Кьельдаля Гололобова и Павловой Предлагаемый Время, затраченноена 10 анализов, мин 340 80 25-30 60 1,5-2 Ошибка метода, Ъ 45 Разрешаюцая способность (определяемый минимум белка, содержащегося в продукте), Ъ 0,1 Молоко 0,005Сыворотка 0,001 0,05 0,1 Стоимость одного анализа, р 0,22 0,02 0,04 0,06 Составитель Н, АрцыбашевачТехред Л, Пилипенко Корректор М. Шароши Редактор С. Пекарь Тираж 873 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 10514/45 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 торые была нанесена анализируемая проба молочного продукта.Колориметрирование проводят с помощью кювет на 15 мл на любом фотоколориметре, например ФЭК-М, с синим светофильтром (длина волны 575-590.мм), Содержание белка (в процентах) находят по калибровочному графику, откладывая на оси ординат соответствующую найденную оптическую плотность, Построение калибровочного графика осуществляютобщепринятым методом.Таким образом, изобретение позволяет повысить точность способа, так как его результаты совершенно 15 не зависят от полноты осаждения белка под действием красителя. Все белковые компоненты раствора впитываются в хроматографическую бумагу и .фиксируются в ней высокотемператур ной обработкой. В результате того, что белковые молекулы пробы, связанные с волокнами бумаги, удерживают около себя молекулы красителя, а 1 не коагулируют с ними, что имеет место в прототипе, появляется воэможность улавливать исключительно малые количества белха в молочных или каких-либо других продуктах, содержащих белок. При этом разрешающая способность (определяемый минимум белка, содержац 1 ийся в продукте и выраженный в Ъ) предлагаемого способа превышает известный в том числе арбитражный метод Кьельдаля и составляет для сыворотки 0,001%, а для молока 0,005 за счет улавливания значительно меньшего количества белка.В таблице представлены результаты определения белка известными и предлагаемым методами.Как следует из таблицы, предлагаемый способ имеет относительно высокую точность по сравнению с аналогичными, наименьшую стоимость анализа, экономит время и обладает высокой разрешаюцей способностью, превышающей арбитражный метод Кьельдаля.